殺菌劑生物測(cè)定技術(shù)

1、第三章 殺菌劑生物測(cè)定技術(shù) u供試菌種u殺菌劑生測(cè)的應(yīng)用u殺菌劑生測(cè)方法u殺線蟲生測(cè)方法u殺菌劑盆栽試驗(yàn)u殺菌劑田間藥效試驗(yàn) 殺菌劑室內(nèi)生物測(cè)定的主要內(nèi)容是將殺菌物質(zhì)作用于細(xì)菌、真菌或其他病原微生物，根據(jù)其作用的大小來判定藥劑的毒力?；?qū)⒕镔|(zhì)施于植物，對(duì)病害發(fā)生的有無或輕重觀察比較來判定藥劑的效果。供試病原菌要求在分類上有一定代表性，最好是重要的農(nóng)業(yè)植物病害的病原菌，而且容易培養(yǎng)，多代繁殖不易產(chǎn)生變異。一、供試菌種番茄灰霉病菌（Botrytis cintrea）番茄早疫病菌（Alternaria solani）辣椒炭疽病菌（Colletotrichum capsici）蘋果輪紋病菌（Phy

2、salospora berengeriana）蘋果炭疽病菌（Glomerella cingulata）蘋果腐爛病菌（Valsa mali）葡萄黑痘病菌（Elsinoe ampelina）葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella）常用的供試菌種水稻稻瘟病菌（Piricularia oxyzae）小麥赤霉病菌 (Gibberella zeae)小麥全蝕病菌（Gaeumannomyces graminis）玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）玉米彎孢病菌（Curvularia lunocto）棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium）枯草桿菌（B

3、acillus subtilis）白菜軟腐病菌（Erwinia carotovora sub sp.carotovora）水稻白葉枯病菌（Xanthomonas campestrispv.oryzae）等。 1 從大量合成化合物中篩選出有可能作為殺菌劑的化合物 2 為特定的植物病害尋找有效的藥劑，為此需要進(jìn)行篩選殺菌劑毒力的比較 3 殺菌劑作用方式及作用機(jī)制的研究二、殺菌劑生物測(cè)定的應(yīng)用 4 殺菌劑抗性的研究 5 殺菌劑混用及劑型研究 6 殺菌劑抗雨水沖刷能力及殘效作用的研究 7 某些殺菌劑（特別是農(nóng)用抗菌素）的微量分析孢子萌發(fā)法孢子萌發(fā)法 管碟法管碟法含毒介質(zhì)培養(yǎng)法濾紙片法含毒介質(zhì)培養(yǎng)法濾紙

4、片法 抑菌圈法抑菌圈法孔碟法孔碟法 生長速率法生長速率法最小濃度法最小濃度法 葉碟法葉碟法 三、殺菌劑室內(nèi)主要生測(cè)方法 孢子萌發(fā)法是歷史最悠久而廣泛被采用的殺菌劑毒力測(cè)定方法。早在1807年。Prevost 就采用此法，后經(jīng)不少學(xué)者改進(jìn)，使之日趨規(guī)范、合理。1.孢子萌發(fā)法原理：都是將供試藥劑附著在載玻片上或其他平面上，然后將供試病菌孢子懸浮液滴在上面（或?qū)⑹┯趹腋∫汉退幰夯旌虾蟮卧诓Ｆ希诒?，保溫條件下培養(yǎng)一定時(shí)間后鏡檢，以孢子萌發(fā)率判斷殺菌劑毒力。孢子萌發(fā)法的突出優(yōu)點(diǎn)是快速，試驗(yàn)當(dāng)天即可獲得結(jié)果，尤其適合于保護(hù)劑的篩選。 以病菌孢子作為指示物進(jìn)行殺菌劑毒力測(cè)定。用孢子液和不同濃度的藥液

5、混合，恒溫保濕培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時(shí)間后即可檢查孢子萌發(fā)率。一般在低倍鏡下，每處理隨機(jī)檢查200個(gè)孢子。孢子萌發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)孢子萌發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)孢子萌發(fā)率（%）萌發(fā)孢子數(shù)/檢查孢子數(shù)X100若對(duì)照組有20%以上孢子不萌發(fā)，則應(yīng)重做。對(duì)照萌發(fā)率處理萌發(fā)率抑制孢子萌發(fā)率（%）X100對(duì)照萌發(fā)率抑制率計(jì)算抑制率計(jì)算 將抑制孢子萌發(fā)率換算成機(jī)率值，作為Y；藥劑的濃度以對(duì)數(shù)值來表示作為X，直線回歸，求得回歸方程Ya+bx，可得LC50和LC95.。LC50 和LC95的計(jì)算孢子萌發(fā)法只適用于產(chǎn)生孢子的真菌。一般的供試病菌有：馬鈴薯晚疫病菌（Phytophthora infestans）水稻稻瘟病菌（Piricularia

6、 oryzae）小麥赤霉病菌（Gibberella zeae）玉米大斑病菌（Exserohilum turcicum）孢子萌發(fā)法的適用范圍2.含毒介質(zhì)培養(yǎng)法 有有3 3種：種：（1）抑菌圈法（2）生長速率法 （3）最小濃度法 基本原理基本原理是在已經(jīng)接種供試菌的洋菜培養(yǎng)是在已經(jīng)接種供試菌的洋菜培養(yǎng)基（通常在培養(yǎng)皿內(nèi)）表面，利用各種方法基（通常在培養(yǎng)皿內(nèi)）表面，利用各種方法（管碟法，濾紙片法，孔碟法管碟法，濾紙片法，孔碟法 ）使藥液和培養(yǎng)）使藥液和培養(yǎng)基接觸，恒溫培養(yǎng)一定時(shí)間后，由于藥劑的滲基接觸，恒溫培養(yǎng)一定時(shí)間后，由于藥劑的滲透擴(kuò)散作用，施藥部位周圍的病菌被殺死或生透擴(kuò)散作用，施藥部位周圍的

7、病菌被殺死或生長受到抑制，從而產(chǎn)生了抑制圏。根據(jù)抑菌圈長受到抑制，從而產(chǎn)生了抑制圏。根據(jù)抑菌圈的大小來比較不同殺菌劑的毒力大小。的大小來比較不同殺菌劑的毒力大小。 （1）抑菌圈法的原理u抑菌圏法的優(yōu)點(diǎn) 精確度高 操作簡單u抑菌圏法的缺點(diǎn) 溶解性 擴(kuò)散性抑菌圏法的優(yōu)缺點(diǎn)抑菌圈法示意圖含有孢子含有孢子的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基不同濃度不同濃度的藥液的藥液 根據(jù)施加藥劑在洋菜培養(yǎng)基表面的方式，抑菌圈法又分為管碟法（牛津杯法）、濾紙片法、孔碟法。（1） 用滅菌蒸餾水將供試藥劑配制成一系列梯度濃度，一般57個(gè)濃度。（ 2 ） 制備一定“濃度”的供試菌懸浮液（如真菌，則宜用孢子懸浮液），濃度以在低倍鏡（15X10倍

8、）下每視野80一100個(gè)左右孢子為宜。 管碟法又稱牛津杯法（3）待培養(yǎng)基冷至50左右（憑經(jīng)驗(yàn)估計(jì)），迅速吸取10ml菌液加入培養(yǎng)基內(nèi)，充分混合后，倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，制成含菌培養(yǎng)基平板。 （4）在每皿培養(yǎng)基上按合適的間隔放置6個(gè)不銹鋼小管（即牛津杯，外徑8.0士 0.lmm。內(nèi)徑6.0士0.1mm，高10.0士0.lmm），其中1個(gè)管為對(duì)照，其余5管為5個(gè)不同濃度的藥液，在適合的溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，取出用十字交叉法測(cè)是抑菌圈的直徑。抑菌圈法示意圖l上述操作應(yīng)盡量在無菌條件下進(jìn)行，以防污染l操作室的溫度最好在2628左右，如室溫太低，則50左右的培養(yǎng)基在操作過程中迅速冷凝，無法制作平板l十字交叉

9、法測(cè)量抑菌圈的直徑 ，消除誤差注意事項(xiàng)（1）配制不同濃度的藥液（2）配孢子懸浮液（3） 制含孢子的平板濾紙片法濾紙片法前三步完全和上述管碟法相同（4）用消毒鑷子夾取滅菌的圓形濾紙片（直徑為0.6或0.8cm）投入不同濃度藥液中，1分鐘后取出，放入含真菌孢子的培養(yǎng)基上，每皿放6片（5個(gè)濃度各1片，另1片為對(duì)照片），恒溫培養(yǎng)一定時(shí)間，測(cè)抑菌圏直徑。l各濾紙片間距要適合，以防形成的抑菌圈不園l放濾紙片時(shí)要平放、更迅速、準(zhǔn)確、放下后不能再移動(dòng)l用十字交叉法測(cè)量抑菌圈的直徑注意事項(xiàng) 用滅菌后的打孔器直接在凝固好的含孢培養(yǎng)基上打成圓孔，將定量的藥液滴入圓孔中，恒溫培后測(cè)量抑菌圏的大小，進(jìn)行殺菌劑毒力比較。

10、孔碟法主要有以下幾個(gè)方面的1對(duì)供試菌的要求在較粗放的比較殺菌劑毒力的測(cè)定中，對(duì)菌種的要求不必過嚴(yán)，只要在培養(yǎng)基中容易培養(yǎng)而且抑菌圈清楚的均可采用。影響抑菌圈法測(cè)定結(jié)果的因素特別是為某一特定病害尋求有效的防治藥劑時(shí)，實(shí)際上不可能對(duì)供試菌進(jìn)行選擇，但以水平擴(kuò)散法作生物定量測(cè)定，如抗菌素效價(jià)測(cè)定，則必須對(duì)供試菌有如下的要求： 對(duì)被測(cè)定的藥劑有適當(dāng)?shù)拿舾行?，抑菌圈界限明顯 培養(yǎng)容易，生長迅速不易為雜菌污染不易發(fā)生變異 容易作成接種菌液（菌絲體或孢子懸浮液） 菌種有較強(qiáng)的耐熱能力2對(duì)藥劑的要求 用抑菌圈法測(cè)定一種藥劑的抑菌作用的大小，有一定的局限性。如與該藥劑的理化性質(zhì)有密切的關(guān)系。如是否容易擴(kuò)散。若有

11、很好的擴(kuò)散性能，就能真實(shí)反映該藥劑的殺菌毒力。如由于大多數(shù)抗生素都有一定的水溶性，因此，抑菌圈法為抗生素的科研和生產(chǎn)廣泛采用。而有相當(dāng)一部分殺菌劑的原藥是不易溶解于水，故擴(kuò)散性不好，要用該法，就要用適量的乙醇或丙酮溶解后，再用水稀釋至所需的濃度。 有效好的水溶性 將不同濃度的藥液和熱的培養(yǎng)基混合，用這種含毒培養(yǎng)基培育病，以病原菌的生長進(jìn)度的快慢來判定藥劑的毒力大小。 （2）生長速率法原理有2種：菌落達(dá)到一定的大小所需時(shí)間，一定時(shí)間內(nèi)菌落的直徑大小。病原菌生長的表示方法優(yōu)點(diǎn)：操作比較簡單適用范圍廣，適用于乳油、水劑、可濕性粉劑等重復(fù)性好。只要操作認(rèn)真，均可得到可靠的結(jié)果生長速率法的優(yōu)缺點(diǎn)缺點(diǎn)：

12、對(duì)供試菌種要求嚴(yán)格，病菌要易于培養(yǎng)，生長較快且邊緣整齊、產(chǎn)孢子緩慢，而且是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的的病原菌。 對(duì)供試藥劑要求，有一定的耐熱性，遇熱不易分解。 蘋果腐爛病菌（Valsa mali）小麥紋枯病菌（Rhzoctonia solani ）棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium）葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella）小麥全蝕病菌（Gaeumannomyces graminis）辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）生長速率法常用的菌種（1）制備菌餅：用無菌的打孔器在供試菌種邊緣打下菌塊即菌餅（在無菌條件下進(jìn)行）（2）含毒培養(yǎng)基的制備：獎(jiǎng)供

13、試藥劑稀釋成一系列梯度濃度后，準(zhǔn)確取一定量的藥液加入到熱的培養(yǎng)基中，混勻，倒入滅菌的小培養(yǎng)皿中（直徑為6cm），待冷凝后即為含毒培養(yǎng)基生長速率法生長速率法（3）移植菌餅用接種針或消毒的攝子將菌餅反面（有菌絲的一面向下和培養(yǎng)基貼合）移植到帶毒培養(yǎng)基平板上，一個(gè)培養(yǎng)皿最好接一個(gè)菌餅。（4）測(cè)定菌落直徑恒溫培養(yǎng)到預(yù)定時(shí)間后，取出培養(yǎng)皿測(cè)量菌落直徑。每個(gè)菌落十字交叉測(cè)兩次直徑。生長速率法示意圖生長速率法示意圖菌餅菌餅含藥劑的含藥劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)基菌餅含毒培養(yǎng)基純生長量菌落直徑菌餅直徑對(duì)照的純生長量處理的生長量抑制率X100對(duì)照的純生長量 計(jì)算公式 將算出的各處理（濃度）的抑制率換成機(jī)率值，以對(duì)數(shù)表示濃度

14、，用作圖法或最小二乘法求出EC50或EC95，并以此比較毒力。毒力方程的計(jì)算 在比較粗放的進(jìn)行幾種殺菌劑的毒力比較時(shí)，可以采用最低抑制濃度法。 （3）最低抑制濃度法最小濃度法基本原理 是藥劑按等比或等差級(jí)數(shù)系列濃度和培養(yǎng)基混合后接入供試菌，定溫培養(yǎng)一定時(shí)間后，找出“終點(diǎn)”（明顯地抑制供試菌生長發(fā)育的最高稀釋倍數(shù)，即最低濃度）的那個(gè)濃度，即為最低抑制濃度。通過比較幾種不同藥劑的最抵抑制濃度即可比較其毒力。顯然，最低抑制濃度最小的，其毒力最大。根據(jù)培養(yǎng)基是固態(tài)還是液態(tài)又將最低抑制濃度法分為u液體培養(yǎng)基稀釋法u固體培養(yǎng)基稀釋法 取若干只滅菌試管，順序編號(hào)，在每只試管中加入適合供試菌生長的液體培養(yǎng)基N

15、ml，然后在第一號(hào)試管中加入一定濃度的供試藥液Xml，充分混合后自第一管中取Nml放入第二管，充分混合后取Xml加入第3管，直到最后一管不加藥液作為對(duì)照。自倒數(shù)第二管中取出Xml棄去不用，如此所得的一系列濃度順序相差一倍。 液體培養(yǎng)基稀釋法 在各管中加入供試菌懸浮液一滴，在該供試菌最適溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間，取出觀察“終點(diǎn)”，一般以混濁度為準(zhǔn)，即以某編號(hào)試管以下不再發(fā)生明顯混濁現(xiàn)象，這一試管的濃度就是最低抑制濃度。12345CK 用滅菌蒸餾水將供試藥制按等比或等差級(jí)數(shù)稀釋一系列藥液濃度。分別取每種濃度的藥液Xml分放50ml滅菌三角瓶，加入滅菌并冷至60左右的培養(yǎng)基Yml，立即搖勻倒入培養(yǎng)皿內(nèi)凝固

16、。用接種環(huán)沾取供試菌液進(jìn)行劃線培養(yǎng)，至一定時(shí)間后觀察抑制病菌生長的最高稀釋倍數(shù)即最低抑制濃度。固體培養(yǎng)基稀釋法接菌餅，若不能生長，此濃度是最低抑制濃度劃線接細(xì)菌，不能生長，此濃度為最低抑制濃度 葉碟法比較簡易，能在室內(nèi)進(jìn)行，比孢子萌發(fā)法和含毒介質(zhì)培養(yǎng)法接近生產(chǎn)實(shí)際，可看作是盆栽試驗(yàn)的過渡階段。3.葉碟法 葉碟法的基本原理是將容易感染供試菌的植物葉片（如蠶豆葉片）經(jīng)不同濃度的藥劑處理后平放在培養(yǎng)皿內(nèi)，再將一塊培養(yǎng)好的供試菌菌絲體（如紋枯病菌）放在葉片上，經(jīng)保濕培養(yǎng)一定時(shí)間，檢查其病斑面積，并以此衡量供試藥劑的毒力。 還有一種葉碟漂浮法，其原理是將容易感染供試菌的植物葉片（如黃瓜葉片）制成直徑1.

17、5cm葉碟，漂浮在不同濃度的藥液中，將供試菌（如黃瓜霜霉病菌）孢子懸浮液定量滴加在葉碟上，在光照下培養(yǎng)一定時(shí)間，調(diào)查病斑面積。葉碟漂浮法四、殺線蟲劑的生物測(cè)定技術(shù)供試線蟲： 番茄根結(jié)線蟲Meloidogyne incognita馬鈴薯莖線蟲 Ditylenchus destructor Thorne 但如果是針對(duì)某種線蟲篩選合適的殺線蟲劑，則只能以此種線蟲為指示生物。 殺線蟲劑的生物測(cè)定方法殺線蟲劑的生物測(cè)定方法依藥劑性質(zhì)分為兩類：依藥劑性質(zhì)分為兩類：（一）非熏蒸劑測(cè)定方法（一）非熏蒸劑測(cè)定方法（二）熏蒸劑測(cè)定方法（二）熏蒸劑測(cè)定方法v將供試藥劑蒸餾水稀釋成57個(gè)梯度濃度v取上面藥液1.5ml

18、加入一個(gè)小玻皿（高 1cm直徑 2 cm）中v每種濃度重復(fù)3皿v對(duì)照則加入1.5ml蒸餾水v將分離的供試線蟲經(jīng)清水漂洗后挑入小皿中，皿1520條/皿v將盛有藥液和線蟲的小皿置于襯有濕濾紙保溫的大培養(yǎng)皿中，在2425恒溫箱中保持24h或48h后取出，在雙目解剖鏡下檢查線蟲的存活情況。（）非熏蒸劑的生物測(cè)定（）非熏蒸劑的生物測(cè)定 通常將不能活動(dòng)的，伸長的線蟲或是蟲通常將不能活動(dòng)的，伸長的線蟲或是蟲體有著凸凹不平的彎曲部分，內(nèi)含物為黑色體有著凸凹不平的彎曲部分，內(nèi)含物為黑色顆粒者，都定為死線蟲。顆粒者，都定為死線蟲。1、觸動(dòng)法、觸動(dòng)法2、染色法、染色法線蟲死亡的判斷標(biāo)準(zhǔn)12345CK 死亡線蟲數(shù)死亡

19、率X100 供試線蟲總數(shù) 將濃度取對(duì)數(shù)值，線蟲死亡率轉(zhuǎn)換成機(jī)率值，用殺蟲劑毒力測(cè)定中的方法求出LC50或LC95，并以此來比較毒力大小。計(jì)算公式以熏蒸作用為主的殺線蟲劑的毒力測(cè)定和殺蟲以熏蒸作用為主的殺線蟲劑的毒力測(cè)定和殺蟲劑的情形相似。劑的情形相似。 在在0.33L熏蒸瓶壁上貼一濾紙，瓶底放一小玻熏蒸瓶壁上貼一濾紙，瓶底放一小玻皿（高皿（高1cm，直徑，直徑2 cm），皿中注入蒸餾水，使水），皿中注入蒸餾水，使水位高位高2mm左右，放入左右，放入1520條供試線蟲，同時(shí)在瓶條供試線蟲，同時(shí)在瓶底放一濾紙片（底放一濾紙片（1X 3mm），用微量注射器將供試），用微量注射器將供試藥劑病加在濾紙上

20、。測(cè)定要求設(shè)藥劑病加在濾紙上。測(cè)定要求設(shè)5個(gè)濃度，加二溴個(gè)濃度，加二溴氯丙烷，可設(shè)置氯丙烷，可設(shè)置100、50、25、12、6mgL和不給和不給藥對(duì)照，重復(fù)藥對(duì)照，重復(fù)3次。次。2425下熏蒸下熏蒸24h，檢查線蟲，檢查線蟲死亡率死亡率。（二）熏蒸劑的毒力測(cè)定熏蒸劑的毒力測(cè)定線蟲濾紙片五、殺菌劑盆栽試驗(yàn)藥劑（殺菌劑）藥劑（殺菌劑）病原菌病原菌室內(nèi)生測(cè)示意圖室內(nèi)生測(cè)示意圖寄主植物寄主植物殺菌劑殺菌劑病原菌病原菌殺菌劑盆栽藥效試驗(yàn)殺菌劑盆栽藥效試驗(yàn)利用盆、缽培育幼嫩植物進(jìn)行生物測(cè)定，利用盆、缽培育幼嫩植物進(jìn)行生物測(cè)定，是研究殺菌劑的有效方法之一。盆栽試驗(yàn)法克是研究殺菌劑的有效方法之一。盆栽試驗(yàn)法克

21、服了在離體條件下對(duì)病菌無效而在活體條件下服了在離體條件下對(duì)病菌無效而在活體條件下有效的化合物的漏篩。同時(shí)，盆栽試驗(yàn)法更接有效的化合物的漏篩。同時(shí)，盆栽試驗(yàn)法更接近于大田實(shí)際情況，所得資料對(duì)指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)際近于大田實(shí)際情況，所得資料對(duì)指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)際有較高的參考價(jià)值。此外，盆栽試驗(yàn)所用材料有較高的參考價(jià)值。此外，盆栽試驗(yàn)所用材料易得，條件易于控制，在當(dāng)前的殺菌劑研究中，易得，條件易于控制，在當(dāng)前的殺菌劑研究中，越來越重視盆栽試驗(yàn)法，有些公司在進(jìn)行活性越來越重視盆栽試驗(yàn)法，有些公司在進(jìn)行活性篩選時(shí)甚至只用盆栽試驗(yàn)法，而淘汰了離體試篩選時(shí)甚至只用盆栽試驗(yàn)法，而淘汰了離體試驗(yàn)法。驗(yàn)法。1和大田藥效試驗(yàn)相比，供

22、試菌的培養(yǎng)不受自然條件限制，可較快得出結(jié)果，可用作大量化合物的活性篩選2多種條件易于控制，測(cè)定結(jié)果比較穩(wěn)定可靠 3接近大田實(shí)際情況，其結(jié)果對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐有較大的參考價(jià)值。 其不足之處是：和室內(nèi)生測(cè)方法相比，由于有寄主植物參與，測(cè)定工作比較麻煩而且測(cè)定周期比較長。室內(nèi)盆栽毒力測(cè)定的優(yōu)點(diǎn)室內(nèi)盆栽毒力測(cè)定的優(yōu)點(diǎn)對(duì)供試植物的要求：對(duì)供試植物的要求：容易栽培容易栽培生長迅速生長迅速是主要農(nóng)作物是主要農(nóng)作物如水稻、小麥、黃瓜、棉花、番茄等等如水稻、小麥、黃瓜、棉花、番茄等等。供試植物供試植物 供試病菌基本上是由供試植物決定的。如供試病菌基本上是由供試植物決定的。如供試植物是水稻，就用水稻主要病害（如水稻供試植

23、物是水稻，就用水稻主要病害（如水稻稻瘟病，水稻紋枯?。┑牟≡?；若供試植物稻瘟病，水稻紋枯?。┑牟≡?；若供試植物是小麥，就用小麥主要病害（全蝕、赤霉、銹是小麥，就用小麥主要病害（全蝕、赤霉、銹病、白粉、病毒病）；供試植物是玉米，就用病、白粉、病毒?。?；供試植物是玉米，就用玉米主要?。ù笮“卟。?。玉米主要?。ù笮“卟。?。 供試病菌供試病菌影響殺菌劑盆栽的因素影響殺菌劑盆栽的因素v植物的抗病性植物的抗病性v病原菌的致病力病原菌的致病力v環(huán)境條件（主要是溫濕度）環(huán)境條件（主要是溫濕度）植物的抗病性植物的抗病性供試植物應(yīng)選感病品種或者供試植物應(yīng)選感病品種或者中抗品種，不能選種抗病性品種中抗品種，不能

24、選種抗病性品種或免疫品種?；蛎庖咂贩N。供試菌種的致病力，是盆栽試驗(yàn)成功與失敗的主要因素。病原菌的致病力不是固定不變的性狀。在同一病原菌中，有致病力強(qiáng)弱不同的菌系和小種。病原菌的致病性與其生理、生化及其他生物學(xué)特性有密切關(guān)系，在適應(yīng)新的環(huán)境的同時(shí)，病原菌可以改變其致病性。如用高粱粒培養(yǎng)的水稻稻瘟病菌孢子和采自田間的感病稻莖節(jié)經(jīng)保濕后產(chǎn)生的孢子，其致病力相差較大，一般情況下，后者的致病力較強(qiáng)。即使同是人工培養(yǎng)基產(chǎn)生的孢子，因培養(yǎng)基配方不同，培養(yǎng)條件不同，其孢子的致病能力也不同，這些都應(yīng)加以注意。病原菌的致病力病原菌的致病力環(huán)境條件環(huán)境條件溫度溫度濕度濕度光照光照病害的傳播方式不同，接菌方法也不同。

25、必須首先了解要接種的病原菌的主要傳播方式和侵染途徑。氣流及雨水傳播的病害可用噴霧法或噴粉法接菌。如病菌主要由氣孔侵入，接菌時(shí)應(yīng)注意在葉背面接菌。噴霧法接菌一般是將孢子懸浮液噴在植物表面，為了使孢子在懸浮液中均勻分散，可適當(dāng)加入濕潤劑，這不但有利于孢子分散，而且也有利于懸浮液在植株上附著。如果孢子在懸浮液中分散不勻，植株發(fā)病后有些葉片可能病斑連成一片，有些葉片則沒有或很少有病班，給病情調(diào)查帶來困難和誤差，孢子懸浮液中孢子的密度以及是否加入粘著劑對(duì)發(fā)病影響很大。以稻瘟病菌的接菌為例，稻瘟病菌孢子以在低倍鏡下（10 X 15）每視野100個(gè)孢子為宜，在孢子懸浮液中加入0.25的明膠作粘著劑也會(huì)收到良

26、好效果。 主要的接種方法主要的接種方法噴霧接菌最好用特制的噴霧裝置。粗放一點(diǎn)的工作也可用家庭衛(wèi)生用小型手持噴霧器。接種銹菌和白粉菌時(shí)，可先在小麥植株上噴水，以造成在葉片上有水膜，然后用滑石粉將孢子粉稀釋，采用噴粉裝置接菌。水稻紋枯病菌可在栽種水稻的盆水中接種菌核，但更多的是用其菌絲塊夾在稻莖基部葉鞘上。水稻白葉枯病菌常采用針刺接菌，或剪去部分稻葉，造成人工傷口，再噴白葉枯病菌細(xì)菌）懸浮液接菌。接種方法接種方法由種子傳染的病害可用病菌孢子拌種或孢子懸浮液浸種法進(jìn)行接菌；而土壤傳染病害則可將病原菌拌入土壤中接種或?qū)⒅参锔拷腈咦討腋∫褐羞M(jìn)行接種。接種方法接種方法 環(huán)境條件不但影響供試植物的正常生

27、長，更重要的是影響接菌的成敗。為創(chuàng)造有利于病菌入侵的條件，應(yīng)十分注意對(duì)環(huán)境因子如光照、溫度、濕度等的控制。發(fā)病的環(huán)境因子發(fā)病的環(huán)境因子 在設(shè)備良好的研究所或公司，擁有現(xiàn)代化溫室，或人工氣候室，光照及溫、濕度可隨意調(diào)節(jié)；但在基層研究單位，條件較差，環(huán)境因子的控制就不那么容易。如果沒有專門的溫室，試驗(yàn)應(yīng)安排在自然條件下供試病菌發(fā)生的季節(jié)進(jìn)行，以滿足對(duì)溫度的要求。濕度的控制比溫度更重要，只有滿足病菌對(duì)濕度的要求，病菌才能萌發(fā)生長。環(huán)境條件環(huán)境條件光照一般對(duì)孢子萌發(fā)入侵不利，但寄主植物卻要在光照下才能正常生長。如利用自然光，最好在下午太陽落山后接菌，這樣，經(jīng)過一個(gè)晚上，大多數(shù)病菌孢子可以萌發(fā)入侵光照光照 盆栽試驗(yàn)應(yīng)采用比較精密的噴霧或噴粉裝置，定量噴灑供試藥劑。施藥時(shí)間則依試驗(yàn)?zāi)康亩兴煌?1測(cè)定藥劑的保護(hù)效果先噴