無菌原料藥模擬工藝驗證指南草案

1、無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）（征求意見稿）X%國家食品藥品監(jiān)督管理總局食品藥品審核查驗中心二0六年十月.目錄1. 目的-1-2. 定義-1-3. 范圍-1-4. 原則-15. 無菌原料藥生產(chǎn)工藝及模擬范圍 -2 -6. 模擬試驗方案的設(shè)計及實施過程要求 -5 -6.1. 開展模擬試驗的前提條件 -5-6.2. 基 于無菌風(fēng)險的模擬試驗方案的設(shè)計 -6 -6.3 .模擬灌裝數(shù)量和持續(xù)時間 -11-6.4. 容器裝量-12 -6.5. 模擬試驗方法的選擇 -12 -6.6. 最差條件的選擇 -13 -6.7. 模擬試驗過程的干預(yù)設(shè)計 146.8. 培養(yǎng)與觀察-15 -6.9. 環(huán)境及監(jiān)控-1

2、8 -7. 可接受標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果評價 -20 -8. 污染調(diào)查與糾正措施 -21 -9. 模擬試驗的周期與再驗證 -22 -10. 無菌工藝模擬試驗的局限性 -22 -11. 術(shù)語-23 -12. 參考文獻(xiàn) -24 -無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）1. 目的為指導(dǎo)和規(guī)范無菌原料藥生產(chǎn)企業(yè)開展無菌工藝模擬驗證， 充分評價無菌原料藥生產(chǎn)過程的無菌保障水平，確保所生產(chǎn)無菌 原料藥的安全性，依據(jù)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010版）及附錄，制定本指南。2. 定義本指南所述的無菌工藝模擬試驗，是指采用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或 介質(zhì)，模擬原料藥生產(chǎn)中無菌操作的全過程，以評價該無菌工藝 無菌保障水平的一系列活動。T3.

3、范圍3.1. 本指南涵蓋了無菌原料藥無菌工藝模擬試驗的基本要求、不同工藝模式的特殊要求、試驗的基本流程等內(nèi)容，適用于無菌原 料藥的無菌工藝驗證。32 本指南所述條款是在現(xiàn)有無菌工藝技術(shù)基礎(chǔ)上提出的相關(guān) 要求，旨在規(guī)范企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗活動。在科學(xué)的基礎(chǔ) 上，鼓勵新技術(shù)、新設(shè)備的引入，以提高無菌原料藥無菌保障水 平。4. 原則在對無菌生產(chǎn)工藝充分認(rèn)知和生產(chǎn)經(jīng)驗累積的基礎(chǔ)上，應(yīng)結(jié) 合工藝、設(shè)備、人員和環(huán)境等要素定期開展無菌工藝模擬試驗， 以確認(rèn)無菌生產(chǎn)過程的可靠性，同時也為企業(yè)及時識別風(fēng)險進而 改進無菌控制措施提供數(shù)據(jù)支持。開展無菌工藝模擬試驗應(yīng)遵循 以下原則：4.1. 以現(xiàn)行藥品GMF法規(guī)

4、要求為準(zhǔn)則，評價無菌生產(chǎn)過程的法規(guī) 符合性，不符合規(guī)范要求的無菌工藝過程，不能通過模擬試驗來 證實其無菌保證措施的合理性。42 基于無菌工藝設(shè)計， 對無菌生產(chǎn)過程實施風(fēng)險評估，識別生產(chǎn)過程風(fēng)險點以便評估現(xiàn)有控制措施的有效性，評估結(jié)果應(yīng)在試 驗方案設(shè)計時給予考慮。4.3. 基于無菌風(fēng)險，應(yīng)充分考慮硬件裝備水平與無菌風(fēng)險的關(guān)聯(lián)性，結(jié)合無菌生產(chǎn)過程所涉及到的工藝、設(shè)備、人員以及操作時 限等因素針對性開展模擬試驗，盡可能模擬實際無菌生產(chǎn)全過程，應(yīng)特別關(guān)注“開放”操作、人工干預(yù)等高風(fēng)險過程。4.4. 如生產(chǎn)線有多種無菌生產(chǎn)工藝，應(yīng)評價模擬試驗方案對各無菌工藝過程的適用性。應(yīng)對有顯著差異的無菌工藝過程開展

5、模擬 試驗，或在綜合評價不同無菌生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)上，設(shè)計模擬驗證，以評價每種無菌工藝過程的可靠性。5. 無菌原料藥生產(chǎn)工藝及模擬范圍無菌原料藥的無菌生產(chǎn)工藝通常為：原料藥進一步精制和無 菌操作的結(jié)合，作為無菌原料藥生產(chǎn)工藝的開始，多采用除菌過 濾或其他除菌技術(shù)將物料中的微生物去除，之后采取無菌操作技 術(shù)的工藝單元，最終獲得免受微生物污染的原料藥。無菌工藝模 擬試驗應(yīng)從第一步無菌操作開始，即經(jīng)除菌過濾或其他方法獲取 無菌藥液，直至無菌產(chǎn)品完全密圭寸結(jié)束。與無菌制劑工藝相比，無菌原料藥的生產(chǎn)工藝一般更復(fù)雜， 工藝設(shè)備選型呈現(xiàn)出非標(biāo)化和功能設(shè)計差異化等特點。即使是同 一無菌工藝過程，因設(shè)備選型和系統(tǒng)密

6、閉程度的不同，無菌風(fēng)險 也存在著顯著差異。目前，無菌原料藥常用無菌工藝包括：結(jié)晶工藝、冷凍工藝和噴霧干燥工藝。5.1. 無菌結(jié)晶工藝典型的結(jié)晶工藝流程是從非無菌物料開始，經(jīng)除菌過濾進入無菌結(jié)晶罐內(nèi)，通過調(diào)整物料溫度或加入其他溶劑使物料中有效 活性成分結(jié)晶或沉淀析出，該過程會因控制晶體生長的需要而引 入晶種。養(yǎng)晶結(jié)束后進入固液分離設(shè)備，去除母液獲得濕品，必 要時對濕品進行洗滌，濕品在固液分離設(shè)備內(nèi)進行干燥或通過輔 助密閉系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至其他干燥設(shè)備內(nèi)進行干燥，之后根據(jù)產(chǎn)品特性 和最終質(zhì)量要求進行必要的整粒（或微粉化），以控制產(chǎn)品粒度 大小和分布，混粉也是常用的工藝單元，主要解決產(chǎn)品均一性的 問題。最后

7、產(chǎn)品經(jīng)分裝、密圭寸，將產(chǎn)品嚴(yán)圭寸于容器內(nèi)。52 無菌凍干工藝常見的無菌凍干工藝流程包括：液體物料經(jīng)除菌過濾得到無菌料液，在無菌防護下使用加料槍將無菌料液注入凍干機托盤內(nèi)， 按照規(guī)定程序進行冷凍真空干燥，干燥結(jié)束后經(jīng)除菌級呼吸器釋 放凍干機內(nèi)的真空。在無菌防護下打開凍干機門，將干品由托盤 轉(zhuǎn)移至無菌料倉內(nèi)，或在無菌防護下通過真空密閉吸料系統(tǒng)將干 品轉(zhuǎn)移至下一工序，干品通常需要整粒和混粉工藝，以得到質(zhì)量 均一的干品，最后經(jīng)分裝、密圭寸，將產(chǎn)品嚴(yán)圭寸于容器內(nèi)。53無菌噴霧干燥工藝無菌噴干工藝適用于耐熱性好的無菌原料藥，工藝流程通常 包括：液體物料經(jīng)除菌過濾后持續(xù)穩(wěn)定地注入干燥塔內(nèi)，在無菌 高壓空氣的

8、作用下瞬間霧化成液滴，并與流動的無菌熱空氣發(fā)生 傳質(zhì)傳熱，液滴因水分迅速蒸發(fā)而變?yōu)榉勰罡善?，獲得的干品 經(jīng)氣固分離器收集至無菌料倉內(nèi)，或直接分裝至最終市售包裝內(nèi)產(chǎn)品在料倉內(nèi)可實現(xiàn)進一步混粉操作，隨后經(jīng)分裝機完成干品的 分裝、密封等過程，將產(chǎn)品嚴(yán)封于容器內(nèi)。5.4. 密閉與開放系統(tǒng)通常無菌工藝由一系列的無菌單元操作組成，單元操作分為 “密閉”或“開放”系統(tǒng)，采用“密閉”系統(tǒng)可更好的保障無菌 水平。關(guān)鍵的無菌操作如采用了 “開放”系統(tǒng)，宜使用隔離操作 技術(shù)進行無菌防護。模擬試驗應(yīng)包括無菌工藝的各單元操作系統(tǒng) 以及各單元間的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)。5.4.1. “密閉”系統(tǒng)“密閉”系統(tǒng)是通過物理隔離的方式，阻止

9、環(huán)境中微生物進 入系統(tǒng)內(nèi)部，保護藥品免受外界的污染。因“密閉”系統(tǒng)設(shè)計上 的優(yōu)越性，在無菌操作過程提供了可靠的無菌保護措施。企業(yè)進 行無菌原料藥工藝設(shè)計時，應(yīng)盡量考慮采用“密閉”系統(tǒng)的可行 性?！懊荛]”系統(tǒng)至少具備以下特征：能夠?qū)崿F(xiàn)在線滅菌（SIP）或系統(tǒng)在使用前進行密閉和滅菌。 基于結(jié)構(gòu)的優(yōu)化設(shè)計， 能夠在一個生產(chǎn)周期內(nèi)保持系統(tǒng)的完整性。 且在與其他密閉系統(tǒng)連接時，能夠保持系統(tǒng)完整性不受破壞。 在實施預(yù)防性維護過程中，有相應(yīng)措施保護系統(tǒng)的完整性。5.42“開放”系統(tǒng)“開放”系統(tǒng)是不符合“密閉”系統(tǒng)規(guī)定的一項或多項特征的 系統(tǒng)，開發(fā)系統(tǒng)條件下進行的操作是影響最終藥品無菌特性的重 要環(huán)節(jié)，如設(shè)備

10、（或管道）的無菌連接、分裝過程容器的更換等， 是引入微生物污染的高風(fēng)險過程。模擬試驗方案設(shè)計時應(yīng)重點考 察以上過程中無菌保障措施的有效性。6. 模擬試驗方案的設(shè)計及實施過程要求模擬試驗是一個系統(tǒng)性工程，通過模擬無菌生產(chǎn)工藝全過程，證實生產(chǎn)過程中無菌保障措施的有效性。因此，模擬試驗實施過 程應(yīng)關(guān)注以下幾方面：6.1. 開展模擬試驗的前提條件在無菌工藝模擬試驗之前應(yīng)確認(rèn)與無菌工藝相關(guān)的支持性系 統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)的驗證已完成，并達(dá)到了可接受的標(biāo)準(zhǔn)。6.1.1. 工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)和輔助設(shè)施按照預(yù)期要求完成了設(shè) 計、安裝及與無菌生產(chǎn)有關(guān)的性能確認(rèn)。6.1.2. 工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)、輔助設(shè)施滅菌方法完成了相

11、應(yīng)的 驗證，物品及廠房、設(shè)施所使用消毒劑及消毒方式完成了相關(guān)的 驗證。6.1.3. 藥液及與產(chǎn)品接觸的氣體、設(shè)備組件、容器、器具滅菌 工藝完成了相應(yīng)的驗證。6.1.4. 無菌生產(chǎn)區(qū)域的氣流及環(huán)境達(dá)到了設(shè)計要求，并能穩(wěn)定 運行。6.1.5. 根據(jù)無菌生產(chǎn)工藝要求建立了相關(guān)受控操作文件。6.1.6. 參與模擬灌裝試驗的人員接受了藥品GMP無菌操作、微生物知識以及實施模擬試驗的培訓(xùn)。6.1.7. 進入無菌潔凈區(qū)的全部人員通過了更衣程序的確認(rèn)，確 認(rèn)了每位參與者可進入的區(qū)域和其所允許的無菌操作項目，并采 用文件形式或其他限制措施。6.2.基于無菌風(fēng)險的模擬試驗方案的設(shè)計模擬試驗方案設(shè)計應(yīng)結(jié)合無菌生產(chǎn)工

12、藝，盡量與實際無菌操 作過程保持一致，以求試驗結(jié)果真實反映生產(chǎn)過程的無菌保障水 平。6.2.1. 無菌生產(chǎn)工藝的風(fēng)險評估無菌生產(chǎn)工藝的設(shè)計基于對產(chǎn)品特性、工藝技術(shù)和無菌保證 措施的認(rèn)知和經(jīng)驗的累積，設(shè)計模擬試驗方案前應(yīng)對無菌生產(chǎn)過程開展系統(tǒng)性風(fēng)險評估，以充分識別無菌生產(chǎn)過程中潛在風(fēng)險點。622.模擬試驗方案設(shè)計時，應(yīng)重點考察和評估高風(fēng)險無菌操作過程，如溶媒結(jié)晶工藝中引入晶種的過程。無菌生產(chǎn)工藝的暴 露操作是影響最終原料藥無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的無菌連接、無菌容器的轉(zhuǎn)運和更換、灌裝等關(guān)鍵操作，模擬試 驗方案設(shè)計應(yīng)考察以上過程無菌保證措施的有效性。6.2.3. 證實無菌操作人員滿足無

13、菌生產(chǎn)要求，是實施模擬試驗 的目的之一，有人員參與的無菌操作，應(yīng)考察評估來源于人員的 污染途徑。進行模擬試驗方案設(shè)計時，應(yīng)結(jié)合工藝過程中的“開 放”環(huán)節(jié)，重點考察有人員參與的關(guān)鍵操作，評價人員素質(zhì)和防 護措施的可靠性。模擬介質(zhì)的選擇與評價模擬介質(zhì)的選擇應(yīng)考慮模擬介質(zhì)與無菌工藝的適宜性，結(jié)合被模擬產(chǎn)品的特 點以及模擬介質(zhì)的可過濾性、澄清度、滅菌方式等方面選擇模擬 介質(zhì)，以盡可能模擬無菌生產(chǎn)工藝。不應(yīng)選擇具有抑菌性的模擬 介質(zhì)，以確保模擬試驗結(jié)果的可信度。通?？刹捎玫哪M介質(zhì)包 括：促進微生物生長的培養(yǎng)基、安慰劑物料等，一般情況下推薦 使用培養(yǎng)基（如 TSB。培養(yǎng)基的選擇胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TS

14、B是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對無菌工藝環(huán)境中源自人體的細(xì)菌、芽孢和真菌有良好的促生長效 果，是無菌工藝模擬試驗常用的培養(yǎng)基。如果產(chǎn)品需充入惰性氣體、儲存在無氧條件，無菌操作在嚴(yán)格的厭氧環(huán)境中進行時（即氧氣濃度低于0.1%），應(yīng)考慮采用厭氧培養(yǎng)基如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM。在厭氧的無菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復(fù)發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產(chǎn)品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生 物時，需評估增加厭氧培養(yǎng)基。用于模擬抑菌性產(chǎn)品的培養(yǎng)基，如有必要需評估抑菌性產(chǎn)品殘存對其促生長能力及模擬試驗結(jié)果的影響。包含動物來源成分的培養(yǎng)基，應(yīng)考慮培養(yǎng)基引入外源污染的 風(fēng)險。如針對BSE（可傳染性海綿腦?。?TSE （瘋牛?。┛商峁o BSE

15、（可傳染性海綿腦病）/TSE （瘋牛?。┳C明，亦可選用植物來 源的培養(yǎng)基。625. 培養(yǎng)基的配制625.1. 模擬試驗的培養(yǎng)基應(yīng)在控制區(qū)域進行準(zhǔn)備，需注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴散、殘留及去除，防止其殘存于環(huán)境及設(shè) 備表面而造成微生物滋生。通常按照最終培養(yǎng)濃度3%勺要求配制培養(yǎng)基。配制后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快滅菌或除菌過濾，宜進入無菌儲 罐或容器儲存?zhèn)溆谩?252培養(yǎng)基在模擬試驗前應(yīng)恢復(fù)至室溫，即用型無菌液體 培養(yǎng)基儲存條件和使用條件應(yīng)遵循生產(chǎn)商要求6.26培養(yǎng)基的除菌與滅菌6.261. 除菌過濾采用除菌過濾的方式便于同生產(chǎn)工藝銜接，但在培養(yǎng)基選擇 階段應(yīng)考慮其過濾性。由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)

16、基 除菌過濾的濾器型號可與產(chǎn)品使用的過濾器不同，培養(yǎng)基顆粒或 生物負(fù)載較大等原因引起除菌過濾器的堵塞時，可增加預(yù)過濾。 亦需考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌生長的風(fēng)險，以避免微 生物生長導(dǎo)致培養(yǎng)基過濾性能降低。針對以上情況應(yīng)進行風(fēng)險評 估并采取合理應(yīng)對措施。6262 濕熱滅菌如用于模擬試驗的大體積培養(yǎng)基采用在線滅菌或滅菌釜濕熱 滅菌，會產(chǎn)生受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象。應(yīng)對該滅菌方式進 行風(fēng)險評估和驗證。滅菌過程應(yīng)遵循生產(chǎn)商推薦的滅菌時間和溫度的建議，并對 火菌過程予以確認(rèn)，以確?；鹁笈囵B(yǎng)基的促生長能力，避免過 度滅菌使培養(yǎng)基碳化造成降低其促生長性能。為避免過度加熱可 采用濕熱滅菌與除菌過濾聯(lián)

17、合使用的方式，但均應(yīng)進行促生長能 力試驗。6263 輻照滅菌使用輻照滅菌的培養(yǎng)基粉末，應(yīng)在無菌環(huán)境下進行無菌配置 等操作。輻照滅菌過程應(yīng)經(jīng)驗證，驗證中應(yīng)使用耐輻射的菌種， 并在產(chǎn)品質(zhì)量報告體現(xiàn)菌種、劑量信息等重要驗證信息。627. 培養(yǎng)基促生長能力試驗627.1. 應(yīng)在無菌工藝模擬試驗前或同時，及14天培養(yǎng)后按照現(xiàn)行中國藥典方法對培養(yǎng)基進行促生長能力試驗，并且用于促生長能力試驗的培養(yǎng)基應(yīng)與用于模擬工藝試驗培養(yǎng)基經(jīng)過相同工藝（如除熱源、滅菌、充氮、灌裝、凍干等），以證明本次驗證所 用培養(yǎng)基的性能。6272培養(yǎng)基促生長能力試驗使用的菌種，如：白色念珠菌（CMCC9800）、黑曲霉（CMCC98O0

18、3、枯草芽孢桿菌（CMCC6350）、 金黃色葡萄球菌（CMCC2600P、銅綠假單胞菌（CMCC1010）、 生孢梭菌（CMCC6494），在試驗中除標(biāo)準(zhǔn)菌株之外應(yīng)考慮加入環(huán) 境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長試驗接種量應(yīng)不大于 100CFU628. J 其它模擬介質(zhì)的選擇及評價6.2.8.1. 其它模擬介質(zhì)的選擇對于無菌粉末產(chǎn)品及特殊劑型產(chǎn)品，如懸濁液、軟膏/乳膏/乳液/凝膠等，在無菌工藝模擬試驗中會使用其它模擬介質(zhì)，如安 慰劑、賦形劑等，根據(jù)劑型特點、生產(chǎn)工藝及設(shè)備、模擬介質(zhì)特 點選擇適當(dāng)?shù)哪M介質(zhì)。模擬介質(zhì)的流動性應(yīng)盡可能類似于被模 擬產(chǎn)品，并應(yīng)易于進行分裝等工藝操作。模擬介質(zhì)還應(yīng)

19、易于滅菌， 無抑菌性，易溶解或易分散至培養(yǎng)基中。常用模擬介質(zhì)有聚乙二 醇、乳糖、甘露醇、氯化鈉、凡士林等。模擬介質(zhì)的滅菌過程應(yīng) 經(jīng)驗證并提供相關(guān)報告，其內(nèi)容包括滅菌方式對模擬介質(zhì)特性有 無不良影響，滅菌后的無菌性，如采用輻照滅菌包裝形式應(yīng)與在 模擬試驗時使用的一致等重要信息等。模擬試驗使用的模擬介質(zhì) 包裝形式應(yīng)與被模擬的無菌粉末保證形式一致。6282其它模擬介質(zhì)的評價在使用模擬介質(zhì)前應(yīng)對其適用性進行確認(rèn)，包括無菌試驗、 抑菌試驗、溶解度試驗以及溶解時間實驗等。抑菌試驗通常使用 枯草芽孢桿菌（CMCC6350）和白色念珠菌（CMCC9800），應(yīng)考 慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。無菌模

20、擬介質(zhì)由無 菌WFI溶解后，加入到無菌培養(yǎng)基中，達(dá)到模擬工藝選用的濃度 范圍，通常是1%-5%每個濃度接種10-100CFU，陽性對照接種到 不含無菌模擬介質(zhì)的試管中，在20-25 C培養(yǎng)7天所有試管應(yīng)明顯渾濁。6.3. 模擬灌裝數(shù)量和持續(xù)時間6.3.1. 無菌工藝模擬灌裝數(shù)量應(yīng)足以保證評價的有效性及完成 模擬方案中設(shè)計的各種干預(yù)活動，應(yīng)不低于正常生產(chǎn)批量。應(yīng)通 過風(fēng)險評估對所設(shè)計的灌裝數(shù)量、持續(xù)時間、模擬方式、預(yù)期收 率作出合理說明。632. 模擬試驗所用模擬介質(zhì)的數(shù)量，應(yīng)能夠覆蓋無菌工藝設(shè) 備的全部內(nèi)表面，特別是混粉過程，應(yīng)確保模擬介質(zhì)覆蓋混粉器 內(nèi)壁全部表面。6.3.3. 考慮到模擬最差

21、條件的需要，模擬試驗維持時間不應(yīng)低于實際生產(chǎn)用時。6.4. 容器裝量容器中培養(yǎng)基灌裝量應(yīng)考慮適宜微生物生長的需要和容器內(nèi) 表面覆蓋的要求，灌裝量不必與產(chǎn)品相同，通常應(yīng)能達(dá)到容器體 積的1/31/2，即可保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到所有內(nèi)表面 并有足夠的氧氣支持微生物的生長，以利于對培養(yǎng)基的觀察。6.5. 模擬試驗方法的選擇通常無菌原料藥生產(chǎn)工藝由多個工藝單元構(gòu)成。模擬試驗方 案的設(shè)計應(yīng)考慮試驗過程可連續(xù)性問題，以確定采用連續(xù)工藝模 擬還是分段模擬。6.5.1. 連續(xù)工藝模擬方式6.5.1.1. 這種模擬方式是將整個無菌過程視為一個整體，模擬 介質(zhì)不間斷地完成各個單元操作，并在最終分裝容器內(nèi)進行

22、無菌 培養(yǎng)和判定，以評價生產(chǎn)過程的無菌保障水平。6.5.1.2. 連續(xù)工藝模擬方式的選擇，取決于模擬介質(zhì)在模擬過 程中的適用性，如噴霧干燥工藝可采用液體模擬介質(zhì)，通過模擬 噴霧干燥過程，可將液體模擬介質(zhì)轉(zhuǎn)化為固體模擬介質(zhì)，進而實 現(xiàn)分裝、密封等過程。6.5.13連續(xù)工藝模擬可以真實反映整體無菌保障水平。但也有其不足之處，如發(fā)現(xiàn)污染，調(diào)查污染源的難度較大。6.52分段模擬方式6.5.2.1. 分段模擬方式是將無菌生產(chǎn)過程按照工藝單元分割成 若干段，逐段進行模擬試驗，分段數(shù)量取決于工藝過程和模擬介 質(zhì)。模擬試驗最終的結(jié)果是各段獨立模擬試驗結(jié)果的累積，對一 些無菌工藝而言，該方式可根據(jù)需要變換采用固

23、體或液體模擬介 質(zhì)，保證與實際工藝過程的一致。6.5.22 分段工藝模擬的優(yōu)點是可以特定評價某一單元操作的 無菌風(fēng)險，如發(fā)現(xiàn)微生物污染，相對于連續(xù)工藝模擬更易于發(fā)現(xiàn) 污染源，進而采取針對性糾正措施。6.5.23 分段模擬方式也有不足之處，如：需要更多種類或數(shù) 量的模擬介質(zhì)；模擬介質(zhì)需要多次無菌化處理，增加潛在污染風(fēng) 險；需要采集更多的物料、環(huán)境和人員監(jiān)測樣本進行評價。6.6. 最差條件的選擇最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán) 境。為了確認(rèn)無菌工藝風(fēng)險控制的有效性，應(yīng)通過風(fēng)險評估并結(jié) 合無菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水平、人員數(shù)量和干預(yù)等因素來設(shè)計 模擬試驗最差條件。包括但不限于以下方

24、面：6.6.1. 人員應(yīng)充分考慮人員及其活動對無菌生產(chǎn)工藝帶來的風(fēng)險，如模 擬生產(chǎn)過程的最多人數(shù)，當(dāng)操作人員數(shù)量減少可能導(dǎo)致其它方面 污染風(fēng)險增加時，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應(yīng) 包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境 監(jiān)測和設(shè)備設(shè)施維護人員，同時應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次 輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。662.工藝時間應(yīng)考慮模擬實際生產(chǎn)操作過程中設(shè)備設(shè)施、分裝器具、最終容器消毒或滅菌后放置的最長時間及最長的工藝保留時限等，如:混粉或分裝前的等待時限。6.6.3. 灌裝速度模擬試驗應(yīng)涵蓋產(chǎn)品實際灌裝速度范圍，基于無菌風(fēng)險的角 度分析評價灌裝速度對工藝過程及其他

25、方面的影響程度，如采用 最慢的灌裝速度、最大的容器用以模擬最長暴露時間，也可采用 最快的灌裝速度、最小的容器用以模擬最大操作強度/難度。6.6.4. 環(huán)境模擬試驗挑戰(zhàn)的最差環(huán)境應(yīng)考慮選擇單批產(chǎn)品無菌生產(chǎn)周期 末端、間歇式生產(chǎn)的空調(diào)系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產(chǎn)期間周期性 滅菌最長的時間間隔。無菌工藝模擬試驗期間的環(huán)境及器具的消 毒處理應(yīng)依據(jù)正常生產(chǎn)期間的消毒方法進行，應(yīng)避免消毒劑的過 度使用。665.日常生產(chǎn)中，針對微生物污染事件而制定了糾正措施。在模擬試驗時，應(yīng)對糾正措施的有效性給予確認(rèn)。6.7. 模擬試驗過程的干預(yù)設(shè)計6.7.1. 概念無菌生產(chǎn)工藝中人員及人員活動是最大的微生物污染源，因 此，本

26、指南中的干預(yù)是指由操作人員按照相關(guān)規(guī)定參與與無菌工 藝生產(chǎn)有關(guān)的所有操作活動。干預(yù)可分為固有的干預(yù)和糾正性干 預(yù)。固有干預(yù)是指常規(guī)和有計劃的無菌操作，如裝載膠塞，環(huán)境 監(jiān)控，設(shè)備安裝等；糾正性干預(yù)則是指對無菌生產(chǎn)過程的糾正或 調(diào)整，如生產(chǎn)過程中清除破碎的瓶子，排除卡住的膠塞，更換部 件、設(shè)備故障排除、手工加塞等。6.7.2. 原則在無菌生產(chǎn)過程各種允許的干預(yù)活動應(yīng)該文件化，明確規(guī)定 正常生產(chǎn)活動和干預(yù)活動，模擬試驗中干預(yù)設(shè)計應(yīng)與實際的生產(chǎn) 活動保持一致，模擬試驗不應(yīng)挑戰(zhàn)不合理的干預(yù)，以證明其合理 性。在模擬試驗方案中應(yīng)制定干預(yù)清單和實施計劃，模擬試驗時 逐一實施并記錄。6.7.3. 模擬類型及

27、頻次6.731. 無菌模擬試驗方案中應(yīng)明確規(guī)定固有干預(yù)、糾正性干預(yù)（如維修、故障停機、設(shè)備調(diào)試）的頻次、類型及復(fù)雜程度（如 簡單干預(yù)：倒瓶剔除等；復(fù)雜干預(yù)：灌裝機泵及針頭裝配、設(shè)備故障維修等）。如模擬試驗用于評估一定階段的日常生產(chǎn)無菌保 障水平，干預(yù)應(yīng)盡量與實際的生產(chǎn)工藝一致。6.732. 對于生產(chǎn)線存在多種相似的組合（如：不同劑型的相同工序、同種劑型的不同容器規(guī)格）時，可采用最差條件的組合 以代表其他相似的組合。通常，固有干預(yù)及經(jīng)常發(fā)生的糾正性干 預(yù)應(yīng)在每次模擬中都實施，偶發(fā)性的干預(yù)可周期性地模擬。對難 以預(yù)測的設(shè)備故障或偶發(fā)性干預(yù)，如無菌生產(chǎn)過程意外暫?；蛑?啟、無菌狀態(tài)下設(shè)備、設(shè)施偶發(fā)故

28、障排除等，應(yīng)在模擬試驗方案 中設(shè)計與此類操作相關(guān)的所有干預(yù)。模擬試驗應(yīng)設(shè)計并實施足夠 多的糾正性干預(yù)。干預(yù)頻次的設(shè)計應(yīng)考慮生產(chǎn)過程按比例覆蓋模 擬試驗的全過程，用以支持實際的無菌產(chǎn)品的評價。無菌取樣過程，應(yīng)考慮分布在分裝的前、中、后階段，調(diào)整裝量、取樣、重復(fù)密封過程均應(yīng)考慮模擬，并為生產(chǎn)過程中 處理該類問題提供參考。6.7.4. 人員實施干預(yù)的人員（應(yīng)包括操作、維修人員等）應(yīng)經(jīng)過相關(guān)的 培訓(xùn)和考核并能按規(guī)定的程序?qū)嵤└鞣N干預(yù)。標(biāo)準(zhǔn)化的簡單的固 有干預(yù)可由某些操作人員實施并據(jù)此評價其他人。復(fù)雜性高的操 作，如裝配灌裝機等，從事此類操作的人員均應(yīng)在無菌工藝模擬 試驗中參與操作，操作條件不應(yīng)優(yōu)于日常

29、生產(chǎn)的操作條件。6.7.5. 干預(yù)后產(chǎn)品（容器）的處理實際工藝中如明確規(guī)定受干預(yù)影響的產(chǎn)品（容器）應(yīng)從生產(chǎn) 線上剔除，則在模擬試驗時也可剔除，并應(yīng)在方案中明確規(guī)定剔 除的數(shù)量和位置，模擬試驗時產(chǎn)生的這類產(chǎn)品（容器）可不培養(yǎng)。無需培養(yǎng)的培養(yǎng)基也應(yīng)予以記錄并評估其合理性。如在干預(yù)發(fā)生 前已經(jīng)密封，但在日常生產(chǎn)中按規(guī)定不需要剔除的產(chǎn)品，模擬試 驗時也應(yīng)保留、培養(yǎng)并納入評估。6.76 記錄模擬試驗過程中的所有干預(yù)必須記錄，用以評估干預(yù)對無菌 保證的影響。糾正性干預(yù)記錄的內(nèi)容至少應(yīng)包括糾正性干預(yù)的類 型、位置、次數(shù)；固有干預(yù)記錄至少包括干預(yù)內(nèi)容、分類和發(fā)生 頻率等信息。6.8. 培養(yǎng)與觀察6.8.1.

30、模擬介質(zhì)的處理無菌工藝模擬試驗結(jié)束后， 應(yīng)對所使用的模擬介質(zhì)（培養(yǎng)基、 安慰劑物料）進行全部處理和培養(yǎng)。非培養(yǎng)基模擬介質(zhì)可通過適 當(dāng)?shù)臒o菌過濾器系統(tǒng)將微生物轉(zhuǎn)移至濾膜上，之后將濾膜浸入培 養(yǎng)基內(nèi)進行培養(yǎng)；也可在最終包裝容器內(nèi)加注無菌培養(yǎng)基進行培 養(yǎng)。培養(yǎng)基的濃度應(yīng)能支持潛在微生物的生長，女口： TSB般濃度控制在3%水平。6.8.2. 培養(yǎng)條件6.821. 應(yīng)確保全部模擬介質(zhì)接受無菌檢查。培養(yǎng)基如在分裝容器內(nèi)培養(yǎng)，應(yīng)對容器翻轉(zhuǎn)、倒置等，確保培養(yǎng)基包括密封件的所 有內(nèi)表面。培養(yǎng)時間至少14天，可選擇兩個溫度進行培養(yǎng)：在20C -25 C培養(yǎng)至少7天，然后在30C -35 C培養(yǎng)至少7天。如選擇其

31、 他培養(yǎng)計劃，應(yīng)有試驗數(shù)據(jù)支持所選培養(yǎng)條件的適用性。6.8.22 在整個培養(yǎng)期間應(yīng)連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。如實際生產(chǎn)過程 中，分裝容器內(nèi)需要填充惰性氣體，在模擬試驗過程應(yīng)考慮用無 菌空氣替代避免影響微生物培養(yǎng)。6.8.23 培養(yǎng)后的檢查培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)對所有模擬灌裝產(chǎn)品逐支進行無菌性檢查，通常應(yīng)在合適的照度下進行目視觀察，檢查人員應(yīng)具有無菌檢查 背景，以正確判定微生物是否生長。在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)異常情況時應(yīng)進行進一步調(diào)查。如在培養(yǎng)后檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產(chǎn)品，應(yīng)進行適當(dāng)?shù)脑蛘{(diào)查并采取糾正措施。當(dāng)灌裝不透明的容器，應(yīng)考慮將轉(zhuǎn)移至透明容器觀察，以確保有陽性時能被觀察到

32、。6.9. 環(huán)境及監(jiān)控6.9.1. 環(huán)境監(jiān)控方案設(shè)計應(yīng)通過風(fēng)險評估確定日常生產(chǎn)的環(huán)境監(jiān)控的各要素，如取樣點、取樣對象、取樣頻率、警戒和糾偏標(biāo)準(zhǔn)、實施方法等。評估環(huán)境監(jiān)測采樣帶來的風(fēng)險，在最差條件選擇時根據(jù)風(fēng)險評估結(jié)果 選擇環(huán)境監(jiān)測需要模擬的程度，以充分評估環(huán)境監(jiān)測對無菌工藝 的影響。模擬試驗時應(yīng)采用與日常生產(chǎn)相同的環(huán)境監(jiān)控方案為基 礎(chǔ)，并模擬生產(chǎn)狀況，包括采樣儀器、耗材的轉(zhuǎn)移、消毒等，任 何異于日常環(huán)境監(jiān)控的情況都應(yīng)有說明和記錄。通過有計劃的環(huán) 境監(jiān)控證明模擬試驗過程中的環(huán)境符合要求。6.92環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)處理環(huán)境（包括人員）監(jiān)控的數(shù)據(jù)結(jié)果用于評估模擬生產(chǎn)過程中 的環(huán)境條件是否適宜于生產(chǎn)。當(dāng)模擬

33、試驗出現(xiàn)陽性結(jié)果時，環(huán)境 監(jiān)測數(shù)據(jù)可用于進行根本原因的調(diào)查。模擬試驗時發(fā)生的環(huán)境偏差并不是模擬試驗成功的否決條件， 是否通過試驗取決于調(diào)查的結(jié)果。環(huán)境監(jiān)測結(jié)果異常時，即使試 驗結(jié)果成功，也應(yīng)進行必要的調(diào)查和糾正，以降低污染最終產(chǎn)品 的機率。即使最終決定在環(huán)境監(jiān)控結(jié)果超出糾偏標(biāo)準(zhǔn)時無菌工藝 模擬試驗依然通過，也不意味著日常生產(chǎn)可以在同等環(huán)境偏差的 條件下進行。6.9.3. 其他應(yīng)該考慮的問題：6.9.3.1. 儀器耗材傳遞關(guān)鍵潔凈區(qū)的專用監(jiān)測設(shè)備，專用設(shè)備在模擬工藝試驗時不 得混用避免引起污染。6.9.32表面（包括人員）采樣應(yīng)控制采樣時間及力度以保證采樣效果。根據(jù)生產(chǎn)環(huán)境消毒 劑以及生產(chǎn)產(chǎn)品的

34、抑菌性，采樣應(yīng)消除抑菌性并驗證中和和效果。采樣后立即消毒其表面。重要區(qū)域采樣點避免動物源性污染。6.933. 懸浮粒子監(jiān)測A 級潔凈區(qū)進行懸浮粒子監(jiān)測應(yīng)包括關(guān)鍵操作的全過程中，例如設(shè)備組裝操作過程等。生產(chǎn)過程中的污染（如活生物、放射危 害）可能損壞塵埃粒子計數(shù)器時，應(yīng)當(dāng)在設(shè)備調(diào)試操作和模擬操 作期間進行測試。A級潔凈區(qū)監(jiān)測的頻率和取樣量，應(yīng)能及時發(fā)現(xiàn)所有人為干預(yù)、偶發(fā)事件及任何系統(tǒng)的損壞。7. 可接受標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果評價7.1. 無菌工藝模擬試驗可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)遵循現(xiàn)行GMP無菌藥品附錄中的有關(guān)規(guī)定。7.2. 可接受標(biāo)準(zhǔn)存在定性和定量兩種方式，定性標(biāo)準(zhǔn)意味著模擬試驗只接受零污染的結(jié)果，適用于任何模擬試

35、驗可接受標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)定，排除了定量標(biāo)準(zhǔn)中識別微生物污染來源的困惑和潛在不確定 性風(fēng)險。因此，本指南推薦企業(yè)采用定性判定標(biāo)準(zhǔn)。7.3. 企業(yè)應(yīng)制定符合法規(guī)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，在制定內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考 慮以下幾方面因素：7.4. 模擬試驗應(yīng)和實際生產(chǎn)盡可能接近；應(yīng)基于風(fēng)險評估的原則制定科學(xué)合理的內(nèi)控限度；出現(xiàn)任何陽性均應(yīng)進行徹底、規(guī)范的 調(diào)查，在科學(xué)評估的基礎(chǔ)上采取適當(dāng)?shù)募m偏措施。7.5. 采用良好設(shè)計且受控的無菌灌裝系統(tǒng)，特別是自動化的系統(tǒng)如吹灌封、隔離器等，污染率可大幅度降低。7.6. 即使每次模擬試驗的污染率都符合可接受標(biāo)準(zhǔn)，如果連續(xù)進行的模擬試驗批中反復(fù)出現(xiàn)陽性意味著無菌生產(chǎn)工藝存在系統(tǒng)性 問題，必須得

36、到有效解決。8. 污染調(diào)查與糾正措施8.1. 無菌工藝模擬試驗存在污染，即意味著無菌保證可能存在問題，出現(xiàn)的任何污染樣品均應(yīng)視為偏差并徹底調(diào)查，并為改進無 菌工藝提供數(shù)據(jù)支持。 污染調(diào)查流程及方法應(yīng)在方案中明確規(guī)定。82可通過查看無菌工藝模擬試驗的錄像或現(xiàn)場記錄，以還原模擬試驗過程中人員操作行為、干預(yù)及設(shè)備運行等真實狀況，有利 于分析問題的來源。對無菌工藝模擬試驗實施過程相關(guān)的所有記 錄進行詳細(xì)調(diào)查，并關(guān)注各種偏差、驗證、變更等，所有偏離原 始驗證狀態(tài)情況均應(yīng)逐一評估并說明。檢查所有相關(guān)人員的培訓(xùn) 和資質(zhì)確認(rèn)記錄。8.3. 應(yīng)對模擬試驗中發(fā)現(xiàn)的微生物進行鑒別，并列入企業(yè)微生物菌種庫，以便開展污

37、染途徑調(diào)查。此外，也可借助文獻(xiàn)檢索來查 找污染途徑。8.4. 調(diào)查的關(guān)鍵是查找污染來源，結(jié)合調(diào)查需要，應(yīng)制定一個完 整的取樣和微生物鑒別計劃，調(diào)查過程應(yīng)有記錄并歸檔。調(diào)查結(jié) 果應(yīng)形成書面報告并得到質(zhì)量管理部門的批準(zhǔn)8.5. 如調(diào)查找到指定的原因，應(yīng)制定糾正預(yù)防措施，并再次進行模擬試驗，以證明措施的有效性。如調(diào)查無指定原因，應(yīng)對生產(chǎn) 工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評估，在現(xiàn)有模擬試驗方案的基 礎(chǔ)上增加取樣點和頻次，以獲得更多數(shù)據(jù)支持原因調(diào)查，同時應(yīng) 適當(dāng)增加試驗批次，以證明無菌生產(chǎn)工藝具備持續(xù)、可靠的無菌 保障水平。9. 模擬試驗的周期與再驗證9.1. 新建無菌生產(chǎn)線，在正式投產(chǎn)前，每班次應(yīng)當(dāng)連續(xù)進行 合格的模擬試驗。9.2. 正常生產(chǎn)中，每班次每半年應(yīng)至少進行一次模擬試驗。對于 因其它原因停產(chǎn)一定周期的生產(chǎn)線，在恢復(fù)正式生產(chǎn)前應(yīng)考慮進 行無菌工藝模擬試驗。9.3. 空氣凈化系統(tǒng)、無菌生產(chǎn)用設(shè)備設(shè)施、無菌工藝及人員重 大變更或設(shè)備的重大維修后，應(yīng)進行風(fēng)險評估確認(rèn)再模擬試驗批 次。9.4. 應(yīng)充分評估生產(chǎn)線的風(fēng)險，在發(fā)現(xiàn)設(shè)施、人員、環(huán)境或工