崔樹和大學(xué)本科方案設(shè)計(jì)書初稿1

1、吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文論 文 題 目：吉林地區(qū)臨床健康豬群鏈球菌帶菌情況調(diào)查年級(jí)專業(yè)：09動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)生姓名：崔 樹 和學(xué)號(hào)：0908601105指導(dǎo)教師：呼 顯 生評(píng)閱教師：完成日期：吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院吉林地區(qū)臨床健康豬群鏈球菌帶菌情況調(diào)查學(xué)生:崔樹和專業(yè) :動(dòng)物醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師 : 呼顯生摘要本研究旨在調(diào)查吉林地區(qū)表觀健康豬的豬鏈球菌帶菌情況。隨機(jī)采集吉林地區(qū)7個(gè)區(qū)縣 ( 市) 定點(diǎn)屠宰場(chǎng)表觀健康豬的腭扁桃體960 份，進(jìn)行增菌培養(yǎng)后采用PCR 方法進(jìn)行豬鏈球菌種型鑒定并用血清凝集實(shí)驗(yàn)復(fù)檢，對(duì)采集的病料進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果：從吉林地區(qū) 9 個(gè)區(qū)縣 ( 市) 采集的 900 份豬扁桃體樣品中共檢

2、出46 株豬鏈球菌，檢出率為 5.11%，其中 15 株為豬鏈球菌 2 型 (32.6%) ，8 株為豬鏈球菌 7 型（ 17.3%）， 3 株為豬鏈球菌 9 型（ 6.5%）， 20 株未定血清型（ 43.5%）。結(jié)論：吉林地區(qū)表觀健康豬群平均帶菌率為 5.11%，豬鏈球菌 2 型為主要血清型。關(guān)鍵詞：臨床健康豬；豬鏈球菌；流行病學(xué)調(diào)查；扁桃體Clinical investigations into healthy swine streptococcus pathogen in JiLin AreaName: Cui ShuheMajor: Veterinary MedicineTutor:

3、 Hu XianshengAbstractThis study aims to survey the apparent healthy swine streptococcus suis in jilin area study. Random collection of seven counties (cities) in jilin area designated slaughterhouses apparent healthy pigs palatine tonsil, 960 after enrichment culture using polymerase chain reaction

4、(PCR) to streptococcus suis type of identification and serum agglutination test the re-inspection, the collection and analysis of the epidemic materials for testing. Results: from the nine districts in jilin area (city) acquisition of check out of a total of 900 samples of pig tonsil46 strains of st

5、reptococcus suis, detection rate was 5.11%, including 15 strains of streptococcus suis type 2 (32.6%), 8 strains of streptococcus suis type 7 (17.3%), 3 strains of streptococcus suis type 9 (6.5%), 20 strains of undetermined serotype (43.5%). Conclusion: the apparent in jilin area healthy swine path

6、ogen rate was 5.11% on average, streptococcus suis type 2 as the main serotype.Key Words: Clinical healthy pigs。 Streptococcus suis。 Epidemiological investigation。 The amygdala目錄摘要 IAbstractII正文 1前言 11 材料與方法 11.1 材料 1樣品采集 1菌株與抗血清1主要試劑 11.2 實(shí)驗(yàn)方法 2樣品的細(xì)菌培養(yǎng)2豬鏈球菌種型的鑒定2血清凝集實(shí)驗(yàn)22 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 22.1 不同地區(qū)豬鏈球菌分布情況22.2

7、血清凝集實(shí)驗(yàn)結(jié)果33 討論與分析 3結(jié)論 4參考文獻(xiàn) 4致謝 4正文前言豬鏈球菌 ( Streptococcus suis) 屬鏈球菌屬，按照莢膜抗原的差異，可分為35個(gè)血清型 (1-34 、1/2) 1 。其中豬鏈球菌 2 型( Streptococcus suis serotype2，SS2) 在世界上流行最廣，致病性最強(qiáng)，同時(shí)能引起人的感染，是一種重要的人畜共患病病原。近年在亞洲、歐洲和美洲多個(gè)國(guó)家出現(xiàn)暴發(fā)流行，不僅危及公共衛(wèi)生安全，而且給世界養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。豬鏈球菌可以在健康豬和病豬的腭扁桃體定居1年以上 2 ，亞臨床癥狀的帶菌豬常會(huì)引起豬和人的發(fā)病。我國(guó)于 1998年和 2005

8、年分別在我國(guó)江蘇、四川和香港發(fā)生過(guò)嚴(yán)重的豬鏈球菌 2型疫情以及人感染死亡事件，但健康豬帶菌現(xiàn)象未得到重視。為了了解吉林地區(qū)臨床健康豬群中豬鏈球菌的帶菌情況，于 2011年10月采集屠宰場(chǎng)臨床健康豬的扁桃體進(jìn)行鏈球菌的分離和檢測(cè)，為吉林地區(qū)豬鏈球菌的診斷和防控工作提供數(shù)據(jù)支持。（批注：前言太少了，要有豬鏈球菌的危害，在國(guó)內(nèi)主要流行情況，吉林地區(qū)的主要流行情況概述）1 材料與方法1.1 材料樣品采集健康豬扁桃體的采集：從吉林市各縣區(qū)屠宰場(chǎng)在 10d 內(nèi)隨機(jī)采取本地區(qū)豬源的豬腭扁桃體樣品共 900 頭份。采集樣品 4保存。菌株與抗血清豬鏈球菌 1 型、 2 型、 7 型、 9 型、 1/ 2 型和

9、14 型的標(biāo)準(zhǔn)抗血清和參考菌株由加拿大蒙特利爾大學(xué)引進(jìn)。主要試劑rTaqDNA 聚合酶 ( 5 U/ L)、 DL 2000DNAMarker 、 10PCRbuffer ( 含 MgCL 2) 、 dNTPs ( 2.5 mmol/ Leach) 等購(gòu)自寶生物工程有限公司， 5%綿羊血平板， THB 肉湯培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó) BD 公司。1.2 實(shí)驗(yàn)方法樣品的細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)菌操作挑取樣品接種于綿羊血平板， 37培養(yǎng) 1820h，挑取單個(gè)呈淺灰色針尖大小溶血菌落，經(jīng)涂片進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，可見(jiàn)鏈狀革蘭氏陽(yáng)性球菌，采用葡萄糖肉浸液肉湯液體培養(yǎng)基接種純化增菌培養(yǎng)， 37培養(yǎng) 18 20 h 收取菌液備用。

10、豬鏈球菌種型的鑒定用 PCR 方法對(duì)疑似豬鏈球菌的 DNA進(jìn)行豬鏈球菌種 ( gdh) 鑒定 3 ，陽(yáng)性者再進(jìn)行豬鏈球菌 1 型、 2 型或 1/2 型、 7 型、 9 型鑒定。依據(jù) GenBank 中的豬鏈球 cps1J( Gen-Bank 登錄號(hào) AF155804) 、cps2J ( GenBank 登錄號(hào) AF118389) 、cps7H ( GenBank 登錄號(hào) AF164515)、 cps9G( GenBank 登錄號(hào) AF155805) 、gdh( GenBank 登錄號(hào) AF229683)5 個(gè)基因設(shè)計(jì)了 5 對(duì)引物 ,引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)公司合成4 。由上海生工5D

11、NA模板為陽(yáng)性對(duì)照，金黃色葡萄球菌的DNA模板為陰性對(duì)照，水為空白對(duì)照。血清凝集實(shí)驗(yàn)PCR 鑒定為豬鏈球菌 1 型的分別用豬鏈球菌 14 型和豬鏈球菌 1/2 型標(biāo)準(zhǔn)抗血清作進(jìn)一步鑒定， PCR 鑒定為豬鏈球菌 2 型的用豬鏈球菌 1/2 型標(biāo)準(zhǔn)抗血清作進(jìn)一步鑒定。血清凝集實(shí)驗(yàn)具體方法為 : 將已知抗體的診斷血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分鐘后若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集塊，即為陽(yáng)性反應(yīng)。同時(shí)設(shè)生理鹽水和菌體對(duì)照。2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1 不同地區(qū)豬鏈球菌分布情況從吉林地區(qū) 9個(gè)區(qū)縣 ( 市) 采集的 900份豬扁桃體樣品中共檢出46株豬鏈球菌，檢出率為 5.11%，其中 15株為豬鏈球菌 2型，

12、8株為豬鏈球菌 7型， 3株為豬鏈球菌 9型， 20株未定血清型。 15個(gè)采樣點(diǎn)中 9個(gè)采樣點(diǎn)檢出豬鏈球菌，其他 6個(gè)采樣點(diǎn)未檢出豬鏈球菌，如表 1所示。表 2-1 吉林市屠宰犬壓片鏡檢法檢出情況地區(qū)腭扁桃豬鏈球菌數(shù)檢出率S.S. suiS.S.S. sui未定型Region體數(shù)量量/ %suis1s1/ 2suis2suis7s9 型數(shù)量PalatineStreptococcusDetection型型型型S. suisUntypedtonsilsuisrateS. suisS. suisS. suisS. suistype9type1type1/2type2type7永吉120108.330

13、03304舒蘭12075.83002023樺甸1201310.83002209蛟河12000000000磐石18042.22003001昌邑6000000000船營(yíng)60711.67003202豐滿6000000000龍?zhí)?058.33002111合計(jì)900465.11001583202.2 血清凝集實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)6株定型分離株用玻片血清凝集實(shí)驗(yàn)復(fù)檢發(fā)現(xiàn):豬鏈球菌 2 型菌體只與豬鏈球菌2型抗血清發(fā)生凝集，不與豬鏈球菌 1/ 2 型抗血清發(fā)生凝集，因此判定為豬鏈球菌 2 型。豬鏈球菌 7型和 9型菌體分別和豬鏈球菌 7型、 9型抗血清發(fā)生特異性凝集反應(yīng)。所有結(jié)果與 PCR鑒定結(jié)果一致。3 討論與分析

14、本次調(diào)查采用屠宰場(chǎng)隨機(jī)采樣的方法對(duì)表觀健康豬的豬鏈球菌帶菌情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并采取屠宰豬的扁桃體，該方法具有簡(jiǎn)易方便、易操作的優(yōu)點(diǎn)，且本次所檢測(cè)豬均為當(dāng)?shù)氐钠胀ㄓ韶i，調(diào)查結(jié)果具有吉林地區(qū)特點(diǎn)。豬鏈球菌自然存在于上呼吸道，豬群中的感染，多是由腭扁桃體帶有病原體的表觀健康豬引起 6 ，而存在于腭扁桃體上的豬鏈球菌的血清型也是多樣的。從病豬分離的菌株的血清型主要是 2型,其余還有 1/2 、 3、 4、 6、 7、 8 和9 型7 ；本文僅檢測(cè)了 PCR方法能夠定型的 6 個(gè)血清型 , 部分分離株 (43.5%) 未定血清型 , 所得結(jié)果與已報(bào)道的健康豬帶菌的優(yōu)勢(shì)血清型情況基本相符。而豬鏈球菌 2型菌

15、為 15株(32.6%), 這一數(shù)據(jù)說(shuō)明吉林地區(qū)為豬鏈球菌 2型發(fā)病高危地區(qū)，應(yīng)加強(qiáng)本病的重點(diǎn)防控。由于豬鏈球菌病流行的優(yōu)勢(shì)血清型具有一定的地域性, 因而查清一個(gè)地區(qū)的流行情況 , 是有效控制豬鏈球菌病的關(guān)鍵。作者在吉林地區(qū)對(duì)表觀健康豬豬鏈球菌帶菌狀況進(jìn)行調(diào)查 , 并對(duì)流行的優(yōu)勢(shì)血清型進(jìn)行研究 , 對(duì)進(jìn)一步的預(yù)防和監(jiān)測(cè) ,有效控制傳染源和傳播途徑具有重要意義。結(jié)論通過(guò)對(duì)吉林市不同地區(qū)九家豬屠宰場(chǎng)隨即抽取的 900 份豬的扁桃體樣品進(jìn)行鏈球菌檢測(cè)，查到吉林地區(qū)表觀健康豬群平均帶菌率為 5.11%，豬鏈球菌 2 型為主要血清型 , 說(shuō)明被檢測(cè)的九家豬屠宰場(chǎng)生產(chǎn)的肉豬有鏈球菌感染。參考文獻(xiàn)1 Rea

16、ms RY,Glickman LT,Harringtgon DD,et al. Strep tococcus suis infection in swine:aretrospectivestudy of256cases.Part .Clinicalsigns ， grossandmicroscopiclesions and coexisting microorganismsJ.J Cli Diagn Invest,1994,6(3):326-334.2Higgins R,GottschalkM,Mittalkr,etal.Streptococcus suisinfectioninswine.A

17、six teenmonth study J. CanJ Vet Res,1990,54(1):170-173.3PersaudJ S,ReddyPG.Cloningand characterizationofthegeneencodingtheglutamatedehy drogenaseofStreptococcussuisserotype2J.ClinDiagnLabImmunol,2001,8(2):251- 257.4 王楷宬, 熊忠良,尚延明, 等.重慶地區(qū)表觀健康豬中豬鏈球菌的檢測(cè).畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) ,2010,41(5):594- 599.5蔡振鴻 . 中國(guó)部分地區(qū)豬鏈球菌遺傳背景及

18、進(jìn)化關(guān)系研究D.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) ,2007.6CliftIon-hadeu F A, AlexanderT J.Tecarriersiteandcarrierrate ofStreptococcus suis type2 in pigs J. Vet Rec, 1980, 107( 2) : 40- 41.7Morereau A,Higginsr,Bigras-poulinM,etal.Rapiddetectionof Streptococcussuisserotype2in weaned pigJ. Am J Vet Res,1989,50(10):1667- 1671.致謝本論文是在我的導(dǎo)師呼顯生副教授的親切關(guān)懷和悉心指導(dǎo)下完成的，非常感謝呼老師能在百忙之中抽出時(shí)間來(lái)給我指導(dǎo)論文。呼老師嚴(yán)肅的科學(xué)態(tài)度，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)精神，精益求精的工作作風(fēng)