以HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏含量的方法中馬來(lái)酸峰及氯苯那敏峰定位的問(wèn)題

1、以HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏含量的方法中馬來(lái)酸峰及氯苯那敏峰定位的問(wèn)題 作者：徐燕 劉峰 徐曉霞 謝華【摘要】 目的：探討在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)收載品種中采用HPLC方法測(cè)定馬來(lái)酸氯苯那敏的含量時(shí)，所采集的HPLC圖譜中，出現(xiàn)的馬來(lái)酸峰與氯苯那敏峰保留位置如何確定的問(wèn)題。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱：Waters C18 (4.6 mm×150 mm，5m)，江蘇淮陰C18(4.6mm×250mm，5m)；流動(dòng)相：庚烷磺酸鈉溶液（冰醋酸調(diào)pH值至3.3）甲醇乙腈(253018)；檢測(cè)波長(zhǎng)262nm。結(jié)果：在本文收集的試驗(yàn)條件下所采集的色譜圖中，馬來(lái)

2、酸氯苯那敏對(duì)照品均出現(xiàn)了前后兩個(gè)峰，馬來(lái)酸峰與氯苯那敏峰保留位置可能在不同的色譜條件下有明顯變化。結(jié)論：色譜圖中馬來(lái)酸峰與氯苯那敏峰保留位置應(yīng)加以確定，以防止對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品純度產(chǎn)生疑慮。 【關(guān)鍵詞】 馬來(lái)酸氯苯那敏；高效液相色譜法；色譜峰定位馬來(lái)酸氯苯那敏(2對(duì)氯2（二甲氨基）乙基苯基吡啶馬來(lái)酸鹽)，作為抗組胺藥物，常被應(yīng)用于多種復(fù)方化學(xué)藥物制劑處方中。其加入量通常較微量，但其藥理藥效作用明顯，在大多數(shù)此類復(fù)方藥品中是需要定量的成分,一般會(huì)采用HPLC方法進(jìn)行含量測(cè)定。采用HPLC方法對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)行含量測(cè)定，是一種靈敏、專屬性較強(qiáng)的可靠的含量測(cè)定方法。在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)

3、準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的各冊(cè)中，收載有多個(gè)含馬來(lái)酸氯苯那敏的復(fù)方制劑，均為采用HPLC方法對(duì)來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)行含量測(cè)定，其采用的HPLC方法各不一樣。這其中，我們?cè)鴮?duì)復(fù)方氨酚那敏顆粒，氯芬黃敏片及酚氨咖敏片三個(gè)品種中的馬來(lái)酸氯苯那敏的含量測(cè)定進(jìn)行過(guò)較大量的試驗(yàn)工作。對(duì)這些不同的方法中，出現(xiàn)的色譜圖中馬來(lái)酸峰與氯苯那敏峰保留位置如何確定的問(wèn)題，進(jìn)行了一些研究。 1實(shí)驗(yàn)部分 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第十一冊(cè)中收載品種氯芬黃敏片，也采用了HPLC方法對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)行含量測(cè)定。但此標(biāo)準(zhǔn)方法與復(fù)方氨酚那敏顆粒的方法不同，且并未對(duì)色譜圖中馬來(lái)酸氯苯那敏的出峰狀況進(jìn)行描述。而在試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，雖然

4、此條件下，馬來(lái)酸峰面積較小，但在多數(shù)時(shí)候會(huì)占到總峰面積的10左右，在色譜圖中有明顯的峰的出現(xiàn)。并且，在相同的流動(dòng)相與檢測(cè)波長(zhǎng)的色譜條件下，采用不同品牌的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，馬來(lái)酸的出峰情況會(huì)明顯不同。所以，此方法中，明確馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品色譜圖中峰的定位，有很重要的意義。 1.1儀器與試藥 Agilent 1100型高效液相色譜儀（自動(dòng)進(jìn)樣器），紫外檢測(cè)器。乙腈，甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純。馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100047200305 ）；馬來(lái)酸氨氯地平原料（因無(wú)馬來(lái)酸與氯苯那敏的單體對(duì)照品及原料，故采用馬來(lái)酸氨氯地平原料，以相對(duì)比較的辦法來(lái)為馬

5、來(lái)酸峰定位）。 1.2方法與結(jié)果 色譜條件及溶液的制備色譜柱：Waters C18(4.6 mm×150 mm，5 m)，流動(dòng)相：庚烷磺酸鈉溶液（庚烷磺酸鈉15.2 mg，加三乙胺0.8 ml，加水800 ml，用冰醋酸調(diào)pH值至3.3，加水至1000 ml）甲醇乙腈(253018)；檢測(cè)波長(zhǎng)262 nm；柱溫：40 ；馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液的制備方法：以流動(dòng)相溶解為每1 ml中含0.05 mg的溶液。 在上述試驗(yàn)條件下，馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品出現(xiàn)前后兩個(gè)峰，色譜圖中氯苯那敏峰（保留時(shí)間約為2.4分鐘）在前，馬來(lái)酸峰（保留時(shí)間約為3.2分鐘）在后（此實(shí)驗(yàn)所收集的圖譜中，與氯苯那敏峰比

6、較，馬來(lái)酸峰面積較?。＃▓D1；圖2） 但當(dāng)上述色譜條件及溶液的制備未作改變，僅因變換色譜柱為江蘇淮陰C18(4.6 mm×250 mm，5 m)后，馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品出現(xiàn)前后兩個(gè)峰，色譜圖中馬來(lái)酸峰（保留時(shí)間約為1.7分鐘）在前，氯苯那敏峰（保留時(shí)間約為2.9分鐘）在后（此實(shí)驗(yàn)所收集的圖譜中，與氯苯那敏峰比較，馬來(lái)酸峰面積較?。?另外，在此方法下，我們還使用過(guò)如迪馬鉆石C18(4.6 mm×250 mm，5 m)，島津ODS C18(4.6 mm×150 mm，5 m)等牌號(hào)的色譜柱，也均產(chǎn)生氯苯那敏峰在前，馬來(lái)酸峰在后的現(xiàn)象。而在使用Alltima C18

7、(4.6 mm×250 mm，5 m)的色譜柱時(shí)，則色譜圖中馬來(lái)酸峰在前，氯苯那敏峰在后（此實(shí)驗(yàn)所收集的圖譜中，與氯苯那敏峰比較，馬來(lái)酸峰面積較小）。 1.3其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)狀況 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第三冊(cè)中收載品種復(fù)方氨酚那敏顆粒，其中的馬來(lái)酸氯苯那敏的含量測(cè)定項(xiàng)下要求的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中明確：理論塔板數(shù)按氯苯那敏峰計(jì)（色譜圖中馬來(lái)酸峰在前，氯苯那敏峰在后）。按本標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件及溶液的制備方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)在此試驗(yàn)條件下（色譜柱：C18；流動(dòng)相：乙腈0.3%十二烷基硫酸鈉溶液磷酸(60400.02)；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品溶液的制備方法

8、：以乙腈-0.3%十二烷基硫酸鈉溶液（11）溶解為每1ml中含0.06 mg的溶液），馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品確實(shí)出現(xiàn)了前后兩個(gè)峰，與標(biāo)準(zhǔn)中明確的色譜圖中馬來(lái)酸峰在前，氯苯那敏峰在后吻合（在此實(shí)驗(yàn)所收集的圖譜中，與氯苯那敏峰比較，馬來(lái)酸峰面積較大）。 并且我們也注意到，在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第十六冊(cè)中收載品種酚氨咖敏片，也采用了HPLC方法對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)行含量測(cè)定。同樣采用了十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，在此標(biāo)準(zhǔn)的流動(dòng)相與檢測(cè)波長(zhǎng)的色譜條件下，馬來(lái)酸氯苯那敏的出峰情況為：色譜圖中馬來(lái)酸峰在前，氯苯那敏峰在后。但在此實(shí)驗(yàn)所收集的圖譜中，與氯苯那敏峰比較，馬來(lái)酸峰面積較小。 2討論 實(shí)驗(yàn)表明，采用某些國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中的HPLC方法對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，由于大部分標(biāo)準(zhǔn)中未能明確指出，在所采集的HPLC圖譜中，馬來(lái)酸峰與氯苯那敏峰的保留位置應(yīng)如何確定，有可能對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品圖譜中出現(xiàn)明顯非主成分峰難以解釋，進(jìn)而導(dǎo)致對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品純度的疑慮?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)（化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第三冊(cè)），國(guó)家藥