測(cè)定復(fù)方魚(yú)腥草片中金絲桃苷的含量

1、測(cè)定復(fù)方魚(yú)腥草片中金絲桃苷的含量【摘要】目的 用 RP-HPLC法測(cè)定復(fù)方魚(yú)腥草片中金絲桃苷的含量。方法 HPLC用外標(biāo)一點(diǎn)法 , Kromasil C-18 柱, 乙腈 -%磷酸溶液 (18:82) 為流動(dòng)相 , 柱溫為 30, 流速為 /min, =360nm。結(jié)果 金絲桃苷在 g 范圍內(nèi)呈良好線性 , 回歸方程為 Y=,R2=, 平均加樣回收率 %,RSD%為%(n=9)。結(jié)論 方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確 , 專(zhuān)屬性強(qiáng) , 測(cè)定結(jié)果重復(fù)性好。為復(fù)方魚(yú)腥草片中魚(yú)腥草的定量分析提供了科學(xué)有效的方法。【關(guān)鍵詞】復(fù)方魚(yú)腥草片 ; 金絲桃苷 ;HPLC【Abstract 】ObjectiveTo establ

2、ishthe method for deteminingthe content of hyperosidein Fufang Yuxingcao Pion by RP-HPLC.MethodsUsing Kromasil C18Column, % phosphoricacidsolution(18:82)as the mobile phase,detection wavelength as 360nm andcolumn temperature as 30. The flow rate was /The calibrationcurvewas linear at a range of gfor

3、 the hyperosideand linear equation wasY= The averagerecovery was % and the related standard deviation(RSD)was %(n=9). ConclusionThis method was simple and accurate andproper,which can be provide for scientific quantitative analysis method of hyeroside in Fufang Yuxingcao Pion,and the reduplicate of

4、the result was good.【Key words 】fufang yuxingcao tablet; hyperoside;RP-HPLC復(fù)方魚(yú)腥草片為中國(guó)藥典收載品種 , 亦為民間常用藥 , 具有清熱解毒的功效 , 用于外感風(fēng)熱所致的急喉痹、急乳蛾, 癥見(jiàn)咽部紅腫、咽痛 ; 急性咽炎、急性扁桃體炎見(jiàn)上述癥候者。本方由魚(yú)腥草、黃芩、金銀花、連翹等 5 味中藥經(jīng)提取加工制成。據(jù)現(xiàn)行藥典及多數(shù)文獻(xiàn)的報(bào)道 , 對(duì)復(fù)方魚(yú)腥草片的質(zhì)量控制多以黃芩苷作為指標(biāo)進(jìn)行研究。 而在實(shí)際處方中 , 魚(yú)腥草所占的量高達(dá)一半以上 , 為君藥 , 故控制其中的魚(yú)腥草的含量極其必要。 現(xiàn)經(jīng)實(shí)驗(yàn)論證 , 對(duì)方中的

5、魚(yú)腥草中所含的金絲桃苷的含量測(cè)定方法進(jìn)行方法學(xué)研究 , 認(rèn)為線性、重復(fù)性、回收率、精密度等均較理想。1儀器與試藥Agilent 1100 系列高效液相色譜儀、 G1322A(DEGASSER)溶劑脫氣器、G1311A(QuatPump)四元泵、 G1313(ALS)自動(dòng)進(jìn)樣器、 G1316A(COLOM)柱溫箱、G1315B(DAD)檢測(cè)器及 Agilent 工作站 ;UV- 可見(jiàn)紫外分光光度計(jì) (SHIMADZU);乙腈為色譜純 , 其余均為分析純 ; 對(duì)照品金絲桃苷Hyperoside( 批號(hào) 1521-20XX02)購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所; 樣品復(fù)方魚(yú)腥草片由海正藥業(yè)提供( 批號(hào)為0

6、50301,050302,050303)。2測(cè)定方法的研究測(cè)定波長(zhǎng)的確定取金絲桃苷的甲醇溶液做光譜圖測(cè)定, 在360nm處有最大吸收, 故檢測(cè)波長(zhǎng)選定360nm。流動(dòng)相的選擇根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及中國(guó)藥典的采用的流動(dòng)相, 比較了 (1)乙腈 - 甲醇 - 四氫呋喃(1:1:);(2)乙腈 -%磷酸 (16:84),并設(shè)定柱溫為30。根據(jù)上述二種流動(dòng)相的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 認(rèn)為流動(dòng)相 (2) 較理想。經(jīng)調(diào)整 , 將”色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)”確定為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈 -%磷酸 (W/V)(18:82) 為流動(dòng)相 ; 流速為 /min; 檢測(cè)波長(zhǎng) :360nm; 柱溫 30。理論板數(shù)按金絲桃苷

7、峰計(jì)算應(yīng)不低于 4000。色譜圖 1、2、3。圖 1 金絲桃苷對(duì)照品色譜圖 2復(fù)方魚(yú)腥草片樣品圖圖3缺魚(yú)腥草陰性樣品圖提取方法選擇經(jīng)查閱相關(guān)資料 , 對(duì)提取方法、提取溶劑、溶劑用量、提取時(shí)間進(jìn)行考察 , 采用正交表 L9(34) 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)表 1,2 。表 1復(fù)方魚(yú)腥草片含量測(cè)定法正交試驗(yàn)的因素表2復(fù)方魚(yú)腥草片含量測(cè)定法正交試驗(yàn)的計(jì)算從對(duì)金絲桃苷進(jìn)行正交試驗(yàn)的簡(jiǎn)單計(jì)算來(lái)看, 其中提取方法的影響相對(duì)較為明顯 , 它的極差最大 , 其余各項(xiàng)的極差小 , 說(shuō)明這些因素對(duì)金絲桃苷幾乎沒(méi)有什么影響。結(jié)合經(jīng)濟(jì)和環(huán)保等因素以及相對(duì)比較考慮, 認(rèn)為最佳的提取方案為采用60%的乙醇 , 加入樣品 50 倍量的

8、溶劑 , 回流提取 40min。按此條件 , 又對(duì)同一批樣品進(jìn)行復(fù)核試驗(yàn) , 根據(jù)復(fù)核試驗(yàn)的結(jié)果 , 金絲桃苷的平均含量為 /g, 與正交試驗(yàn)中的最大值 /g 相比較提高 %,由此證明所選最佳方案比較合理的。標(biāo)準(zhǔn)曲線、定量限、檢測(cè)限將對(duì)照品金絲桃苷配制成不同濃度的溶液, 如表3。表3線性關(guān)系考察對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備對(duì)照品溶液的配制取經(jīng)真空干燥 24h 的金絲桃苷對(duì)照品 , 精密稱(chēng)定 , 置 50ml 量瓶中 , 加甲醇使溶解 , 并稀釋至刻度 , 搖勻備用。精密吸取上述對(duì)照品溶液 1ml, 置 10ml 量瓶中 , 加甲醇稀釋至刻度 , 搖勻 , 制成每 1ml 含金絲桃苷25g 的溶

9、液 , 作為對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備取本品 20 片, 除去包衣 , 精密稱(chēng)定 , 研細(xì), 取,置圓底燒瓶中 , 精密加入 60%乙醇 50ml, 稱(chēng)定重量 , 加熱回流提取 40min, 放冷 , 再稱(chēng)定重量 , 用 60%乙醇補(bǔ)足減失的重量 , 搖勻 , 濾過(guò) , 取續(xù)濾液 25ml, 蒸干 , 殘?jiān)?0%乙醇溶解并定容到 5ml 量瓶中 , 搖勻 , 以微孔濾膜 ( m)濾過(guò) , 取續(xù)濾液作為供試品溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l,注入液相色譜儀,測(cè)定, 即得。重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為 050301 的本品 , 按上述供試品溶液的制備方法 , 制備 6 份樣品 ,

10、按法測(cè)定 , 結(jié)果見(jiàn)表 4。表 4重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取本品 ( 批號(hào) :050301) 測(cè)定量的半量按高、 中、低取樣品各 3 份 , 分別加入濃度為 /ml 的金絲桃苷對(duì)照品溶液、 , 按上述供試品溶液的制備方法 , 按法測(cè)定。見(jiàn)表5。表 5回收率試驗(yàn)結(jié)果精密度和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為 050301 的樣品 , 精密稱(chēng)定 , 按制備方法制成供試品溶液 , 同法測(cè)定 6 次 , 金絲桃苷的 RSD為 %。見(jiàn)表 6。 表 6精密度試驗(yàn)取同一樣品分別在0、1、2、4、12、 24h 測(cè)定 , 金絲桃苷的 RSD為 %,說(shuō)明該成分在制劑中提取后較為穩(wěn)定。見(jiàn)表7。表 7穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品測(cè)定取批號(hào)為 050301、 050302、 050303 的三批復(fù)方魚(yú)腥草片樣品 , 分別進(jìn)行測(cè)定 , 結(jié)果見(jiàn)表 8。表 8樣品測(cè)定表由上述結(jié)果可知, 此含量測(cè)定方法可運(yùn)用于復(fù)方魚(yú)腥草片中金絲桃苷的含量測(cè)定。3 討論本品樣品的制備條件 , 經(jīng)按正交設(shè)計(jì)多因素提取比較, 也進(jìn)行了方差分析 , 結(jié)果幾乎不呈顯著性 , 說(shuō)明金絲桃苷在所設(shè)的因素中互相影響較小 , 也說(shuō)明它在甲