實驗八(植保)微生物生理生化特性檢測(糖發(fā)酵氨化作用甲基紅試驗等)

1、實驗八實驗八 微生物生理生化特性檢測微生物生理生化特性檢測本次實驗內(nèi)容本次實驗內(nèi)容（4-5人人1組）組） 一一 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗 二二 好氣菌的氨化作用試驗好氣菌的氨化作用試驗 三三 吲哚和甲基紅試驗吲哚和甲基紅試驗 一一 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗1 目的要求目的要求2 基本原理基本原理3 試驗材料試驗材料4 操作步驟操作步驟1 1 目的要求目的要求 了解糖發(fā)酵的原理。了解糖發(fā)酵的原理。 掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。 鞏固微生物接種技術(shù)鞏固微生物接種技術(shù)2 2 基本原理基本原理 不同細菌對糖的分解利用能力存在較大不同細菌對糖的分解利用能力存在較大差異

2、，且產(chǎn)物不同，是常用的鑒別微生物的差異，且產(chǎn)物不同，是常用的鑒別微生物的生化方法。有些細菌能分解某種糖生化方法。有些細菌能分解某種糖產(chǎn)生有機產(chǎn)生有機酸和氣體酸和氣體；有些細菌；有些細菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。若產(chǎn)酸，。若產(chǎn)酸，可根據(jù)培養(yǎng)基特定的可根據(jù)培養(yǎng)基特定的酸堿指示劑酸堿指示劑的特征性的的特征性的顏色變化顏色變化檢測；若產(chǎn)氣，可從培養(yǎng)基中的檢測；若產(chǎn)氣，可從培養(yǎng)基中的杜杜氏小管中是否有氣泡氏小管中是否有氣泡觀測。觀測。 3 3 試驗材料試驗材料培養(yǎng)基培養(yǎng)基 無菌葡萄糖發(fā)酵液體培養(yǎng)基無菌葡萄糖發(fā)酵液體培養(yǎng)基 無菌蔗糖發(fā)酵液體培養(yǎng)基無菌蔗糖發(fā)酵液體培養(yǎng)基菌種菌種 大腸桿菌大腸桿菌 枯草桿菌枯

3、草桿菌4 4 操作步驟操作步驟 在試管外壁標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和接種細菌菌名。在試管外壁標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和接種細菌菌名。 取取葡萄糖葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支支，分別接種，分別接種大腸桿菌大腸桿菌、枯草枯草 桿菌桿菌，第三支不接做，第三支不接做對照對照； 取取蔗糖蔗糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接種支，分別接種大腸桿菌大腸桿菌、枯草桿枯草桿 菌菌，第三支不接做，第三支不接做對照對照。 將接種的和做對照的將接種的和做對照的6支試管放置支試管放置2830培養(yǎng)培養(yǎng)23天。天。 觀察各試管顏色變化及杜氏小管中是否有氣泡。觀察各試管顏色變化及杜氏小管中是否有氣泡。注：記錄生長情況用

4、符號表示：注：記錄生長情況用符號表示：不生長；：不生長； + +：生長差；：生長差； + +：生長一般；：生長一般； + +：生長良好：生長良好 表表1 糖發(fā)酵試驗結(jié)果糖發(fā)酵試驗結(jié)果 試驗菌種試驗菌種 發(fā)酵特性發(fā)酵特性供試糖供試糖葡萄糖葡萄糖蔗糖蔗糖大腸桿菌大腸桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)氣枯草桿菌枯草桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)氣對照對照產(chǎn)酸、產(chǎn)氣產(chǎn)酸、產(chǎn)氣二二 好氣氨化作用試驗好氣氨化作用試驗1 目的要求目的要求2 基本原理基本原理3 試驗材料試驗材料4 操作步驟操作步驟1 1 目的要求目的要求 了解好氣氨化作用的原理。了解好氣氨化作用的原理。 掌握通過氨化作用鑒別不同微生物的方法。掌握通過氨化作用鑒別不同微

5、生物的方法。 鞏固微生物的接種技術(shù)。鞏固微生物的接種技術(shù)。2 2 基本原理基本原理 不同微生物對含氮有機物不同微生物對含氮有機物分解能力分解能力及及代謝途徑、代謝途徑、最終產(chǎn)物不盡相同最終產(chǎn)物不盡相同，這些特征，這些特征性生化反應(yīng)可作為菌種鑒定的重要依據(jù)。性生化反應(yīng)可作為菌種鑒定的重要依據(jù)。微生物可微生物可分解含氮有機物，分解含氮有機物，最終產(chǎn)生最終產(chǎn)生氨氣氨氣。以酸堿指示劑以酸堿指示劑試紙試紙檢測。檢測。 3 3 試驗材料試驗材料培養(yǎng)基培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基菌種菌種 土壤顆粒土壤顆粒 大腸桿菌大腸桿菌 枯草桿菌枯草桿菌 4 4 操作步驟操作步驟（1 1）取）取牛

6、肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基四支牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基四支，貼好標(biāo)簽，分別接種，貼好標(biāo)簽，分別接種 土壤顆粒土壤顆粒、大腸桿菌大腸桿菌、枯草桿菌枯草桿菌，余下一支不接種作為，余下一支不接種作為 空白對照空白對照，在每支試管口懸掛一條經(jīng)，在每支試管口懸掛一條經(jīng)無菌水濕潤的紅色無菌水濕潤的紅色 石蕊試紙石蕊試紙，并加好試管塞。，并加好試管塞。（2 2）將已經(jīng)接種的培養(yǎng)管置于）將已經(jīng)接種的培養(yǎng)管置于28-3028-30培養(yǎng)培養(yǎng)5-75-7日。日。（3 3）結(jié)果檢測：）結(jié)果檢測： 觀察各管紅色石蕊試紙觀察各管紅色石蕊試紙變色變色及培養(yǎng)液及培養(yǎng)液渾濁渾濁情況。情況。表表2 2 好氣菌的氨化作用試驗結(jié)果好氣菌的氨

7、化作用試驗結(jié)果土壤顆粒土壤顆粒大腸桿菌大腸桿菌枯草桿菌枯草桿菌空白對照空白對照培養(yǎng)液培養(yǎng)液渾濁程度渾濁程度 紅色石蕊試紅色石蕊試紙變色程度紙變色程度 接種接種菌樣菌樣檢測檢測項目項目三三 吲哚和甲基紅試驗吲哚和甲基紅試驗1 目的要求目的要求2 基本原理基本原理3 試驗材料試驗材料4 操作步驟操作步驟1 目的要求目的要求v 學(xué)習(xí)掌握學(xué)習(xí)掌握吲哚和甲基紅試驗吲哚和甲基紅試驗原理。原理。v 學(xué)習(xí)掌握學(xué)習(xí)掌握吲哚和甲基紅試驗吲哚和甲基紅試驗在腸道菌鑒定中的方在腸道菌鑒定中的方法及意義。法及意義。 2 2 基本原理基本原理吲哚和甲基紅試驗主要用于快速鑒別吲哚和甲基紅試驗主要用于快速鑒別大腸桿菌大腸桿菌和

8、和產(chǎn)氣腸產(chǎn)氣腸桿菌桿菌，多用于水細菌學(xué)檢查。大腸桿菌雖非致病菌，但，多用于水細菌學(xué)檢查。大腸桿菌雖非致病菌，但在飲用水中超過一定數(shù)量，則表示受糞便污染，產(chǎn)氣腸在飲用水中超過一定數(shù)量，則表示受糞便污染，產(chǎn)氣腸桿菌也廣泛存在于自然界中，因此檢查水時要將兩者分桿菌也廣泛存在于自然界中，因此檢查水時要將兩者分開。開。 吲哚試驗是用于吲哚試驗是用于檢測吲哚檢測吲哚的產(chǎn)生，某的產(chǎn)生，某些細菌可產(chǎn)生色氨酸酶分解蛋白胨中的些細菌可產(chǎn)生色氨酸酶分解蛋白胨中的色氨色氨酸酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。對二甲基氨基苯甲醛對二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚（紅色）。遇吲哚形成玫瑰吲哚（紅色）。 甲基紅試驗是用

9、于檢測分解葡萄糖產(chǎn)甲基紅試驗是用于檢測分解葡萄糖產(chǎn)生有機酸如甲酸、乙酸、乳酸等，當(dāng)生有機酸如甲酸、乙酸、乳酸等，當(dāng)細菌細菌分解糖產(chǎn)酸時分解糖產(chǎn)酸時，培養(yǎng)基中的，培養(yǎng)基中的甲基紅指示劑甲基紅指示劑由由橘黃（橘黃（pH6.3pH6.3）變?yōu)樽優(yōu)榧t色（紅色（pH4.2pH4.2），），即即甲基紅反應(yīng)。甲基紅反應(yīng)。 3 試驗材料培養(yǎng)基培養(yǎng)基 蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗）蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗） 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（甲基紅試驗）葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（甲基紅試驗）菌種菌種 大腸桿菌大腸桿菌 產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌 4操作步驟（1）接種與培養(yǎng)）接種與培養(yǎng) 將將大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌各接種于

10、各接種于1 1支支蛋白胨水蛋白胨水培養(yǎng)培養(yǎng) 基（基（吲哚試驗吲哚試驗）。）。 將將大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌各接種于各接種于1 1支支葡萄糖蛋白胨葡萄糖蛋白胨 水水培養(yǎng)基（培養(yǎng)基（甲基紅試驗甲基紅試驗）。）。 37培養(yǎng)培養(yǎng)48小時。小時。（2） 結(jié)果觀察結(jié)果觀察 吲哚試驗吲哚試驗 在培養(yǎng)在培養(yǎng)4848h h后的蛋白胨水培養(yǎng)基中加入后的蛋白胨水培養(yǎng)基中加入3-43-4滴乙醚，搖動滴乙醚，搖動 數(shù)次靜置數(shù)次靜置1-31-3minmin，待乙醚上升后，沿試管徐徐加入待乙醚上升后，沿試管徐徐加入2 2滴吲滴吲 哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)。哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間

11、產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)。 甲基紅試驗甲基紅試驗 在培養(yǎng)在培養(yǎng)4848h h后的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基紅試劑后的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基紅試劑2 2 滴，培養(yǎng)基變紅者為陽性，變黃者為陰性。（注意：甲基滴，培養(yǎng)基變紅者為陽性，變黃者為陰性。（注意：甲基 紅試劑加得過多，可出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。）紅試劑加得過多，可出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。）甲基紅試驗甲基紅試驗陽性陽性陰性陰性對照對照大腸桿菌：大腸桿菌：+產(chǎn)氣腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：-陽性陽性吲哚試驗吲哚試驗大腸桿菌：大腸桿菌：+產(chǎn)氣腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：-陽性陽性陰性陰性對照對照產(chǎn)氣腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：+大腸桿菌：大腸桿菌：-伏伏普試驗普試驗試驗結(jié)果記

12、錄（試驗結(jié)果記錄（“+ +”表示陽性反應(yīng)，表示陽性反應(yīng)，“”表示陰性反應(yīng)）表示陰性反應(yīng)）菌名菌名試驗項目試驗項目吲哚試驗吲哚試驗甲基紅試驗甲基紅試驗大腸桿菌大腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌空白對照空白對照表表3 吲哚和甲基紅試驗結(jié)果吲哚和甲基紅試驗結(jié)果實實 驗驗 報報 告告按實驗內(nèi)容分別書寫。要求每個實驗寫出：按實驗內(nèi)容分別書寫。要求每個實驗寫出：1 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康? 實驗原理實驗原理3 實驗結(jié)果。實驗結(jié)果。 實驗結(jié)果用表格形式給出，并對實驗結(jié)果進行分析。實驗結(jié)果用表格形式給出，并對實驗結(jié)果進行分析。4 分析討論分析討論注：記錄生長情況用符號表示：注：記錄生長情況用符號表示：不生長；：不生長； + +：生長差；：生長差； + +：生長一般；：生長一般； + +：生長良好：生長良好 一一 糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗表表1 糖發(fā)酵試驗結(jié)果糖發(fā)酵試驗結(jié)果 試驗菌種試驗菌種 發(fā)酵特性發(fā)酵特性供試糖供試糖葡萄糖葡萄糖蔗糖蔗糖大腸桿菌大腸桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)氣枯草桿菌枯草桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)氣對照對照產(chǎn)酸、產(chǎn)氣產(chǎn)酸、產(chǎn)氣二二 好氣菌的氨化作用好氣菌的氨化作用土壤顆粒土壤顆粒枯草桿菌枯草桿菌大腸桿菌大腸桿菌空白對照空白對照培養(yǎng)液培養(yǎng)液渾濁程度渾濁程度 紅色石蕊試紅色石蕊試紙變色