植物組織中淀粉含量的測定(共6頁)

1、植物組織中淀粉含量的測定2007-01-12 08:55 蒽酮硫酸法一、原理 淀粉是由葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖，然后在濃硫酸的作用下，使單糖脫水生成糠醛類化合物，利用蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應(yīng)，即可進行比色測定。 二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備 （一）實驗材料 任何植物材料。 （二）試劑 濃硫酸（比重 1.84 ）。 9.2mol/L HClO 4 。 2%蒽酮試劑，同實驗 24 。 （三）儀器

2、設(shè)備 電子天平，容量瓶： 100 mL 4 個、 50 mL 2 個，漏斗，小試管若干支，電爐，刻度吸管 0.5mL 1 支、 2.0 mL 3 支、 5 mL 4 支，分光光度計，記號筆。 三、實驗步驟     1. 標準曲線制作 取小試管11支從010編號，按表24-3加入溶液和蒸餾水。以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可

3、，見方法一或方法二，繪制相應(yīng)的標準曲線。表24-3  各試管加入標準液和蒸餾水量管  號012345678910淀粉標準液(ml)00.40.81.21.62.0蒸 餾 水（ml）2.01.61.20.80.40淀粉含量（mg）040801201602002. 樣品提取 稱取 50  100 mg 粉碎過 100 目篩的烘干樣品，置于 15 mL 刻度試管中，加入 6  7 m

4、L 80 乙醇，在 80 水浴中提取 30 min ，取出離心（ 3000 rpm ） 5 min ，收集上清液。重復提取兩次（各 10 min ）同樣離心，收集三次上清液合并于燒杯，置于 85 恒溫水浴，使乙醇蒸發(fā)至 2  3 mL ，轉(zhuǎn)移至 50 mL 容量瓶，以蒸餾水定容，供可溶性糖的測定。   

5、60;   向沉淀中加蒸餾水 3 mL ，攪拌均勻，放入沸水浴中糊化 15 min 。冷卻后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸，不時攪拌，提取 15 min 后加蒸餾水至 10 mL ，混勻，離心 10 min ，上清液傾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4.6

6、60;mol/L 高氯酸，攪拌提取 15 min 后加水至 10 mL ，混勻后離心 10 min ，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀 1  2 次，離心，合并離心液于 50 mL 容量瓶用蒸餾水定容供測淀粉用。 3. 測定 取待測樣品提取液 1.0 mL 于試管中，再加蒽酮試劑 5 mL ，快速搖勻，然后在沸水浴中煮 10&#

7、160;min ，取出冷卻，在 620 nm 波長下，用空白調(diào)零測定光密度，從標準曲線查出淀粉含量（ mg ）。 四、結(jié)果計算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W式中： C 從標準曲線查得淀粉量， mg 。 V T 樣品提取液總體積 , mL 。 V 1 顯色時取樣品液量， mL 。 W 樣品重， g 。

8、0;0.9 由葡萄糖換算為淀粉的系數(shù)。  碘 - 淀粉比色法 一、原理 對于淀粉含量較少的植株樣品，也可采用碘淀粉比色法。淀粉在加熱情況下能溶于硝酸鈣溶液中，當?shù)饣浐拖跛徕}共存時，碘能以碘淀粉藍色化合物沉淀全部淀粉。將此沉淀溶于堿液，并在酸性條件下與碘作用形成藍色溶液進行比色。 二、實驗材料、試劑與儀器設(shè)備 （一）實驗材料 任何植物材料。 （二）試劑 1  80 硝酸鈣溶液。 2  0.5 碘液：稱

9、60;5.00 g 結(jié)晶碘和 10.00 g 碘化鉀，放入研缽混合干研，然后加 10 mL 蒸餾水研至全部碘溶解，將溶液全部轉(zhuǎn)入 1000 mL 容量瓶定容后，貯于磨口試劑瓶。 </P>3  5 含碘硝酸鈣溶液：取 10 mL 80 的硝酸鈣溶液，加入 160 mL 水再加入 3 mL 0.5 的碘液混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。 

10、;4 標準淀粉溶液：稱取純淀粉 50 mg 于研缽中，加 3 mL 80 硝酸鈣溶液，研細并轉(zhuǎn)移到 100 mL 的三角瓶中，用 15 mL 80 的硝酸鈣溶液沖洗研缽，無損地收集于三角瓶中。將三角瓶置于沸水浴中煮沸 5 min ，冷卻后全部轉(zhuǎn)入 50 mL 容量瓶中并定容。此液為 1 mg/mL 的淀粉標準液。 5  0.1&

11、#160;mol/L NaOH 。 6  0.1 mol/L HCl 。 （三）儀器設(shè)備分析天平，研缽，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，電爐，離心機，離心管，試劑瓶。三、實驗步驟 1 稱取 1  3 g 葉片，剪碎放入研缽，加 5 mL 80 的硝酸鈣溶液，研磨成糊狀移入 100 mL 的三角瓶中，用 10 mL 80 的硝

12、酸鈣沖洗研缽，無損地收集于三角瓶中，瓶口蓋上小漏斗，在沸水浴上煮沸 3  5 min （葉片含淀粉少的 3 min ，含淀粉多的 5 min ），使樣品中淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)槟z體溶液。 2 給三角瓶中加 20 mL 蒸餾水，混合液轉(zhuǎn)入離心管中離心（ 2000  3000 rpm ） 2  3 min ，將離心后的淀粉膠體渾濁液移入 100

13、 mL 容量瓶（淀粉含量少時，可移入 50 mL 容量瓶），三角瓶及離心沉淀物用 5  10 mL 熱蒸餾水沖洗并同樣離心，離心液并入容量瓶中（共洗 2  3 次）定容，即為淀粉提取液。3 取 5  10 mL 淀粉待測液，加入到盛有 2 mL 0.5 碘液的離心管中，混勻靜置 15 min 后離心（ 3000

14、0;rpm ） 5 min ，棄上清液。沉淀用 5 的含碘硝酸鈣溶液沖洗兩次，向沖洗后的沉淀中加入 10 mL 0.1 mol/L 的 NaOH 混勻，將離心管浸入沸水內(nèi) 5 min ，使沉淀溶解。將溶液轉(zhuǎn)入 50 mL 容量瓶中，加入 0.3 mL 0.5 碘液，用 30 mL 左右的水沖洗并入容量瓶，加入 2 mL

15、 1mol/L 的鹽酸，用水定容并顯色，在 590 nm 波長處測定光密度。 4 繪制標準曲線 取標準淀粉溶液（ 1 mg/mL ） 0 、 0.5 、 1.0 、 2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0 mL 于 6 個離心管中，用 80 硝酸鈣溶液將各管的體積補足至 5 

16、mL ，再向各管加入 2 mL 0.5 碘液，混勻靜置 15 min 后離心，其他操作同樣品測定步驟，顯色后在 590 nm 波長下測定光密度。此系列溶液的淀粉含量分別為 0 、 0.5 、 1.0 、 2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0 mg ，然后以光密度為橫坐標，以淀粉含量為縱坐標繪制標準曲線。 四、結(jié)果計算

17、60;：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W式中： C 從標準曲線查得淀粉量， mg 。 V T 樣品提取液總體積 , mL 。 V 1 顯色時取樣品液量， mL 。 W 樣品重（ g ）。  III 旋光法（谷物淀粉含量的測定）一、原理： 酸性氯化鈣溶液與磨細的含淀粉樣品共煮，可使淀粉輕度水解。同時鈣離子與淀粉分子上的羥基絡(luò)合，這就使得淀粉分子充分地分散

18、到溶液中，成為淀粉溶液。淀粉分子具有不對稱碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光儀測定淀粉溶膠的旋光度（），旋光度的大小與淀粉的濃度成正比，據(jù)此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶膠所用的酸性氯化鈣溶液的pH值必須保持2.30，密度須為1.30，加時間的長短也要控制在一定范圍。因為只有在這些條件下，各種不同來源的淀粉溶液的比旋度才都是203°，恒定不變。樣品中其他旋光性物質(zhì)（如糖分）須預先除去。    二、材料、儀器設(shè)備及試劑：     （一）材料：面粉或其他風干樣品（二）儀器設(shè)備：1. 植物樣

19、品粉碎機；2. 離心機；3.分析天平；4. 粗天平；5. 旋光儀及附件；6. 三角瓶；7. 分樣篩（100目）；8. 布氏漏斗、抽濾瓶及真空泵；9. 離心管；10. 小電爐。（三）試劑：     三、實驗步驟：     1. 樣品準備：（1）稱取樣品：將樣品風干、研磨、通過100目篩，精確稱取約2.5g樣品細粉（要求含淀粉約2g，請參考附注估計），置于離心管內(nèi)。（2）脫脂：加乙醚數(shù)ml到離心管內(nèi)，用細玻棒充

20、分攪拌，然后離心。傾出上清液并收集以備回收乙醚。重復脫脂數(shù)次，以去除大部分油脂、色素等（因油脂的的存在會使以后淀粉溶液的過濾困難）。大多數(shù)谷物樣品含脂肪較少，可免去這個脫脂手續(xù)。（3）抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到離心管內(nèi)，充分攪拌，然后離心，傾去上清液，得到殘余物。（4）脫糖：加80乙醇10ml到離心管中，充分攪拌以洗滌殘余物（每次都用同一玻棒），離心，傾去下清液。重復洗滌數(shù)次以去除可溶性糖分。     2. 溶提淀粉：（1）加醋酸氯化鈣：先用醋酸氯化鈣溶液約10ml加到離心管中，攪拌后全部傾入250ml三角瓶內(nèi)，再

21、用醋酸氯化鈣溶液50ml分數(shù)次洗滌離心管，洗滌液并入三角瓶內(nèi)，攪拌玻棒也轉(zhuǎn)移到三角瓶內(nèi)。（2）煮沸溶解：先用蠟筆標記液面高度，直接置于加有石棉網(wǎng)的小電爐上，在4min5min內(nèi)迅速煮沸，保持沸騰15min17min，立即將三角瓶取下，置流水中冷卻。煮沸過程中要時加攪拌，勿令燒焦；要調(diào)節(jié)溫度，勿使泡沫涌出瓶外；常用玻璃將瓶側(cè)的細粒擦下；并加水保持液面高度。     3. 沉淀雜質(zhì)和定容：（1）加沉淀劑：將三角瓶內(nèi)的水解液轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，用醋酸氯化鈣溶液充分洗滌三角瓶瓶，并入容量內(nèi)，加30ZnSO41ml混合后，再加15K4Fe（C

22、N）61ml，用水稀釋至接近刻度時，加95乙醇一滴以破壞泡沫，然后稀釋到刻度，充分混合，靜置，以使蛋白充分沉淀。（2）濾清：用布氏漏斗（加一層濾紙）吸氣過濾。先傾清溶液約10ml于此濾紙上，使其完全濕潤，讓溶液流干，棄去濾液，再傾清溶液進行過濾，用干燥的容器接受此濾液，收集約50ml，即可供測定之用。     4. 測定旋光度：用旋光測定管裝滿濾液，小心地按照旋光儀使用說明，進行旋光度的測定。淀粉（）×N×100/20D×L×(WK)×100    式中：用鈉光時觀測到的旋光度；20 D：淀粉的比旋度，在這種方法條件下為203°；L：旋光管長度（cm）；W：樣品質(zhì)量（g）；K：樣品水分含量（）；N：稀釋倍數(shù)；100：換算為百分率。也可以不用上列公式計算，改用工作曲線來求得淀粉含量，這樣準確度高些。、淀粉含量的測定一、   目的掌握植物組織中淀粉含量測定的原理和方法。二、原理淀粉用鹽酸水解轉(zhuǎn)