【藥健康】醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗免疫學(xué)教研室間接凝集抑制試驗沉淀反應(yīng)實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康膐 掌握間接凝集抑制試驗、沉淀反應(yīng)的操作及結(jié)果的正確觀察、判斷.o 熟悉間接凝集抑制試驗、沉淀反應(yīng)的原理.o 了解間接凝集抑制試驗、沉淀反應(yīng)的用途.間接凝集抑制實驗間接凝集抑制實驗分類及概念血清學(xué)反應(yīng)血清學(xué)反應(yīng): 在血清中進行的抗原抗體反應(yīng). 凝集反應(yīng)凝集反應(yīng): 在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中，顆粒性抗原和相在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中，顆粒性抗原和相應(yīng)抗體反應(yīng)能夠產(chǎn)生肉眼可見的凝塊應(yīng)抗體反應(yīng)能夠產(chǎn)生肉眼可見的凝塊。 注意以下幾個方面:第一第一: 參與反應(yīng)的抗原必須是體積較大的顆粒性抗原，比如說細菌、紅細胞等，都屬于顆粒性抗原的范疇。第二

2、第二: 必須是相應(yīng)的抗原抗體才能發(fā)生凝集反應(yīng)第三第三: 必須有電解質(zhì)的參與第四第四: 凝集塊是一種肉眼能夠見到的細小均勻塊狀物質(zhì)。 間接凝集抑制試驗o 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后并不能產(chǎn)生凝集反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后并不能產(chǎn)生凝集反應(yīng)，怎樣才能用肉眼就能觀察到可溶性抗原與相應(yīng)抗體的結(jié)合呢？ 實驗原理實驗原理間接凝集示意圖間接凝集示意圖:間接凝集抑制示意圖間接凝集抑制示意圖:妊娠免疫診斷試驗妊娠免疫診斷試驗 o 孕婦尿中，絨毛膜促性腺激素（hcg）含量明顯增高。（hcg是可溶 性抗原 ）o 反之，非孕婦尿中hcg含量甚微，不足以消耗掉抗hcg抗體。 試驗材料o 1、標本：、標本：非孕婦、待

3、檢尿o 、試劑：、試劑：兔抗人hcg血清、hcg致敏的乳膠顆粒o 、器材：、器材：載玻片、滴管、玻棒實驗方法 加尿液標本加尿液標本 加兔抗人加兔抗人hcg免疫血清免疫血清 加加hcg致敏的乳膠顆粒致敏的乳膠顆粒 觀察結(jié)果觀察結(jié)果待檢尿非孕婦尿混勻靜置2分鐘混勻靜置2分鐘實驗結(jié)果o 非孕婦尿非孕婦尿 出現(xiàn)均勻一致的白色細小凝集物。o 待檢尿待檢尿 若出現(xiàn)凝集則為hcg陰性，若仍呈均勻渾濁乳狀液則為hcg陽性。注意事項注意事項 o在加入抗hcg血清后，一定要將其一定要將其充分混勻，靜充分混勻，靜置置1-2分鐘分鐘后再進行下一步，這是為了使可溶性抗原與抗體能夠充分反應(yīng)，以免其反應(yīng)不足造成假陽性。o本

4、次實驗中，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的為實驗陰性，本次實驗中，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的為實驗陰性，不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的反而為陽性。不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的反而為陽性。 臨床意義臨床意義 o人工流產(chǎn)或剖宮術(shù)后無胎盤組織殘留者，hcg轉(zhuǎn)為陰性。o絨毛膜上皮癌、葡萄胎及睪丸畸胎瘤病人尿中，hcg含量遠較正常妊娠尿液為高，將尿液作1 200稀釋后仍可呈陽性反應(yīng)。o術(shù)后可轉(zhuǎn)為陰性，若仍為陽性應(yīng)考濾手術(shù)不徹底或腫瘤已有轉(zhuǎn)移。沉沉 淀淀 反反 應(yīng)應(yīng)基本概念基本概念o 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)：可溶性抗原可溶性抗原與相應(yīng)的抗體結(jié) 合，在有適量電解質(zhì)存在的條件下，形成肉眼可見肉眼可見的沉淀物的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)的種類可分為環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀反

5、應(yīng)和瓊脂擴散等。 可溶性可溶性ag 相應(yīng)相應(yīng)ab 肉眼可見沉淀物肉眼可見沉淀物電解質(zhì)電解質(zhì)比例適當比例適當分類： 沉沉 淀淀 反反 應(yīng)應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)絮狀反應(yīng)絮狀反應(yīng)瓊脂擴散瓊脂擴散單向擴散單向擴散雙向擴散雙向擴散電泳電泳火箭電泳火箭電泳對流免疫電泳對流免疫電泳單向擴散o 即將定量的抗體混合于瓊脂中，待瓊脂凝固后打孔加入抗原，孔中的抗原向四周擴散，在抗原與抗體的比例合適處呈現(xiàn)白色的沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的大小與抗原的沉淀環(huán)的大小與抗原的濃度成正比，故該試驗是定量試驗濃度成正比，故該試驗是定量試驗。雙向擴散o 即將抗原和抗體分別加入瓊脂對應(yīng)的孔中，二者會向四周擴散，在二者比例二者比例合適處合適

6、處形成白色沉淀線。電 泳o定義：即帶電顆粒在電場的作用下向著相反的電極移動，稱為電泳。o原理：蛋白質(zhì)是一種兩性電解質(zhì)，其具有游離的氨基和羧基，每種蛋白質(zhì)都具有自己的等電點（pi)，等電點的高低取決于蛋白質(zhì)的性質(zhì)，在等電點時，蛋白質(zhì)帶正負電荷相等。在ph pi時，羧基解離得多，致使蛋白質(zhì)帶負電荷，向著正極移動。在ph pi時，氨基解離得多，帶正電荷，向著負極移動?；鸺庖唠娪净鸺庖唠娪緊 單向擴散+電泳：將單向擴散與電泳技術(shù)相結(jié)合的一種方法。o 沉淀峰的高度與抗原的濃度成正比。對流免疫電泳的原理對流免疫電泳的原理o蛋白質(zhì)抗原在堿性環(huán)境中，其羧基發(fā)生電離而帶負電荷，在電泳時從負極向正極移動負極向

7、正極移動。o抗體分子在電場中從正從正極向負極移動極向負極移動。實驗步驟實驗步驟制板制板打孔打孔封底封底加樣加樣電泳電泳34ml瓊脂瓊脂孔間距孔間距3mm約約7ul切割火焰切割火焰23次次總電流總電流4ma/cm x 2.5cm(板寬板寬) x n(板數(shù)）板數(shù)）30分分鐘鐘 抗原抗原 抗體抗體實驗結(jié)果實驗結(jié)果注意事項o 抗原抗體不能放反o 加樣前須封底o 樣品不能從孔內(nèi)溢出o 電泳時電流大小須合適實驗報告（交單頁）原理方法結(jié)果肝癌是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，包括原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌兩種，人們?nèi)粘Ｕf的肝癌指的多是原發(fā)性肝癌。原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，根據(jù)最新統(tǒng)計，全世界每年新發(fā)肝癌患

8、者約六十萬，居惡性腫瘤的第五位。原發(fā)性肝癌按細胞分型可分為肝細胞型肝癌、膽管細胞型肝癌及混合型肝癌。按腫瘤的形態(tài)可分為結(jié)節(jié)型、巨塊型和彌漫型。原發(fā)性肝癌在我國屬于高發(fā)病，一般男性多于女性。中國是乙肝大國，我國的肝癌多在乙肝肝硬化的基礎(chǔ)上發(fā)展而來，丙肝病人也在逐漸增加，乙肝后也會發(fā)展為肝癌。目前我國發(fā)病人數(shù)約占全球的半數(shù)以上，占全球肝癌病人的55%，已經(jīng)成為嚴重威脅我國人民健康和生命的一大殺手，其危險性不容小視。1 發(fā)病原因發(fā)病原因總的來說，原發(fā)性肝癌的病因至今未能完全闡明，但已證明與以下因素密切相關(guān)： 1、病毒性肝炎：流行病學(xué)統(tǒng)計表明，乙肝流行的地區(qū)也是肝癌的高發(fā)地區(qū)，患過乙肝的人比沒有患過乙肝的人患肝癌的機會要高10倍之多。長期的臨床觀察中發(fā)現(xiàn)，肝炎、肝硬化、肝癌是不斷遷移演變的三部曲。近來研究表明，與肝癌有關(guān)的病毒性肝炎主要包括乙型肝炎（hbv）、丙型肝炎（bcv），而其中又以乙型肝炎最為常見。 2、酒精：俗話說“飲酒傷肝”，飲酒并不是肝癌的直接病因，但它的作用類似于催化劑，能夠促進肝癌的發(fā)生和進展。有長期酗酒嗜好者容易誘發(fā)肝