實(shí)驗(yàn)一氨基酸薄層層析模板

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)氨 基 酸 薄 層 層 析Thin Layer Chromatography Of Amino Acid層 析層析原理待分離物質(zhì)（流動(dòng)相）經(jīng)過(guò)一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，根據(jù)溶液中待分離物質(zhì)各組分顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離物質(zhì)中各組分在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離混合物的目的 。層析概念層析為實(shí)驗(yàn)室一類(lèi)分離技術(shù)的總稱(chēng)。層 析 分 類(lèi)按流動(dòng)相氣相層析液相層析按固定相形狀柱層析薄層層析紙層析層 析 分 類(lèi)類(lèi)別 分離原理 基質(zhì)或載體吸附層析 化學(xué)、物理吸附 硅膠、氧化鋁 、羥基磷酸分配層析 兩溶劑相中的溶解效應(yīng) 纖維素、硅藻土 、硅膠凝膠過(guò)濾 分子篩效應(yīng)的排

2、阻效應(yīng) 瓊脂糖、葡聚糖離子交換層析 離子基團(tuán)的交換反應(yīng) 離子交換樹(shù)脂 、纖維素、 葡聚糖親和層析 分離物與配體之間有 帶配基的瓊脂糖 特殊親和力 或葡聚糖原 理 薄層層析由一平鋪固定于玻璃板或塑料板的固定相及一由有機(jī)溶劑構(gòu)成的流動(dòng)相組成。樣品點(diǎn)在固定相，由于樣品中不同的成分被固定相吸附劑吸附的牢固程度不同及在有機(jī)溶劑中溶解性質(zhì)不同，當(dāng)有機(jī)溶劑因?yàn)槊?xì)管作用沿吸附劑上升時(shí)，不同的成分而被分開(kāi)。當(dāng)與一標(biāo)準(zhǔn)物同時(shí)層析時(shí)，可鑒定未知樣品中的不同成分。操 作 制板 點(diǎn)樣 展層 染色 Rf (Retention factor) 計(jì)算1.1.點(diǎn)點(diǎn) 樣樣2cm鉛筆劃線(xiàn)鉛筆劃線(xiàn)( (小、均勻小、均勻) )2.2

3、.展展 層層: : 3030 板要端正板要端正劃線(xiàn)端朝上劃線(xiàn)端朝上/ /下下? ?先吹干先吹干 3. 3.染染 色色: :標(biāo)記溶劑前沿標(biāo)記溶劑前沿 吹干吹干 噴茚三酮噴茚三酮 吹干吹干4.4.測(cè)量并計(jì)算測(cè)量并計(jì)算Rf=AA斑點(diǎn)中心到底線(xiàn)距離斑點(diǎn)中心到底線(xiàn)距離溶劑前沿到底線(xiàn)距離溶劑前沿到底線(xiàn)距離ArginineLeucineAlanineMixture 前 沿三種氨基酸Rf的計(jì)算實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 、自覺(jué)遵守學(xué)習(xí)紀(jì)律，保持實(shí)驗(yàn)室肅靜，不得喧嘩吵鬧、遲到、早退、缺席。、自覺(jué)遵守學(xué)習(xí)紀(jì)律，保持實(shí)驗(yàn)室肅靜，不得喧嘩吵鬧、遲到、早退、缺席。每次實(shí)驗(yàn)都要穿白大褂、禁止穿拖鞋。每次實(shí)驗(yàn)都要穿白大褂、禁止穿拖鞋。 、

4、愛(ài)護(hù)儀器，厲行節(jié)約。取用試劑時(shí)，應(yīng)仔細(xì)辨明標(biāo)簽，以免取錯(cuò)。取完試、愛(ài)護(hù)儀器，厲行節(jié)約。取用試劑時(shí)，應(yīng)仔細(xì)辨明標(biāo)簽，以免取錯(cuò)。取完試劑后，應(yīng)及時(shí)蓋好瓶蓋，放回原處，切忌亂拿亂放、劑后，應(yīng)及時(shí)蓋好瓶蓋，放回原處，切忌亂拿亂放、“張冠李戴張冠李戴”。 3 3、注意安全、對(duì)于有毒、腐蝕的試劑更應(yīng)注、注意安全、對(duì)于有毒、腐蝕的試劑更應(yīng)注意，應(yīng)避免其直接接觸人體及衣物。意，應(yīng)避免其直接接觸人體及衣物。 4 4、注意實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生、整潔。廢棄液體應(yīng)倒入、注意實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生、整潔。廢棄液體應(yīng)倒入水槽，放水沖走。實(shí)驗(yàn)用過(guò)的和棉花、廢紙、沉淀水槽，放水沖走。實(shí)驗(yàn)用過(guò)的和棉花、廢紙、沉淀廢渣及其他廢棄物品等均應(yīng)放入指定容器

5、，不得隨廢渣及其他廢棄物品等均應(yīng)放入指定容器，不得隨意亂扔或丟進(jìn)水槽。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)將實(shí)驗(yàn)臺(tái)整理好。意亂扔或丟進(jìn)水槽。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)將實(shí)驗(yàn)臺(tái)整理好。并清掃、整理實(shí)驗(yàn)室。關(guān)好水、電、門(mén)、窗。并清掃、整理實(shí)驗(yàn)室。關(guān)好水、電、門(mén)、窗。一、層析技術(shù) 1、層析技術(shù)概念、層析技術(shù)概念 2、層析技術(shù)分類(lèi)、層析技術(shù)分類(lèi) 3、常用層析技術(shù)原理、常用層析技術(shù)原理色譜起源色譜起源色譜色譜組分色素石油醚石油醚碳酸鈣顆粒 用色彩（用色彩（chromachroma）和圖譜（）和圖譜（graphsgraphs）組成色譜）組成色譜一詞（一詞（Chromatography)Chromatography)，是，是19031903年俄

6、國(guó)植物學(xué)家年俄國(guó)植物學(xué)家Michael TswettMichael Tswett發(fā)現(xiàn)并命名的發(fā)現(xiàn)并命名的 層析：是一種物理的分離方法，利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各層析：是一種物理的分離方法，利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相為組分以不同程度分布在兩相中，其中一相為固定相固定相，另一相流過(guò)此相稱(chēng)作，另一相流過(guò)此相稱(chēng)作流動(dòng)相流動(dòng)相，并使各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的目的。并使各組分以不同速度移動(dòng)，從而達(dá)到分離的目的。名稱(chēng)名稱(chēng)操作方式操作方式固定相固定相流動(dòng)相流動(dòng)相分離依據(jù)分離依據(jù)吸附層析吸附層析吸附薄層層析吸附薄層層析氣體吸附層析氣體吸附層析固體固體固體固體液體液體氣體氣體吸附力吸附力分配層析分配層析紙層析紙層析液體液體液體液體溶解度溶解度離子交換層析離子交換層析離子交換柱層析離子交換柱層析固體固體液體液體帶電性帶電性靜電引力靜電引力凝膠層析凝膠層析 凝膠過(guò)濾凝膠過(guò)濾固體固體液體液體分子大小分子大小親合層析親合層析酶與底物酶與底物抗原與抗體抗原與抗體固體固體液體液體配體專(zhuān)一性配體專(zhuān)一性帶帶正正電荷多電荷多蛋白緊密結(jié)合蛋白緊密結(jié)合帶帶負(fù)負(fù)電荷多電荷多蛋白流過(guò)層析蛋白流過(guò)層析柱柱陽(yáng)離子交換樹(shù)脂工作示意圖陽(yáng)離子交換樹(shù)