Sonichedgehog信號通路在結直腸癌發(fā)生發(fā)展的進程中作用機制研究

1、    sonichedgehog信號通路在結直腸癌發(fā)生發(fā)展的進程中作用機制研究    孫志濤【摘 要】：目的：研究sonic hedgehog信號通路在結直腸癌發(fā)生發(fā)展的進程中作用機制。方法：隨機選擇2019年1月-2019年12月至我院行結直腸癌手術的患者40例。取所有患者術中病灶部位組織和距離腫瘤10cm以上的正常粘膜組織行免疫組化檢查，比較患者正常結直腸組織和結直腸癌組織中shh的表達情況以及陽性表達率。結果：正常組織中shh表達以（-）、+為主，癌組織中表達以+、+表達為主。正常組織中shh表達陽性率為2.5%，明顯低于癌組織中82.50%，且

2、具有統(tǒng)計學差異（p【關鍵詞】：shh、結直腸癌;傳導通路結直腸癌是臨床常見的惡性腫瘤，但是其病因病機尚未完全明確。配體音刺猬因子（sonic hedgehog，shh）是哺乳動物hedgehog（hh）信號通路的主要成員之一，其介導的做種靶基因在脊椎動物的胚胎發(fā)育過程中起到重要的作用1。而研究發(fā)現(xiàn)，hh信號通路發(fā)生異?；罨吓c腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。為了觀察shh信號通路在結直腸癌發(fā)生發(fā)展進程中的作用機制，我院進行了本次研究，以便為結直腸癌的治療尋找新的靶點。1 資料與方法1.1 患者選擇隨機選擇2019年1月-2019年12月至我院行結直腸癌手術的患者40例進行臨床研究。所有患者均由術后病理

3、檢查確定診斷。其中男性患者27例，女性患者13例，年齡41-76歲，平均年齡（57.33±6.33）歲，病變部位升結腸7例，橫結腸6例，降結腸8例，乙狀結腸11例，直腸8例。所有患者術前均未給予放化療以及免疫治療。1.2 方法1.2.1 研究方法取所有患者術中病灶部位組織和距離腫瘤10cm以上的正常粘膜組織。將取得組織修剪成 1.5 cm×2.0cm ×0.3cm大小的組織塊置于10% 中性甲醛溶液中固定8-24 h ，常規(guī)制備蠟塊，放置于- 20，冰箱干燥保存，行免疫組化方法檢測。免疫免疫組化實驗中所需試劑兔抗人shh單克隆抗體、sp試劑盒、dab顯色試劑盒均購

4、自北京中杉金橋公司。sabc免疫組化試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。采集到的患者病理組織常規(guī)制成蠟塊，組織切片，在68下烤片12h，常規(guī)行二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，放置于98的edta緩沖液中煮沸3min，自然冷卻20min，冷水沖洗高壓鍋至室溫，pbs沖洗3次，每次2min，以修復抗原。阻斷滅活內源性過氧化物酶，滴加一抗，室溫放置3h，使用pbs沖洗3次，每次2min，滴加二抗，37孵育30min，pbs沖洗3次，每次2min，給予dab反應染色，常規(guī)脫水，透明、干燥、封片。（實驗過程太陳舊）1.2.2 分析指標比較患者正常結直腸組織和結直腸癌組織中shh的表達情況以及陽性表達率。shh

5、在細胞質上出現(xiàn)棕黃色染色為陽性細胞，使用半定量積分法進行評估2，細胞無染色為（-），淡黃色為+，淺棕黃色為+，棕黃色為+，深棕黃色或者棕褐色為+，其中（-）、+為陰性，+、+、+為陽性。1.3 數(shù)據處理用spss19.0統(tǒng)計學數(shù)據處理軟件處理研究中所有相關數(shù)據，計數(shù)資料采用（n，%）表示，采用2檢驗，以 p 2 結果正常組織中shh表達以（-）、+為主，癌組織中表達以+、+表達為主。正常組織中shh表達陽性率為2.5%，明顯低于癌組織中82.50%，且具有統(tǒng)計學差異（p<0.05），詳見表1、表2。3 討論hh信號通路與結直腸癌的發(fā)生和發(fā)展之間的關系仍然處于研究中。monzo3等研究發(fā)現(xiàn)

6、shh在57例結直腸癌患者中腫瘤組織的表達水平明顯高于正常組織。但是chatel等在7中結直腸癌細胞系中沒有1個細胞系表達出完整的hh信號通路成員，因此對于shh在結直腸癌中的作用和作用機制仍然有所爭議。hedgehog（hh）信號分子是由信號細胞所分泌，通常作用范圍在20個細胞之內，其生產在時間和空間上均被嚴格限制，能夠在n端不同的氨基酸殘基微單發(fā)生膽固醇化和軟脂?；揎?，進而達到制約其擴散的目的，同時能夠增強與質膜的親和性4。當hh結合靶細胞膜上受體ptc之后，能夠釋放smo受體以阻斷pthc蛋白的功能，進而在腫瘤細胞的發(fā)生和發(fā)展的過程中起到作用。從本次研究來看，正常組織中shh表達以（-）、+為主，癌組織中表達以+、+表達為主。正常組織中shh表達陽性率為2.5%，明顯低于癌組織中82.50%，說明sonichedgehog信號通路在結直腸癌病灶中呈現(xiàn)高表達，提示與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展有關。參考文獻付祥勝.結直腸癌中hedgehog信號通路的配體依賴性活性改變及其表觀修飾機制研究d.南方醫(yī)科大學，2009.翁子毅，子樹明，楊明，等.hedgehog信號通路活化在結直腸病變的意義j.上海醫(yī)學，2011（05）：3+55-57.王華，李奇奇，朱子清，等.結直腸癌中hedgehog信號通路的研