各種感受態(tài)細(xì)胞的特征和用途

1、1 : DH5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。E.coli DH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí)，可與載體編碼的A半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ)?？捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株?；蛐停篎-, $80dlacZ AM15, A(lacZYA-argF)U169 , deoR , recAI , endAI , hsdR17(rk- , mk+) , phoA , supE44 , k , thi-1 , gyrA96 , relAI2: BL21(DE3) 菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如 pET系列)的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于k噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)

2、整合于BL21的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白。基因型：F-, ompT , hsdS (rBB-mB ), gal, dcm (DE3 )3: BL21(DE3) pLysS 菌株該菌株含有質(zhì)粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá)。該菌適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白?；蛐停篎-, ompT hsdS (rBB-mB ), gal, dcm (DE3 , pLysS , Camr4: JM109 菌株該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行 DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，由于載體DNA產(chǎn)生的La

3、cZa多肽和JM09編碼的LacZ A M15進(jìn)行a互補(bǔ)，從而顯示A半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株基因型：recA1 , endA1 , gyrA96 , thi 1 , hsdR17 , supE44 , relA1 , A (lac proAB ) /F' trD36 , proAB+ , lacIq , lacZ AM155: TOP10 菌株該菌株適用于高效的 DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳?；蛐停篎- , mcrAA(mrr -hsd RMS-mcrBC) ,$80 , lacZ AM15 , lacX 74 , recA1 , ara A139

4、A(ara-leu)7697 , galU , galK , rps ,(Strr) endA1 , nupG6： HB101 菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定,使用方便，適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)基因型：supE44 , hsdS20 (rB-mB ) , recA13 , ara 14 , proA2 , lacY1 , galK2 , rpsL20 , xyl-5 , mtl-1 , leuB6 , thi-1JM110 或 SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dem甲基化酶，前者可以在 GATC序列中腺嘌吟N-6位上引入甲基，后者在 CCA/TGC序列的第一個(gè)胞嘧啶 C-5位置上引入

5、甲基。常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生 dam,dem，從而受到甲基化的影響.部分限制性內(nèi)切酶對甲基化的DNA不能切割，如 Fbal和Mbol等，一般生物公司提供的內(nèi)切酶說明中均有說明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割，而有些會(huì)影響，如Xbal, Bell等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列，以Xbal為例，只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn)GA或TC ,該Xbal位才會(huì)被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：(1) 選用上述酶的同功酶，如 Sau3AI，DNA識(shí)別切割位點(diǎn)與 Mbol相同；但不受甲基化影響；(2) 利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備，如E.coli JM110和鏈霉菌等，前者 Dam和Dcm

6、甲基化酶已敲出，而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒有甲基化酶，從這些細(xì)胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。E.coli JM110要排除dam,dcm甲基化的影響，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒，則不會(huì)被甲基化.各種感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別用途特征XI1-Blue 菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi- 1 recA1 relA1 lac glnV44 F 'Tn10 proAB+ laclq (lacZ)M15 hsdR17(rK mK+)。特點(diǎn)：具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和質(zhì)粒提取。B

7、L21(DE3)菌株基因型：F -ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- ) X (DE3 lacl lacUV5 -T7 gene 1 ind1 sam7 nin5) 。特點(diǎn)：該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于X噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子，該區(qū)整合于 BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。用途：蛋白質(zhì)表達(dá)。BL21(DE3)ply 菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- ) X (DE3) pLysS(cmR)。特點(diǎn)：該菌株帶有 pLysS

8、，具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。用途：蛋白質(zhì)表達(dá)DH5a菌株基因型：F- endAI glnV44 thi- 1 recAI relAI gyrA96 deoR nupG80dlacZ AM15 A(lacZYA -argF)U169, hsdR17(rK- , X-特點(diǎn)：一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。其80dlacZ AM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與 pUC載體編碼的B-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆 DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi- 1 relA1 gyrA96 r