[基礎(chǔ)科學(xué)]實(shí)驗四-血凝和血凝抑制試驗

1、實(shí)驗四實(shí)驗四 血凝和血凝抑制試驗血凝和血凝抑制試驗一、實(shí)驗?zāi)康囊?、?shí)驗?zāi)康?掌握血凝和血凝抑制試驗的原理和操作方法，能夠正確判定試驗結(jié)果并對結(jié)果進(jìn)行分析。二、血凝試驗二、血凝試驗（ HA）血凝現(xiàn)象：有些病毒可凝集某些動物（如雞、鵝、豚鼠、綿羊）和人的紅細(xì)胞(RBC)原理：血凝素與RBC表面相應(yīng)受體結(jié)合，引起RBC凝集，用以測定病毒的含量用以測定病毒的含量HAHA試驗的原理示意圖試驗的原理示意圖 用途：確定病毒的含量； 計算病毒的血凝價，為血凝抑制試驗做準(zhǔn)備血凝價：能使血球產(chǎn)生50%凝集的病毒最高稀釋度血凝單位試驗材料試驗材料雞新城疫病毒雞紅細(xì)胞：采集健康雞血液，以阿氏液抗凝，用生理鹽水洗滌3-

2、5次，將血漿、白細(xì)胞等充分洗去，用生理鹽水配成1%紅細(xì)胞懸液備用滅菌0.85%生理鹽水96孔U型微量反應(yīng)板、微量移液器、滅菌塑料吸頭操作步驟操作步驟1. 在血凝板第一排的1-12孔加入50l生理鹽水。2. 在第1孔中加入50l病毒，混勻后吸50l到第2孔，如此倍比稀釋直到第10孔，混勻后棄50l；最后兩孔（11、12）為紅細(xì)胞對照。3. 將1%的紅細(xì)胞輕輕搖動混勻，在1-12孔中每孔加入50l。4. 手工震蕩，37靜置30min (室溫40分鐘 )后觀察結(jié)果 孔孔 號號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11（ C） 12（ C） 生生 理理 鹽鹽 水水 （ l） 50 50 50 5

3、0 50 50 50 50 50 50 50 50 病病 毒毒 懸懸 液液 （ l） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 / / 1% 紅紅 細(xì)細(xì) 胞胞 （ l） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 棄50l 結(jié)果判定血凝價 A:26 B:25 C:22 D:27ABCD以以50%50%的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作為該病毒液的紅細(xì)胞凝聚效價，即為該病毒液的紅細(xì)胞凝聚效價，即一個血凝單位一個血凝單位。血凝價血凝價: :1:2561:256三、血凝抑制試驗（ HI） 原理：抗體與血凝素結(jié)

4、合，封閉血凝素，使之不能與紅細(xì)胞結(jié)合HIHI試驗的原理圖試驗的原理圖 用途: 用于檢測血清中抗體含量用于檢測血清中抗體含量； 鑒定病毒的型、亞型； 血凝抑制價：能完全抑制血球凝集的最高血清稀釋度即為該血清的血凝抑制價試驗材料4個血凝單位雞新城疫病毒雞紅細(xì)胞：同上被檢血清(采自被檢雞的血清)滅菌0.85%生理鹽水96孔U型微量反應(yīng)板、微量移液器、滅菌塑料吸頭1. 在血凝板的1-12孔加入25l生理鹽水，最后2孔加50l。2. 第1孔加入待檢血清25l，混勻后吸25l至第2孔，倍比稀釋直至第10孔，混勻后棄25l。3. 在1-10孔，每孔加稀釋好的25l 4個血凝單位的病毒懸液，室溫靜置30分鐘 4. 將紅細(xì)胞輕輕搖動混勻，在1-12孔中每孔加入50l5. 手工震蕩1min，在37靜置30min(室溫40分鐘)后觀察結(jié)果操作步驟判定結(jié)果：判定結(jié)果：能將病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清能將病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清的最高稀釋倍數(shù)為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價，以的最高稀釋倍數(shù)為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價，以2 2的指數(shù)表示。（上圖抗體結(jié)果從上至下依次為：的指數(shù)表示。（上圖抗體結(jié)果從上至下依次為