食品中氯酸鹽和高氯酸鹽地測(cè)定

1、附件2食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定BJS 201706i范圍本方法規(guī)定了食品中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本方法適用于包裝飲用水、液體乳、大米、胡蘿卜、哈密瓜、豬肉、魚(yú)肉、茶葉、嬰幼兒配方乳粉（不包括特殊醫(yī)學(xué)用途的嬰幼兒配方乳粉）中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定。2原理試樣經(jīng)提取、離心后，上清液經(jīng)固相萃取柱凈化，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。3試劑和材料3.1 試劑3.1.1 乙睛（CH3CN）:色譜純。3.1.2 甲醇（CH3OH）:色譜純。3.1.3 甲酸（HCOOH）:色譜純。3.1.4 甲酸鏤（HCOONH4）:液質(zhì)聯(lián)用級(jí)。3.1.5 超純水（H2O）:電阻率為1

2、8.2M - cm注：以上試劑在使用前均應(yīng)做本底測(cè)試。3.2 試劑配制3.2.1 含0.1%甲酸的水溶液：量取 1.0mL甲酸（3.1.3）至1000mL容量瓶，用超純水（3.1.5）稀 釋至刻度，混勻。3.2.2 20mmol/L甲酸鏤溶液：稱取0.63g甲酸鏤（3.1.4）,用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至 500mL , 混勻。3.2.3 甲酸鏤甲醇溶液：取 100mL甲酸鏤溶液（3.2.2）,加入200mL甲醇（3.1.2）,混勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)品或高純?cè)噭兌?9%。中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量詳見(jiàn)表1。3.3.

3、2 高氯鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品：采用具有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)品或高純?cè)噭?，純?9%。中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量詳見(jiàn)表1 。表1氯酸鹽和高氯酸鹽的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子量氯酸鈉Sodiumchlorate7775-09-9NaClO3106.44高氯酸鈉Sodiumperchlorate7601-89-0NaClO4122.453.4 同位素內(nèi)標(biāo)3.4.1 氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：氯酸鹽-18O3 （200 g/mL以氯酸根-18O3離子計(jì)，北京振祥提供，EURL-SRMLotNo:024 ） , 4 c保存。3.4.2 高

4、氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)：高氯酸鹽-18O4（100p g/mL以高氯酸根-18O4離子計(jì)，美國(guó)劍橋提供， CILOLM-7310-1.2 ） , 4 c保存。3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制3.5.1 氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 （1mg/mL,以氯酸根計(jì)）：精密稱取氯酸鈉 0.128g （精確至0.0001g）, 置于100mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 c保存。3.5.2 高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg/mL ,以高氯酸根計(jì)）：精密稱取高氯酸鈉 0.123g（精確至0.0001g）, 置于100mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）溶解并稀釋至刻度，搖勻，

5、制成濃度為1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 c保存。3.5.3 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確量取0.2mL氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.5.1）、0.1mL高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.5.2）,置于同一 100mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、 高氯酸鹽濃度分別為 2.0閔/mL、1.0 0mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，4c保存。3.5.4 混合同位素內(nèi)標(biāo)液：分別準(zhǔn)確量取 75正氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)（3.4.1）、20山高氯酸鹽同位 素內(nèi)標(biāo)（3.4.2）置于同一 10.0mL容量瓶中，用超純水（3.1.5）稀釋至刻度，搖勻，制成氯酸鹽-18。3、 高氯酸鹽-18O4濃度分別為1500ng/mL、

6、200ng/mL的混合同位素內(nèi)標(biāo)液， 4 c保存。3.5.5 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（3.5.3） 0 - 10口25八50八75 口、100科1> 250科1> 500 dl> 750 dl> 1000 dL及混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4） 100 I,用甲酸俊甲醇溶 液（3.2.3）稀釋并定容至10mL,作為混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液S0、S1S9。氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、2.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、 200ng/

7、mL ,高氯酸鹽濃度依次為：0.00ng/mL、1.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、7.50ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、75.0ng/mL、100ng/mL ,混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽-18。3、高氯酸鹽-18O4濃度分別為15.0ng/mL、2.0ng/mL ,或依需要配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用 新制。4儀器和設(shè)備4.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ ESI源）。4.2 渦旋振蕩器。4.3 組織搗碎機(jī)。4.4 均質(zhì)器。4.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速 R 10000r/min。4.6 電子天平：感量分別為0.0001g

8、和0.001g。4.7 超聲波恒溫水浴振蕩器。4.8 具塞離心管：50mL。4.9 PRiMEHLB 固相萃取柱：3cc, 150mm,或性能相當(dāng)者。注：4.8、4.9的耗材在使用前均應(yīng)做本底測(cè)試。5試樣制備與保存5.1 包裝飲用水充分混勻，直接取用。5.2 液體乳：充分搖勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于4 c避光保存。5.3 豬肉、魚(yú)肉：取適量有代表性的可食部分試樣，切成小塊，組織搗碎機(jī)搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于-18C避光保存。5.4 胡蘿卜、哈密瓜：取適量有代表性的試樣，去皮去籽，切成小塊，

9、組織搗碎機(jī)搗碎，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于-18C避光保存。5.5 嬰兒配方乳粉：充分混勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中， 密封并標(biāo)記，于常溫避光保存。5.6 大米、茶葉：取適量有代表性的試樣，粉碎機(jī)粉碎后過(guò)40目篩，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于常溫避光保存。6測(cè)定步驟6.1 提取6.1.1 包裝飲用水：準(zhǔn)確移取1.0mL試樣，加入10.0山混合同位素內(nèi)標(biāo)液（3.5.4）,渦旋震蕩10s,經(jīng)0.22 g再生 纖維素濾膜過(guò)濾后，取續(xù)濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。6.1.2 胡蘿卜、哈密

10、瓜、茶葉：準(zhǔn)確稱取1g （精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200dL混合同位素內(nèi) 標(biāo)液（3.5.4）,準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（3.1.5）,渦旋振蕩5min ,再準(zhǔn)確加入13.0mL甲醇（3.1.2）, 混勻，振蕩超聲提取 30min , 10000r/min常溫離心10min ,取上清液待凈化。6.1.3 大米：準(zhǔn)確稱取2g （精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200dL混合同位素內(nèi) 標(biāo)液（3.5.4）,準(zhǔn)確加入7.0mL超純水（3.1.5）,渦旋振蕩5min ,再準(zhǔn)確加入13.0mL甲醇（3.1.2）, 混勻，振蕩超聲提取 3

11、0min , 10000r/min常溫離心10min ,取上清液待凈化。6.1.4 嬰兒配方乳粉：準(zhǔn)確稱取2g （精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150dL混合同位素內(nèi) 標(biāo)液（3.5.4）,準(zhǔn)確加入5.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1）,迅速混勻，置于 45c水浴超聲20min , 渦旋振蕩5min ,再準(zhǔn)確加入10.0mL甲醇（3.1.2）,混勻，10000r/min常溫離心10min ,取上清液待 凈化。6.1.5 液體乳：準(zhǔn)確稱取5g （精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入150dL混合同位素內(nèi) 標(biāo)液（3.5.4）,加入 1

12、.0mL0.1% 甲酸水溶液（3.2.1） , 9.0mL 甲醇（3.1.2）,渦旋振蕩 5min, 10000r/min 常溫離心10min,取上清液待凈化。6.1.6 豬肉、魚(yú)肉：準(zhǔn)確稱取2g （精確至0.001g）試樣置于50mL具塞離心管（4.8）中，加入200dL混合同位素內(nèi) 標(biāo)液（3.5.4）,準(zhǔn)確加入 7.0mL超純水（3.1.5） , 13.0mL 甲醇（3.1.2） , 10000r/min 均質(zhì) 30s, 10000r/min 常溫離心10min,取上清液待凈化。6.2 凈化吸取約3.0mL上述上清液（6.1.26.1.6）,按W錄人中的圖A.1方式過(guò)固相萃取柱 （4.9）

13、及0.22叩 再生纖維素濾膜，棄去約1mL流出液，收集續(xù)濾液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。6.3 色譜測(cè)定6.3.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)6.3.1.1 參考液相色譜條件a）色譜柱：AcclaimTRINITYPI 復(fù)合離子交換柱（50mm< 2.1mm , 3（im; 100mnix 2.1mm , 3（im）, 或性能相當(dāng)者。b）流動(dòng)相：A為乙睛，B為20mmol/L甲酸俊溶液。梯度洗脫程序見(jiàn)表2。c）樣品系列運(yùn)行完后，按表 3的色譜柱清洗梯度程序?qū)ιV柱進(jìn)行清洗。d）流速：0.5mL/min。e）柱溫：35 Cof）進(jìn)樣量：3山。表2梯度洗脫程序50mnK 2.1mm, 3 Vm

14、規(guī)格色譜柱100mm< 2.1mm, 3 Vm規(guī)格色譜柱時(shí)間(min)流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）時(shí)間(min)流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）Initial3565Initial70300.535650.270304.065353.090105.090107.090107.090108.070308.0356510.07030表3色譜柱清洗梯度程序50mnX 2.1mm, 3 Vm規(guī)格色譜柱100mm< 2.1mm , 3 Vm規(guī)格色譜柱時(shí)間(min)流速(mL/min)流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）時(shí)間(min)流速(mL/min)流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）Initial0.535

15、65Initial0.5703010.00.15901015.00.159010100.00.159010150.00.159010注：色譜柱按該程序清洗后保存，有助于延長(zhǎng)色譜柱壽命。6.3.1.2 參考質(zhì)譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b）檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。c）掃描方式：負(fù)離子模式掃描。d）毛細(xì)管電壓：200V。e）錐孔電壓：60V。f）脫溶劑溫度：500 C。g）脫溶劑氣流量：1000L/h。h）錐孔氣流量：150L/h。i）采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式采集數(shù)據(jù)，質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表4。表4氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對(duì)和質(zhì)譜分析參數(shù)化合物母離子（m/z）子離子（m/z

16、）錐孔電壓（V）碰撞能量（eV ）氯酸根83.067.0*601585.069.06015高氯酸根99.083.0*6018101.085.06018氯酸根內(nèi)標(biāo)89.071.0*6016高氯酸根內(nèi)標(biāo)107.089.0*6018定量離子對(duì)。注：6.3.1.2的質(zhì)譜條件僅供參考，當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.5.5）按儀器參考條件（6.3.1）進(jìn)行測(cè)定。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃 度為橫坐標(biāo)，以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。6.3.3 定性測(cè)定在相同試驗(yàn)條件下測(cè)定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試

17、樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽、高 氯酸鹽的色譜保留時(shí)間，以相對(duì)于最強(qiáng)離子豐度的百分比作為定性離子的相對(duì)離子豐度。若試樣 中檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5）中氯酸鹽、高氯酸鹽保留時(shí)間一致的色譜峰，且其定性離子與 濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度相比，偏差不超過(guò)表5規(guī)定的范圍，則可以確定試樣中檢出相應(yīng)的氯酸鹽、高氯酸鹽。表5定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（% ）>50>2050>1020< 10允許的相對(duì)偏差（% ）+ 20+ 25+ 30+ 506.3.4 定量測(cè)定若試樣檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.5.5） 一致的氯酸鹽、高氯酸鹽，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作

18、曲線按內(nèi)標(biāo) 法以內(nèi)標(biāo)校正后的響應(yīng)值計(jì)算得到其含量?？瞻讟悠芳訕?biāo)試樣參考色譜圖見(jiàn)附錄B中的圖B.1、B.2。6.4 空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按試樣同法操作。7結(jié)果計(jì)算結(jié)果按式（1）計(jì)算:? X ? X ?=-1)(?式中：X一試樣中各待測(cè)組分的含量，包裝飲用水單位為微克每升（聞/L）,其他樣品單位為微克每千克（聞/kg）;c一從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測(cè)組分的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL ）;V一試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）;f一試樣制備過(guò)程中的稀釋倍數(shù)；m一稱樣量，包裝飲用水單位為毫升（ mL）,其他樣品單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果

19、的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù) 字。8檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度8.1 靈敏度當(dāng)試樣量為1.0mL時(shí)，包裝飲用水中氯酸鹽的檢出限為0.6 g/L定量限為2.0科g/L高氯酸鹽的檢出限為 0.4 g/L定量限為1.0 g/L當(dāng)試樣量為1g （精確至0.001g）、定容體積為 20.0mL時(shí)，胡蘿卜、哈密瓜、茶葉中氯酸鹽的檢出限為12.0科g/kg定量限為40.0科g/kg高氯酸鹽的檢出限為 8.0科g/kg定量限為20.0科g/kg當(dāng)試樣量為2g （精確至0.001g）、定容體積為 20.0mL時(shí)，豬肉、魚(yú)肉、大米中氯酸鹽的檢出限為6.0 g/kg定量限為20.0科g/kg高氯酸鹽的

20、檢出限為 4.0科g/kg定量限為10.0科g/kg當(dāng)試樣量為5g（精確至0.001g）、定容體積為15.0mL時(shí)，液體乳中氯酸鹽的檢出限為1.8g/kg定量限為6.0 g/kg高氯酸鹽的檢出限為1.2科g/kg定量限為3.0科g/kg當(dāng)試樣量為2g （精確至0.001g）、定容體積為15.0mL時(shí)，嬰兒配方乳粉中氯酸鹽的檢出限 為4.5 g/kg定量限為15.0科g/kg高氯酸鹽的檢出限為3.0科g/kg定量限為7.5科g/kg8.2 準(zhǔn)確度本方法在5800的/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為80%110%。8.3 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。附錄A凈化方式示意圖附錄氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖1005.00高氯酸鹽碎