綜合項目一--不同蔬菜水果中基本營養(yǎng)成分分析

1、綜合項目一不同蔬菜水果中基本營養(yǎng)成分分析實驗一總糖含量的測定（3,5- 二硝基水楊酸法）一、實驗?zāi)康?、掌握總糖的測定原理。2、學(xué)習(xí)用比色法測定還原糖的方法。二、實驗原理三、實驗試劑1、2mol/L 氫氧化鈉溶液：稱取4g 氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 50mL。2、3,5- 二硝基水楊酸試劑：稱取0.325g 3,5- 二硝基水楊酸溶于15mL熱蒸餾水中，溶解后移入50ml 容量瓶中，加入 2mol/L 氫氧化鈉溶液 16.25mL，再加入 2.25ml 丙三醇，搖勻，冷卻后定容至50mL。3、2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.04g 葡萄糖，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 20m

2、L。4、6mol/L 鹽酸：取 25mL濃鹽酸用蒸餾水稀釋至50mL。5、6mol/L 氫氧化鈉：稱取12g 氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL。四、實驗步驟1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取 6 支試管，按下表加入2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和蒸餾水：管號2mg/mL葡萄糖蒸餾水 /mL葡萄糖濃度OD標(biāo)準(zhǔn)溶液 /mL540mg/mL101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21.66102在上述試管中分別加入 3,5- 二硝基水楊酸試劑 2mL，搖勻后于沸水浴中加入 2min 進行顯色，取出后用流動水迅速冷卻，各加入蒸餾水 9mL，搖勻，在 540nm

3、 波長處測定光吸收值。以葡萄糖含量（ mg/mL）為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程。2、總糖的提取稱取 1g 實驗材料（如新鮮果蔬），充分研磨后， 放在錐形瓶中， 加入 6mol/L 鹽酸 10mL，蒸餾水 15mL，在沸水浴中加熱 30min。水解完畢后，冷卻至室溫后，加入 8mL 6mol/L 氫氧化鈉，最終用蒸餾水定容至 50mL，此為總糖水解液，用于總糖測定。3、總糖含量的測定取 4 支試管，按下表加入不同溶液：總糖水解液3,5- 二硝基管號蒸餾水 /mL水楊酸試劑OD/mL540/mL1102201230124012加完試劑后，搖勻后于沸水浴中加入2min

4、 進行顯色，取出后用流動水迅速冷卻，各加入蒸餾水9mL，搖勻，在 540nm波長處測定光吸收值。測定后，取樣品的光吸收值平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的糖含量（mg/mL）。4、計算總糖的百分含量總糖 =（C×V / m × 1000）×稀釋倍數(shù)× 0.9 × 100%式中 ,C 為總糖提取液的濃度mg/mL；V 為總糖提取液的總體積mL；m為樣品質(zhì)量 g五、實驗結(jié)果1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（ 1）光吸收值測得結(jié)果管號2mg/mL葡萄糖蒸餾水 /mL葡萄糖濃度OD540標(biāo)準(zhǔn)溶液 /mLmg/mL101020.20.80.430.40.60.840.

5、60.41.250.80.21.66102（ 2）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖：（ 3）回歸方程為：2、樣品總糖含量的測定（ 1）材料 _總糖含量的測定總糖水解液3,5- 二硝基管號蒸餾水 /mL水楊酸試劑OD/mL540/mL1102201230124012樣品的光吸收值平均值為。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算得出總糖濃度為_。請說明具體計算過程：從而得出樣品 _總糖的百分含量為 _。請說明具體計算過程：（ 2）材料 _總糖含量的測定總糖水解液3,5- 二硝基管號蒸餾水 /mL水楊酸試劑OD/mL540/mL1102201230124012樣品的光吸收值平均值為。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算得出總糖濃度為_。

6、請說明具體計算過程：從而得出樣品 _總糖的百分含量為 _。請說明具體計算過程：（ 3）材料 _總糖含量的測定總糖水解液3,5- 二硝基管號蒸餾水 /mL水楊酸試劑OD/mL540/mL1102201230124012樣品的光吸收值平均值為。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算得出總糖濃度為_。請說明具體計算過程：從而得出樣品 _總糖的百分含量為 _。請說明具體計算過程：3、對比分析不同樣品總糖含量。實驗二蛋白質(zhì)含量的測定（考馬斯亮藍(lán)法）一、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度的基本原理與方法。2、了解考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度的優(yōu)缺點。二、實驗原理三、實驗試劑1、0.15mol/L 氯化鈉溶液：

7、稱取0.2633g 氯化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至 30mL。2、0.1mg/mL牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）母液：稱取 0.01g 牛血清白蛋白溶于10mL 0.15mol/L 氯化鈉溶液中，配成濃度為 1mg/mL的溶液。（2）標(biāo)準(zhǔn)液：取母液1mL，用 0.15mol/L氯化鈉溶液定容至10mL，配成0.1mg/mL 的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。3、考馬斯亮藍(lán) G-250 試劑：稱取 0.005g 考馬斯亮藍(lán) G-250 溶于 2.5mL 95% 乙醇，加蒸餾水 40mL，加 5mL 85%磷酸，最后加蒸餾水定容至 50mL。四、實驗步驟1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線取 6 支試管，按下表加入各種試劑

8、。試劑加完后混勻，室溫靜置 3min，以 1 號管為空白調(diào)零，在 595nm處測定其吸光值。以蛋白質(zhì)含量（ mg/mL）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程。試劑 /mL管號1234560.1mg/mL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L 氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍(lán) G-250 試劑555555蛋白質(zhì)濃度（ ug/mL）020406080100OD5952、總蛋白的提取稱取 1g 實驗材料（如新鮮果蔬），加 5mL蒸餾水研磨， 過濾后將濾液用蒸餾水定容至 10mL。3、總蛋白測定取 3 支試管，分別加

9、 0.1mL 未知濃度的蛋白質(zhì)樣品液， 加 0.9mL 0.15mol/L氯化鈉溶液，再加入 5mL考馬斯亮藍(lán) G-250 試劑，搖勻，室溫靜置 3min，以 1 號管為空白管調(diào)零， 在 595nm處測其吸光值。 測定后，取樣品的光吸收值平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白濃度（ ug/mL）。4、蛋白質(zhì)含量（ mg/g）蛋白質(zhì)含量（ mg/g）=（C×VT） / （ 1000× VS×WF）式中， C 為蛋白質(zhì)提取液的濃度ug/mL；VT 為提取液總體積mL；VS為測定時加樣量 mL；WF為樣品鮮重 g。五、實驗結(jié)果1、牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（ 1）光吸收值測得

10、結(jié)果試劑 /mL管號1234560.1mg/mL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L 氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍(lán) G-250 試劑555555蛋白質(zhì)濃度（ ug/mL）020406080100OD595（ 2）標(biāo)準(zhǔn)曲線圖：（ 3）回歸方程為：2、樣品蛋白質(zhì)含量的測定（ 1 ）樣品 _的光吸收值分別為 _、 _、_，其平均值為 _。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算得出蛋白質(zhì)濃度為_。請說明具體計算過程：從而得出樣品 _蛋白質(zhì)的含量為 _。請說明具體計算過程：（ 2 ）樣品 _的光吸收值分別為 _、 _、_，其平均值為 _。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸

11、方程計算得出蛋白質(zhì)濃度為_。請說明具體計算過程：從而得出樣品 _蛋白質(zhì)的含量為 _。請說明具體計算過程：（ 3 ）樣品 _的光吸收值分別為 _、 _、_，其平均值為 _。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算得出蛋白質(zhì)濃度為_。請說明具體計算過程：從而得出樣品 _蛋白質(zhì)的含量為 _。請說明具體計算過程：3、對比分析不同樣品蛋白質(zhì)含量。實驗三維生素 C含量的測定（ 2,6- 二氯酚靛酚滴定法）一、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握 2,6- 二氯酚靛酚滴定法測定維生素C的原理與方法。2、了解水果與蔬菜中維生素C 的含量情況。二、實驗原理三、實驗試劑1、2%草酸：稱取1g 草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL。2、

12、1%草酸：稱取0.5g草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL。3、0.1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液： 稱取 0.0025g 抗壞血酸溶于少量1%草酸溶液中，最終加 1%草酸定容至 25mL。用棕色試劑瓶保存于4。最好臨用前配制。4、0.05% 2,6- 二氯酚靛酚溶液：稱取0.025g 2,6-二氯酚靛酚溶于 15mL含有 0.0052g 碳酸氫鈉的熱水中，冷卻后加水定容至 50mL。濾去不溶物，用棕色試劑瓶保存于 4。約可保存 1 周。四、實驗步驟1、樣品的制備稱取 10g 實驗材料（如新鮮果蔬） ，加入 5-10mL 2%草酸，研磨成漿狀，過濾后，將濾液定容至 25mL。2、標(biāo)準(zhǔn)液滴定

13、準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液 1mL置于 50mL錐形瓶中，加 9mL1%草酸，以 0.05% 2,6- 二氯酚靛酚溶液滴定至淡粉色， 并保持 15s 不褪色，即達(dá)到終點；取 10mL1% 草酸作空白對照， 按以上方法滴定。 記錄所用染料溶液的體積 （mL），計算出 1mL 染料溶液所能氧化抗壞血酸的量（ mg）。3、樣品滴定準(zhǔn)備吸取樣品濾液2 份，每份為 10mL，分別放入 2 個錐形瓶內(nèi)，另取 10mL1%草酸作空白對照滴定；按上面的操作滴定并記錄所用染料溶液的體積（mL）。4、維生素 C 含量的計算取 2 份樣品滴定所用染料體積平均值，代入下列公式中計算100g 樣品還原型抗壞血酸含量。維生

14、素 C含量（ mg/100g 樣品） =（VA-VB）× C×T×100/ （ D ×W）式中， VA為滴定樣品所好用的染料的平均用量mL；VB為滴定空白對照所用的染料的平均用量mL；C 為樣品提取液的總體積mL；D為滴定時所取的樣品提取液體積 mL；T 為 1mL染料能氧化抗壞血酸質(zhì)量mg（由操作 2 計算出）； W為待測樣品的質(zhì)量 g。五、實驗結(jié)果1、標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液滴定時，所用染料溶液的體積為 _，從而計算出1mL染料溶液所能氧化抗壞血酸的量為_。2、樣品維生素 C 含量的測定（ 1）樣品 _滴定時所用染料溶液的體積分別為_和_。其平均用量為 _。

15、則樣品維生素 C 含量為 _。請說明具體計算過程。（ 2）樣品 _滴定時所用染料溶液的體積分別為 _和_。其平均用量為 _。則樣品維生素 C 含量為 _。請說明具體計算過程。（ 3）樣品 _滴定時所用染料溶液的體積分別為 _和_。其平均用量為 _。則樣品維生素 C 含量為 _。請說明具體計算過程。3、對比分析不同樣品維生素C 含量。實驗四纖維素含量的測定（比色法）一、實驗?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握比色法測定纖維素的原理與方法。2、了解水果與蔬菜中纖維素的含量情況。二、實驗原理三、實驗試劑1、60%硫酸：量取 30mL濃硫酸，緩慢倒入15mL蒸餾水中，最終加水定容至50mL。2、濃硫酸3、2%蒽酮試劑：

16、將 1g 蒽酮溶解于 50mL乙酸乙酯中， 存放在棕色試劑瓶中。4、100ug/mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液：（1）母液：稱取 25mg纖維素，放入燒杯中，將燒杯放入冰浴中，然后加冷的 60%硫酸 15-17mL，在冷的條件下消化處理 20-30min ，用 60%硫酸定容至 25mL。（2）吸取母液 5mL放入另一個容量瓶中，將容量瓶放入冰浴中，加蒸餾水定容至 50mL。四、實驗步驟1、纖維素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取 6 支試管，按下表加入不同試劑：試劑 / mL管號123456100ug/ mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.40纖維素含量 ug/ mL020406080

17、100OD620將各管搖勻后，向每管加入0.5mL 2%蒽酮，再沿管壁加入5mL濃硫酸，緩慢搖勻后，靜置1min。然后在 620nm下，測得不同含量纖維素溶液的吸光值。以測得的吸光值為Y 值，以對應(yīng)的纖維素含量為x 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線， 得出回歸方程。2、樣品纖維素含量的測定（1）稱取 1g 實驗材料（如新鮮果蔬）置于燒杯中，將燒杯置于冷水浴中，加入 60%硫酸 15mL，并消化 30min，然后將消化好的纖維素溶液轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，并用 60%硫酸定容至 25mL。然后用布氏漏斗過濾于另一個燒杯中。（2）取上述溶液 2mL于試管中，加入0.5mL 2%蒽酮試劑，并沿管壁加5mL濃硫酸，緩慢搖勻后，靜置12min，然后在 620nm波長下測定光吸收值。3、纖維素百分含量纖維素百分含量 =（ X× 10-6 ×a / W ）× 100%式中， X 為按按回歸方程計算出的纖維素含量ug；W為樣品重量 g；10-6 為微克換算成克的系數(shù)； a 為樣品稀釋倍數(shù)。五、實驗結(jié)果1、纖維素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（ 1）光吸收值測得結(jié)果試劑 / mL管號123456100ug/ mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.40纖維素含量 ug/ mL02040