無菌原料藥模擬工藝驗證指南草案

1、無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）（征求意見稿）X%國家食品藥品監(jiān)督管理總局食品藥品審核查驗中心二0六年十月.目錄1. 目的-1-2. 定義-1-3. 范圍-1-4. 原則-15. 無菌原料藥生產工藝及模擬范圍 -2 -6. 模擬試驗方案的設計及實施過程要求 -5 -6.1. 開展模擬試驗的前提條件 -5-6.2. 基 于無菌風險的模擬試驗方案的設計 -6 -6.3 .模擬灌裝數量和持續(xù)時間 -11-6.4. 容器裝量-12 -6.5. 模擬試驗方法的選擇 -12 -6.6. 最差條件的選擇 -13 -6.7. 模擬試驗過程的干預設計 146.8. 培養(yǎng)與觀察-15 -6.9. 環(huán)境及監(jiān)控-1

2、8 -7. 可接受標準與結果評價 -20 -8. 污染調查與糾正措施 -21 -9. 模擬試驗的周期與再驗證 -22 -10. 無菌工藝模擬試驗的局限性 -22 -11. 術語-23 -12. 參考文獻 -24 -無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）1. 目的為指導和規(guī)范無菌原料藥生產企業(yè)開展無菌工藝模擬驗證， 充分評價無菌原料藥生產過程的無菌保障水平，確保所生產無菌 原料藥的安全性，依據藥品生產質量管理規(guī)范（2010版）及附錄，制定本指南。2. 定義本指南所述的無菌工藝模擬試驗，是指采用適當的培養(yǎng)基或 介質，模擬原料藥生產中無菌操作的全過程，以評價該無菌工藝 無菌保障水平的一系列活動。T3.

3、范圍3.1. 本指南涵蓋了無菌原料藥無菌工藝模擬試驗的基本要求、不同工藝模式的特殊要求、試驗的基本流程等內容，適用于無菌原 料藥的無菌工藝驗證。32 本指南所述條款是在現(xiàn)有無菌工藝技術基礎上提出的相關 要求，旨在規(guī)范企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗活動。在科學的基礎 上，鼓勵新技術、新設備的引入，以提高無菌原料藥無菌保障水 平。4. 原則在對無菌生產工藝充分認知和生產經驗累積的基礎上，應結 合工藝、設備、人員和環(huán)境等要素定期開展無菌工藝模擬試驗， 以確認無菌生產過程的可靠性，同時也為企業(yè)及時識別風險進而 改進無菌控制措施提供數據支持。開展無菌工藝模擬試驗應遵循 以下原則：4.1. 以現(xiàn)行藥品GMF法規(guī)

4、要求為準則，評價無菌生產過程的法規(guī) 符合性，不符合規(guī)范要求的無菌工藝過程，不能通過模擬試驗來 證實其無菌保證措施的合理性。42 基于無菌工藝設計， 對無菌生產過程實施風險評估，識別生產過程風險點以便評估現(xiàn)有控制措施的有效性，評估結果應在試 驗方案設計時給予考慮。4.3. 基于無菌風險，應充分考慮硬件裝備水平與無菌風險的關聯(lián)性，結合無菌生產過程所涉及到的工藝、設備、人員以及操作時 限等因素針對性開展模擬試驗，盡可能模擬實際無菌生產全過程，應特別關注“開放”操作、人工干預等高風險過程。4.4. 如生產線有多種無菌生產工藝，應評價模擬試驗方案對各無菌工藝過程的適用性。應對有顯著差異的無菌工藝過程開展

5、模擬 試驗，或在綜合評價不同無菌生產工藝的基礎上，設計模擬驗證，以評價每種無菌工藝過程的可靠性。5. 無菌原料藥生產工藝及模擬范圍無菌原料藥的無菌生產工藝通常為：原料藥進一步精制和無 菌操作的結合，作為無菌原料藥生產工藝的開始，多采用除菌過 濾或其他除菌技術將物料中的微生物去除，之后采取無菌操作技 術的工藝單元，最終獲得免受微生物污染的原料藥。無菌工藝模 擬試驗應從第一步無菌操作開始，即經除菌過濾或其他方法獲取 無菌藥液，直至無菌產品完全密圭寸結束。與無菌制劑工藝相比，無菌原料藥的生產工藝一般更復雜， 工藝設備選型呈現(xiàn)出非標化和功能設計差異化等特點。即使是同 一無菌工藝過程，因設備選型和系統(tǒng)密

6、閉程度的不同，無菌風險 也存在著顯著差異。目前，無菌原料藥常用無菌工藝包括：結晶工藝、冷凍工藝和噴霧干燥工藝。5.1. 無菌結晶工藝典型的結晶工藝流程是從非無菌物料開始，經除菌過濾進入無菌結晶罐內，通過調整物料溫度或加入其他溶劑使物料中有效 活性成分結晶或沉淀析出，該過程會因控制晶體生長的需要而引 入晶種。養(yǎng)晶結束后進入固液分離設備，去除母液獲得濕品，必 要時對濕品進行洗滌，濕品在固液分離設備內進行干燥或通過輔 助密閉系統(tǒng)轉移至其他干燥設備內進行干燥，之后根據產品特性 和最終質量要求進行必要的整粒（或微粉化），以控制產品粒度 大小和分布，混粉也是常用的工藝單元，主要解決產品均一性的 問題。最后

7、產品經分裝、密圭寸，將產品嚴圭寸于容器內。52 無菌凍干工藝常見的無菌凍干工藝流程包括：液體物料經除菌過濾得到無菌料液，在無菌防護下使用加料槍將無菌料液注入凍干機托盤內， 按照規(guī)定程序進行冷凍真空干燥，干燥結束后經除菌級呼吸器釋 放凍干機內的真空。在無菌防護下打開凍干機門，將干品由托盤 轉移至無菌料倉內，或在無菌防護下通過真空密閉吸料系統(tǒng)將干 品轉移至下一工序，干品通常需要整粒和混粉工藝，以得到質量 均一的干品，最后經分裝、密圭寸，將產品嚴圭寸于容器內。53無菌噴霧干燥工藝無菌噴干工藝適用于耐熱性好的無菌原料藥，工藝流程通常 包括：液體物料經除菌過濾后持續(xù)穩(wěn)定地注入干燥塔內，在無菌 高壓空氣的

8、作用下瞬間霧化成液滴，并與流動的無菌熱空氣發(fā)生 傳質傳熱，液滴因水分迅速蒸發(fā)而變?yōu)榉勰罡善?，獲得的干品 經氣固分離器收集至無菌料倉內，或直接分裝至最終市售包裝內產品在料倉內可實現(xiàn)進一步混粉操作，隨后經分裝機完成干品的 分裝、密封等過程，將產品嚴封于容器內。5.4. 密閉與開放系統(tǒng)通常無菌工藝由一系列的無菌單元操作組成，單元操作分為 “密閉”或“開放”系統(tǒng)，采用“密閉”系統(tǒng)可更好的保障無菌 水平。關鍵的無菌操作如采用了 “開放”系統(tǒng)，宜使用隔離操作 技術進行無菌防護。模擬試驗應包括無菌工藝的各單元操作系統(tǒng) 以及各單元間的轉運系統(tǒng)。5.4.1. “密閉”系統(tǒng)“密閉”系統(tǒng)是通過物理隔離的方式，阻止

9、環(huán)境中微生物進 入系統(tǒng)內部，保護藥品免受外界的污染。因“密閉”系統(tǒng)設計上 的優(yōu)越性，在無菌操作過程提供了可靠的無菌保護措施。企業(yè)進 行無菌原料藥工藝設計時，應盡量考慮采用“密閉”系統(tǒng)的可行 性?！懊荛]”系統(tǒng)至少具備以下特征：能夠實現(xiàn)在線滅菌（SIP）或系統(tǒng)在使用前進行密閉和滅菌。 基于結構的優(yōu)化設計， 能夠在一個生產周期內保持系統(tǒng)的完整性。 且在與其他密閉系統(tǒng)連接時，能夠保持系統(tǒng)完整性不受破壞。 在實施預防性維護過程中，有相應措施保護系統(tǒng)的完整性。5.42“開放”系統(tǒng)“開放”系統(tǒng)是不符合“密閉”系統(tǒng)規(guī)定的一項或多項特征的 系統(tǒng)，開發(fā)系統(tǒng)條件下進行的操作是影響最終藥品無菌特性的重 要環(huán)節(jié)，如設備

10、（或管道）的無菌連接、分裝過程容器的更換等， 是引入微生物污染的高風險過程。模擬試驗方案設計時應重點考 察以上過程中無菌保障措施的有效性。6. 模擬試驗方案的設計及實施過程要求模擬試驗是一個系統(tǒng)性工程，通過模擬無菌生產工藝全過程，證實生產過程中無菌保障措施的有效性。因此，模擬試驗實施過 程應關注以下幾方面：6.1. 開展模擬試驗的前提條件在無菌工藝模擬試驗之前應確認與無菌工藝相關的支持性系 統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)的驗證已完成，并達到了可接受的標準。6.1.1. 工藝設備、公用系統(tǒng)和輔助設施按照預期要求完成了設 計、安裝及與無菌生產有關的性能確認。6.1.2. 工藝設備、公用系統(tǒng)、輔助設施滅菌方法完成了相

11、應的 驗證，物品及廠房、設施所使用消毒劑及消毒方式完成了相關的 驗證。6.1.3. 藥液及與產品接觸的氣體、設備組件、容器、器具滅菌 工藝完成了相應的驗證。6.1.4. 無菌生產區(qū)域的氣流及環(huán)境達到了設計要求，并能穩(wěn)定 運行。6.1.5. 根據無菌生產工藝要求建立了相關受控操作文件。6.1.6. 參與模擬灌裝試驗的人員接受了藥品GMP無菌操作、微生物知識以及實施模擬試驗的培訓。6.1.7. 進入無菌潔凈區(qū)的全部人員通過了更衣程序的確認，確 認了每位參與者可進入的區(qū)域和其所允許的無菌操作項目，并采 用文件形式或其他限制措施。6.2.基于無菌風險的模擬試驗方案的設計模擬試驗方案設計應結合無菌生產工

12、藝，盡量與實際無菌操 作過程保持一致，以求試驗結果真實反映生產過程的無菌保障水 平。6.2.1. 無菌生產工藝的風險評估無菌生產工藝的設計基于對產品特性、工藝技術和無菌保證 措施的認知和經驗的累積，設計模擬試驗方案前應對無菌生產過程開展系統(tǒng)性風險評估，以充分識別無菌生產過程中潛在風險點。622.模擬試驗方案設計時，應重點考察和評估高風險無菌操作過程，如溶媒結晶工藝中引入晶種的過程。無菌生產工藝的暴 露操作是影響最終原料藥無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設備（或管道）的無菌連接、無菌容器的轉運和更換、灌裝等關鍵操作，模擬試 驗方案設計應考察以上過程無菌保證措施的有效性。6.2.3. 證實無菌操作人員滿足無

13、菌生產要求，是實施模擬試驗 的目的之一，有人員參與的無菌操作，應考察評估來源于人員的 污染途徑。進行模擬試驗方案設計時，應結合工藝過程中的“開 放”環(huán)節(jié)，重點考察有人員參與的關鍵操作，評價人員素質和防 護措施的可靠性。模擬介質的選擇與評價模擬介質的選擇應考慮模擬介質與無菌工藝的適宜性，結合被模擬產品的特 點以及模擬介質的可過濾性、澄清度、滅菌方式等方面選擇模擬 介質，以盡可能模擬無菌生產工藝。不應選擇具有抑菌性的模擬 介質，以確保模擬試驗結果的可信度。通常可采用的模擬介質包 括：促進微生物生長的培養(yǎng)基、安慰劑物料等，一般情況下推薦 使用培養(yǎng)基（如 TSB。培養(yǎng)基的選擇胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TS

14、B是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對無菌工藝環(huán)境中源自人體的細菌、芽孢和真菌有良好的促生長效 果，是無菌工藝模擬試驗常用的培養(yǎng)基。如果產品需充入惰性氣體、儲存在無氧條件，無菌操作在嚴格的厭氧環(huán)境中進行時（即氧氣濃度低于0.1%），應考慮采用厭氧培養(yǎng)基如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM。在厭氧的無菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生 物時，需評估增加厭氧培養(yǎng)基。用于模擬抑菌性產品的培養(yǎng)基，如有必要需評估抑菌性產品殘存對其促生長能力及模擬試驗結果的影響。包含動物來源成分的培養(yǎng)基，應考慮培養(yǎng)基引入外源污染的 風險。如針對BSE（可傳染性海綿腦病）/TSE （瘋牛病）可提供無 BSE

15、（可傳染性海綿腦病）/TSE （瘋牛?。┳C明，亦可選用植物來 源的培養(yǎng)基。625. 培養(yǎng)基的配制625.1. 模擬試驗的培養(yǎng)基應在控制區(qū)域進行準備，需注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴散、殘留及去除，防止其殘存于環(huán)境及設 備表面而造成微生物滋生。通常按照最終培養(yǎng)濃度3%勺要求配制培養(yǎng)基。配制后的培養(yǎng)基應盡快滅菌或除菌過濾，宜進入無菌儲 罐或容器儲存?zhèn)溆谩?252培養(yǎng)基在模擬試驗前應恢復至室溫，即用型無菌液體 培養(yǎng)基儲存條件和使用條件應遵循生產商要求6.26培養(yǎng)基的除菌與滅菌6.261. 除菌過濾采用除菌過濾的方式便于同生產工藝銜接，但在培養(yǎng)基選擇 階段應考慮其過濾性。由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)

16、基 除菌過濾的濾器型號可與產品使用的過濾器不同，培養(yǎng)基顆?；?生物負載較大等原因引起除菌過濾器的堵塞時，可增加預過濾。 亦需考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細菌和霉菌生長的風險，以避免微 生物生長導致培養(yǎng)基過濾性能降低。針對以上情況應進行風險評 估并采取合理應對措施。6262 濕熱滅菌如用于模擬試驗的大體積培養(yǎng)基采用在線滅菌或滅菌釜濕熱 滅菌，會產生受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象。應對該滅菌方式進 行風險評估和驗證。滅菌過程應遵循生產商推薦的滅菌時間和溫度的建議，并對 火菌過程予以確認，以確保火菌后培養(yǎng)基的促生長能力，避免過 度滅菌使培養(yǎng)基碳化造成降低其促生長性能。為避免過度加熱可 采用濕熱滅菌與除菌過濾聯(lián)

17、合使用的方式，但均應進行促生長能 力試驗。6263 輻照滅菌使用輻照滅菌的培養(yǎng)基粉末，應在無菌環(huán)境下進行無菌配置 等操作。輻照滅菌過程應經驗證，驗證中應使用耐輻射的菌種， 并在產品質量報告體現(xiàn)菌種、劑量信息等重要驗證信息。627. 培養(yǎng)基促生長能力試驗627.1. 應在無菌工藝模擬試驗前或同時，及14天培養(yǎng)后按照現(xiàn)行中國藥典方法對培養(yǎng)基進行促生長能力試驗，并且用于促生長能力試驗的培養(yǎng)基應與用于模擬工藝試驗培養(yǎng)基經過相同工藝（如除熱源、滅菌、充氮、灌裝、凍干等），以證明本次驗證所 用培養(yǎng)基的性能。6272培養(yǎng)基促生長能力試驗使用的菌種，如：白色念珠菌（CMCC9800）、黑曲霉（CMCC98O0

18、3、枯草芽孢桿菌（CMCC6350）、 金黃色葡萄球菌（CMCC2600P、銅綠假單胞菌（CMCC1010）、 生孢梭菌（CMCC6494），在試驗中除標準菌株之外應考慮加入環(huán) 境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長試驗接種量應不大于 100CFU628. J 其它模擬介質的選擇及評價6.2.8.1. 其它模擬介質的選擇對于無菌粉末產品及特殊劑型產品，如懸濁液、軟膏/乳膏/乳液/凝膠等，在無菌工藝模擬試驗中會使用其它模擬介質，如安 慰劑、賦形劑等，根據劑型特點、生產工藝及設備、模擬介質特 點選擇適當的模擬介質。模擬介質的流動性應盡可能類似于被模 擬產品，并應易于進行分裝等工藝操作。模擬介質還應

19、易于滅菌， 無抑菌性，易溶解或易分散至培養(yǎng)基中。常用模擬介質有聚乙二 醇、乳糖、甘露醇、氯化鈉、凡士林等。模擬介質的滅菌過程應 經驗證并提供相關報告，其內容包括滅菌方式對模擬介質特性有 無不良影響，滅菌后的無菌性，如采用輻照滅菌包裝形式應與在 模擬試驗時使用的一致等重要信息等。模擬試驗使用的模擬介質 包裝形式應與被模擬的無菌粉末保證形式一致。6282其它模擬介質的評價在使用模擬介質前應對其適用性進行確認，包括無菌試驗、 抑菌試驗、溶解度試驗以及溶解時間實驗等。抑菌試驗通常使用 枯草芽孢桿菌（CMCC6350）和白色念珠菌（CMCC9800），應考 慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。無菌模

20、擬介質由無 菌WFI溶解后，加入到無菌培養(yǎng)基中，達到模擬工藝選用的濃度 范圍，通常是1%-5%每個濃度接種10-100CFU，陽性對照接種到 不含無菌模擬介質的試管中，在20-25 C培養(yǎng)7天所有試管應明顯渾濁。6.3. 模擬灌裝數量和持續(xù)時間6.3.1. 無菌工藝模擬灌裝數量應足以保證評價的有效性及完成 模擬方案中設計的各種干預活動，應不低于正常生產批量。應通 過風險評估對所設計的灌裝數量、持續(xù)時間、模擬方式、預期收 率作出合理說明。632. 模擬試驗所用模擬介質的數量，應能夠覆蓋無菌工藝設 備的全部內表面，特別是混粉過程，應確保模擬介質覆蓋混粉器 內壁全部表面。6.3.3. 考慮到模擬最差

21、條件的需要，模擬試驗維持時間不應低于實際生產用時。6.4. 容器裝量容器中培養(yǎng)基灌裝量應考慮適宜微生物生長的需要和容器內 表面覆蓋的要求，灌裝量不必與產品相同，通常應能達到容器體 積的1/31/2，即可保證產品通過倒置和旋轉接觸到所有內表面 并有足夠的氧氣支持微生物的生長，以利于對培養(yǎng)基的觀察。6.5. 模擬試驗方法的選擇通常無菌原料藥生產工藝由多個工藝單元構成。模擬試驗方 案的設計應考慮試驗過程可連續(xù)性問題，以確定采用連續(xù)工藝模 擬還是分段模擬。6.5.1. 連續(xù)工藝模擬方式6.5.1.1. 這種模擬方式是將整個無菌過程視為一個整體，模擬 介質不間斷地完成各個單元操作，并在最終分裝容器內進行

22、無菌 培養(yǎng)和判定，以評價生產過程的無菌保障水平。6.5.1.2. 連續(xù)工藝模擬方式的選擇，取決于模擬介質在模擬過 程中的適用性，如噴霧干燥工藝可采用液體模擬介質，通過模擬 噴霧干燥過程，可將液體模擬介質轉化為固體模擬介質，進而實 現(xiàn)分裝、密封等過程。6.5.13連續(xù)工藝模擬可以真實反映整體無菌保障水平。但也有其不足之處，如發(fā)現(xiàn)污染，調查污染源的難度較大。6.52分段模擬方式6.5.2.1. 分段模擬方式是將無菌生產過程按照工藝單元分割成 若干段，逐段進行模擬試驗，分段數量取決于工藝過程和模擬介 質。模擬試驗最終的結果是各段獨立模擬試驗結果的累積，對一 些無菌工藝而言，該方式可根據需要變換采用固

23、體或液體模擬介 質，保證與實際工藝過程的一致。6.5.22 分段工藝模擬的優(yōu)點是可以特定評價某一單元操作的 無菌風險，如發(fā)現(xiàn)微生物污染，相對于連續(xù)工藝模擬更易于發(fā)現(xiàn) 污染源，進而采取針對性糾正措施。6.5.23 分段模擬方式也有不足之處，如：需要更多種類或數 量的模擬介質；模擬介質需要多次無菌化處理，增加潛在污染風 險；需要采集更多的物料、環(huán)境和人員監(jiān)測樣本進行評價。6.6. 最差條件的選擇最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產狀況和環(huán) 境。為了確認無菌工藝風險控制的有效性，應通過風險評估并結 合無菌生產工藝、設備裝備水平、人員數量和干預等因素來設計 模擬試驗最差條件。包括但不限于以下方

24、面：6.6.1. 人員應充分考慮人員及其活動對無菌生產工藝帶來的風險，如模 擬生產過程的最多人數，當操作人員數量減少可能導致其它方面 污染風險增加時，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應 包括日常參與到無菌生產的全部人員，如生產操作、取樣、環(huán)境 監(jiān)測和設備設施維護人員，同時應考慮以上人員交叉作業(yè)、班次 輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。662.工藝時間應考慮模擬實際生產操作過程中設備設施、分裝器具、最終容器消毒或滅菌后放置的最長時間及最長的工藝保留時限等，如:混粉或分裝前的等待時限。6.6.3. 灌裝速度模擬試驗應涵蓋產品實際灌裝速度范圍，基于無菌風險的角 度分析評價灌裝速度對工藝過程及其他

25、方面的影響程度，如采用 最慢的灌裝速度、最大的容器用以模擬最長暴露時間，也可采用 最快的灌裝速度、最小的容器用以模擬最大操作強度/難度。6.6.4. 環(huán)境模擬試驗挑戰(zhàn)的最差環(huán)境應考慮選擇單批產品無菌生產周期 末端、間歇式生產的空調系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產期間周期性 滅菌最長的時間間隔。無菌工藝模擬試驗期間的環(huán)境及器具的消 毒處理應依據正常生產期間的消毒方法進行，應避免消毒劑的過 度使用。665.日常生產中，針對微生物污染事件而制定了糾正措施。在模擬試驗時，應對糾正措施的有效性給予確認。6.7. 模擬試驗過程的干預設計6.7.1. 概念無菌生產工藝中人員及人員活動是最大的微生物污染源，因 此，本

26、指南中的干預是指由操作人員按照相關規(guī)定參與與無菌工 藝生產有關的所有操作活動。干預可分為固有的干預和糾正性干 預。固有干預是指常規(guī)和有計劃的無菌操作，如裝載膠塞，環(huán)境 監(jiān)控，設備安裝等；糾正性干預則是指對無菌生產過程的糾正或 調整，如生產過程中清除破碎的瓶子，排除卡住的膠塞，更換部 件、設備故障排除、手工加塞等。6.7.2. 原則在無菌生產過程各種允許的干預活動應該文件化，明確規(guī)定 正常生產活動和干預活動，模擬試驗中干預設計應與實際的生產 活動保持一致，模擬試驗不應挑戰(zhàn)不合理的干預，以證明其合理 性。在模擬試驗方案中應制定干預清單和實施計劃，模擬試驗時 逐一實施并記錄。6.7.3. 模擬類型及

27、頻次6.731. 無菌模擬試驗方案中應明確規(guī)定固有干預、糾正性干預（如維修、故障停機、設備調試）的頻次、類型及復雜程度（如 簡單干預：倒瓶剔除等；復雜干預：灌裝機泵及針頭裝配、設備故障維修等）。如模擬試驗用于評估一定階段的日常生產無菌保 障水平，干預應盡量與實際的生產工藝一致。6.732. 對于生產線存在多種相似的組合（如：不同劑型的相同工序、同種劑型的不同容器規(guī)格）時，可采用最差條件的組合 以代表其他相似的組合。通常，固有干預及經常發(fā)生的糾正性干 預應在每次模擬中都實施，偶發(fā)性的干預可周期性地模擬。對難 以預測的設備故障或偶發(fā)性干預，如無菌生產過程意外暫停或重 啟、無菌狀態(tài)下設備、設施偶發(fā)故

28、障排除等，應在模擬試驗方案 中設計與此類操作相關的所有干預。模擬試驗應設計并實施足夠 多的糾正性干預。干預頻次的設計應考慮生產過程按比例覆蓋模 擬試驗的全過程，用以支持實際的無菌產品的評價。無菌取樣過程，應考慮分布在分裝的前、中、后階段，調整裝量、取樣、重復密封過程均應考慮模擬，并為生產過程中 處理該類問題提供參考。6.7.4. 人員實施干預的人員（應包括操作、維修人員等）應經過相關的 培訓和考核并能按規(guī)定的程序實施各種干預。標準化的簡單的固 有干預可由某些操作人員實施并據此評價其他人。復雜性高的操 作，如裝配灌裝機等，從事此類操作的人員均應在無菌工藝模擬 試驗中參與操作，操作條件不應優(yōu)于日常

29、生產的操作條件。6.7.5. 干預后產品（容器）的處理實際工藝中如明確規(guī)定受干預影響的產品（容器）應從生產 線上剔除，則在模擬試驗時也可剔除，并應在方案中明確規(guī)定剔 除的數量和位置，模擬試驗時產生的這類產品（容器）可不培養(yǎng)。無需培養(yǎng)的培養(yǎng)基也應予以記錄并評估其合理性。如在干預發(fā)生 前已經密封，但在日常生產中按規(guī)定不需要剔除的產品，模擬試 驗時也應保留、培養(yǎng)并納入評估。6.76 記錄模擬試驗過程中的所有干預必須記錄，用以評估干預對無菌 保證的影響。糾正性干預記錄的內容至少應包括糾正性干預的類 型、位置、次數；固有干預記錄至少包括干預內容、分類和發(fā)生 頻率等信息。6.8. 培養(yǎng)與觀察6.8.1.

30、模擬介質的處理無菌工藝模擬試驗結束后， 應對所使用的模擬介質（培養(yǎng)基、 安慰劑物料）進行全部處理和培養(yǎng)。非培養(yǎng)基模擬介質可通過適 當的無菌過濾器系統(tǒng)將微生物轉移至濾膜上，之后將濾膜浸入培 養(yǎng)基內進行培養(yǎng)；也可在最終包裝容器內加注無菌培養(yǎng)基進行培 養(yǎng)。培養(yǎng)基的濃度應能支持潛在微生物的生長，女口： TSB般濃度控制在3%水平。6.8.2. 培養(yǎng)條件6.821. 應確保全部模擬介質接受無菌檢查。培養(yǎng)基如在分裝容器內培養(yǎng)，應對容器翻轉、倒置等，確保培養(yǎng)基包括密封件的所 有內表面。培養(yǎng)時間至少14天，可選擇兩個溫度進行培養(yǎng)：在20C -25 C培養(yǎng)至少7天，然后在30C -35 C培養(yǎng)至少7天。如選擇其

31、 他培養(yǎng)計劃，應有試驗數據支持所選培養(yǎng)條件的適用性。6.8.22 在整個培養(yǎng)期間應連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。如實際生產過程 中，分裝容器內需要填充惰性氣體，在模擬試驗過程應考慮用無 菌空氣替代避免影響微生物培養(yǎng)。6.8.23 培養(yǎng)后的檢查培養(yǎng)結束后，應對所有模擬灌裝產品逐支進行無菌性檢查，通常應在合適的照度下進行目視觀察，檢查人員應具有無菌檢查 背景，以正確判定微生物是否生長。在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)異常情況時應進行進一步調查。如在培養(yǎng)后檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產品，應進行適當的原因調查并采取糾正措施。當灌裝不透明的容器，應考慮將轉移至透明容器觀察，以確保有陽性時能被觀察到

32、。6.9. 環(huán)境及監(jiān)控6.9.1. 環(huán)境監(jiān)控方案設計應通過風險評估確定日常生產的環(huán)境監(jiān)控的各要素，如取樣點、取樣對象、取樣頻率、警戒和糾偏標準、實施方法等。評估環(huán)境監(jiān)測采樣帶來的風險，在最差條件選擇時根據風險評估結果 選擇環(huán)境監(jiān)測需要模擬的程度，以充分評估環(huán)境監(jiān)測對無菌工藝 的影響。模擬試驗時應采用與日常生產相同的環(huán)境監(jiān)控方案為基 礎，并模擬生產狀況，包括采樣儀器、耗材的轉移、消毒等，任 何異于日常環(huán)境監(jiān)控的情況都應有說明和記錄。通過有計劃的環(huán) 境監(jiān)控證明模擬試驗過程中的環(huán)境符合要求。6.92環(huán)境監(jiān)控數據處理環(huán)境（包括人員）監(jiān)控的數據結果用于評估模擬生產過程中 的環(huán)境條件是否適宜于生產。當模擬

33、試驗出現(xiàn)陽性結果時，環(huán)境 監(jiān)測數據可用于進行根本原因的調查。模擬試驗時發(fā)生的環(huán)境偏差并不是模擬試驗成功的否決條件， 是否通過試驗取決于調查的結果。環(huán)境監(jiān)測結果異常時，即使試 驗結果成功，也應進行必要的調查和糾正，以降低污染最終產品 的機率。即使最終決定在環(huán)境監(jiān)控結果超出糾偏標準時無菌工藝 模擬試驗依然通過，也不意味著日常生產可以在同等環(huán)境偏差的 條件下進行。6.9.3. 其他應該考慮的問題：6.9.3.1. 儀器耗材傳遞關鍵潔凈區(qū)的專用監(jiān)測設備，專用設備在模擬工藝試驗時不 得混用避免引起污染。6.9.32表面（包括人員）采樣應控制采樣時間及力度以保證采樣效果。根據生產環(huán)境消毒 劑以及生產產品的

34、抑菌性，采樣應消除抑菌性并驗證中和和效果。采樣后立即消毒其表面。重要區(qū)域采樣點避免動物源性污染。6.933. 懸浮粒子監(jiān)測A 級潔凈區(qū)進行懸浮粒子監(jiān)測應包括關鍵操作的全過程中，例如設備組裝操作過程等。生產過程中的污染（如活生物、放射危 害）可能損壞塵埃粒子計數器時，應當在設備調試操作和模擬操 作期間進行測試。A級潔凈區(qū)監(jiān)測的頻率和取樣量，應能及時發(fā)現(xiàn)所有人為干預、偶發(fā)事件及任何系統(tǒng)的損壞。7. 可接受標準與結果評價7.1. 無菌工藝模擬試驗可接受標準應當遵循現(xiàn)行GMP無菌藥品附錄中的有關規(guī)定。7.2. 可接受標準存在定性和定量兩種方式，定性標準意味著模擬試驗只接受零污染的結果，適用于任何模擬試

35、驗可接受標準的設定，排除了定量標準中識別微生物污染來源的困惑和潛在不確定 性風險。因此，本指南推薦企業(yè)采用定性判定標準。7.3. 企業(yè)應制定符合法規(guī)的內控標準，在制定內控標準時，應考 慮以下幾方面因素：7.4. 模擬試驗應和實際生產盡可能接近；應基于風險評估的原則制定科學合理的內控限度；出現(xiàn)任何陽性均應進行徹底、規(guī)范的 調查，在科學評估的基礎上采取適當的糾偏措施。7.5. 采用良好設計且受控的無菌灌裝系統(tǒng)，特別是自動化的系統(tǒng)如吹灌封、隔離器等，污染率可大幅度降低。7.6. 即使每次模擬試驗的污染率都符合可接受標準，如果連續(xù)進行的模擬試驗批中反復出現(xiàn)陽性意味著無菌生產工藝存在系統(tǒng)性 問題，必須得

36、到有效解決。8. 污染調查與糾正措施8.1. 無菌工藝模擬試驗存在污染，即意味著無菌保證可能存在問題，出現(xiàn)的任何污染樣品均應視為偏差并徹底調查，并為改進無 菌工藝提供數據支持。 污染調查流程及方法應在方案中明確規(guī)定。82可通過查看無菌工藝模擬試驗的錄像或現(xiàn)場記錄，以還原模擬試驗過程中人員操作行為、干預及設備運行等真實狀況，有利 于分析問題的來源。對無菌工藝模擬試驗實施過程相關的所有記 錄進行詳細調查，并關注各種偏差、驗證、變更等，所有偏離原 始驗證狀態(tài)情況均應逐一評估并說明。檢查所有相關人員的培訓 和資質確認記錄。8.3. 應對模擬試驗中發(fā)現(xiàn)的微生物進行鑒別，并列入企業(yè)微生物菌種庫，以便開展污

37、染途徑調查。此外，也可借助文獻檢索來查 找污染途徑。8.4. 調查的關鍵是查找污染來源，結合調查需要，應制定一個完 整的取樣和微生物鑒別計劃，調查過程應有記錄并歸檔。調查結 果應形成書面報告并得到質量管理部門的批準8.5. 如調查找到指定的原因，應制定糾正預防措施，并再次進行模擬試驗，以證明措施的有效性。如調查無指定原因，應對生產 工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評估，在現(xiàn)有模擬試驗方案的基 礎上增加取樣點和頻次，以獲得更多數據支持原因調查，同時應 適當增加試驗批次，以證明無菌生產工藝具備持續(xù)、可靠的無菌 保障水平。9. 模擬試驗的周期與再驗證9.1. 新建無菌生產線，在正式投產前，每班次應當連續(xù)進行 合格的模擬試驗。9.2. 正常生產中，每班次每半年應至少進行一次模擬試驗。對于 因其它原因停產一定周期的生產線，在恢復正式生產前應考慮進 行無菌工藝模擬試驗。9.3. 空氣凈化系統(tǒng)、無菌生產用設備設施、無菌工藝及人員重 大變更或設備的重大維修后，應進行風險評估確認再模擬試驗批 次。9.4. 應充分評估生產線的風險，在發(fā)現(xiàn)設施、人員、環(huán)境或工