PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置儀器配置學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置儀器實(shí)驗(yàn)室設(shè)置儀器(yq)配置配置第一頁，共19頁。PCRPCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則PCR實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級(jí)實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級(jí)0102各區(qū)的工作內(nèi)容及配置各區(qū)的工作內(nèi)容及配置03實(shí)驗(yàn)室配置及預(yù)算實(shí)驗(yàn)室配置及預(yù)算04第1頁/共18頁第二頁，共19頁。生物生物(shngw)安全的概念安全的概念生物安全是指由動(dòng)物、植物、微生物等生物體給人類健康和自然環(huán)境造成的危害以及人們所采取(ciq)的防范措施。生物安全是一個(gè)廣義的概念，它涉及三個(gè)方面：外來物種遷入導(dǎo)致的原生態(tài)系統(tǒng)不良改變或破壞；人為(rnwi)造成的環(huán)境劇烈變化危機(jī)生物的多樣性；科學(xué)研究、開發(fā)、生產(chǎn)和

2、應(yīng)用中，病原或變異生物體的泄露對(duì)人類健康或生存環(huán)境所造成的危害。第2頁/共18頁第三頁，共19頁。1. 1. 危害等級(jí)危害等級(jí)I I （低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、（低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。病毒和寄生蟲等生物因子。2. 2. 危害等級(jí)危害等級(jí) ( (中等個(gè)體危害，有限群體危害中等個(gè)體危害，有限群體危害) )能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)

3、重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。3. 3. 危害等級(jí)危害等級(jí) III III （高個(gè)體危害，低群體危害）（高個(gè)體危害，低群體危害）能引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，能引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體?；蚰苁褂每股?、抗寄生蟲藥治療的病原體。4. 4. 危害等級(jí)危害等級(jí) ( (高個(gè)體危害，高群體危害高個(gè)體危害，高群體危害) )能引起人類或動(dòng)物非常能引起人類或動(dòng)物非常(fic

4、hng)(fichng)嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病原體。在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病原體。生物生物(shngw)(shngw)因子危害程度分級(jí)因子危害程度分級(jí)第3頁/共18頁第四頁，共19頁。根據(jù)安全防護(hù)等級(jí)，分子生物實(shí)驗(yàn)室一般(ybn)分為以下四級(jí)：第4頁/共18頁第五頁，共19頁。依據(jù)： 衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床(ln chun)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號(hào)） 醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床(ln chun)基因擴(kuò)增管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)

5、政發(fā)2010194號(hào)） 第5頁/共18頁第六頁，共19頁?！笆挚谠E(kuju)”第6頁/共18頁第七頁，共19頁。第7頁/共18頁第八頁，共19頁。標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動(dòng)；擴(kuò)增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動(dòng)；第8頁/共18頁第九頁，共19頁。工作流向?qū)Ｓ米呃犬a(chǎn)物分析區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向第9頁/共18頁第十頁，共19頁。第10頁/共18頁第十一頁，共19頁。傳遞傳遞(chund)窗：雙刃劍窗：雙刃劍方便試劑物品在不同實(shí)驗(yàn)區(qū)間的傳遞方便試劑物品在不同實(shí)驗(yàn)區(qū)間的傳遞(chund)；增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)；增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)

6、；設(shè)計(jì)原則：設(shè)計(jì)原則：1.必須為雙開門密封嚴(yán)實(shí)的；必須為雙開門密封嚴(yán)實(shí)的；2.兩邊門最好是連鎖裝置；兩邊門最好是連鎖裝置；3.傳遞傳遞(chund)窗內(nèi)應(yīng)有紫外照射裝置；窗內(nèi)應(yīng)有紫外照射裝置；第11頁/共18頁第十二頁，共19頁。試劑準(zhǔn)備(zhnbi)區(qū)主要進(jìn)行試劑的儲(chǔ)存、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。該區(qū)對(duì)于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（2-8、-20），用于試劑的儲(chǔ)存；2、超凈工作臺(tái)（最好配備），試劑配制的區(qū)域(qy)；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯） ，用于試劑配制

7、；4、掌上迷你離心機(jī)；5、震蕩混勻儀；6、離心管架、廢液缸（利器盒）等；7、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；8、安全級(jí)防護(hù)品：移動(dòng)紫外線燈、專用工作服、9、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；第12頁/共18頁第十三頁，共19頁。標(biāo)本制備(zhbi)區(qū)主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域（擴(kuò)增區(qū)）為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（

8、2-8、-20或-80 ）；2、生物安全柜；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯） ；第13頁/共18頁第十四頁，共19頁。4、高速臺(tái)式離心機(jī)（冷凍）、掌上迷你離心機(jī)（雙轉(zhuǎn)子）；5、水浴鍋或金屬浴；6、震蕩混勻儀；7、離心管架、廢液缸（利器盒）等；8、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；9、安全級(jí)防護(hù)品：移動(dòng)紫外線燈、專用工作服、10、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；11、核酸提取儀；標(biāo)本制備區(qū)是唯一直接與標(biāo)本接觸的區(qū)域，因此要注意生物安全問題，應(yīng)有洗眼器、并配備(pibi)一個(gè)急救箱，

9、箱內(nèi)可放置75%乙醇、棉簽、創(chuàng)可貼等急用藥具。第14頁/共18頁第十五頁，共19頁。該區(qū)主要進(jìn)行PCR擴(kuò)增，本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域（樣本制備區(qū)）為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。所需的主要物品包括：1、實(shí)時(shí)熒光PCR儀（含電腦打印機(jī)等）；2、移動(dòng)(ydng)紫外線燈；3、專用工作服；4、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙第15頁/共18頁第十六頁，共19頁。第16頁/共18頁第十七頁，共19頁。第17頁/共18頁第十八頁，共19頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)會(huì)計(jì)學(xué)。人為造成的環(huán)境劇烈變化危機(jī)生物的多樣性。各區(qū)必須有明確的標(biāo)記，避免不同區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。1. 工作流向（進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室方向）：為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)