磁微?；瘜W(xué)發(fā)光

1、一、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)概述化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA) 興起于上世紀(jì) 70年代中期，發(fā)展至今已經(jīng)成為一種成熟先進(jìn)的超微量活性物質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，應(yīng)用范圍十分廣泛。該技術(shù)近10年發(fā)展迅猛，是目前推廣應(yīng)用最快的免疫分析方法，也是目前最先進(jìn)的標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)，靈敏度和精確度比酶免法、熒光 法高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。二、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)原理在化學(xué)發(fā)光免疫分析中包含兩個(gè)部分，即免疫反應(yīng)技術(shù)和化學(xué)發(fā)光技術(shù)。其基本原理是免疫反應(yīng)中的 酶作用于發(fā)光底物，使之發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體回 到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)，可同時(shí)發(fā)射出光子

2、。利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量儀器即可測(cè)量出光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與樣 品中的待測(cè)物質(zhì)的量成正比，由此可以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技 術(shù)常采用雙抗體夾心法、競爭法及間接法等反應(yīng)模式，如圖 1-3所示。圖1.雙抗體夾心法標(biāo)抗驚科利士a1標(biāo)本(含抗原)圖2.競爭法標(biāo)本醋標(biāo)（含抗體）抗體固相痂原圖3.間接法三、磁微粒在免疫學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用磁微粒是指磁性納米粒子與無機(jī)或有機(jī)分子結(jié)合形成的可均勻分散于一定基液中具有高度穩(wěn)定性的 膠態(tài)復(fù)合材料。由于磁微粒具有磁響應(yīng)性，成本低、能耗少和無污染等特點(diǎn)，人們?cè)诖盼⒘１砻婊蛲ㄟ^磁 微粒表面的功能基團(tuán)（如氨基、竣基、疏基及環(huán)氧乙烷等）將酶、抗體、

3、寡核甘酸等生物活性物質(zhì)進(jìn)行固 定，可進(jìn)一步用于酶的固定化、靶向藥物載體、細(xì)胞分選、免疫檢測(cè)、蛋白與核酸的分離純化及雜交檢測(cè) 等領(lǐng)域。傳統(tǒng)的免疫學(xué)檢測(cè)多以酶標(biāo)板為固相載體，懸浮性磁微粒作為載體具有較高的比表面積，能夠更為充 分地與樣品反應(yīng)，加之外加磁場的靈活應(yīng)用，較之酶標(biāo)板載體具有更高的靈敏度、更快的檢測(cè)速度和更好 的重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，目前已被廣泛應(yīng)用于生物及醫(yī)學(xué)檢測(cè)等領(lǐng)域。四、磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)介紹磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)綜合了磁微粒載體技術(shù)和化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)，使測(cè)量結(jié)果更準(zhǔn)確， 更穩(wěn)定。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光-雙抗體夾心法：待測(cè)抗原同熒光素標(biāo)記的抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合形成“三明治”結(jié)構(gòu)的復(fù)合物

4、。隨后加入連有抗熒光素 抗體的磁微粒，通過抗熒光素抗體與熒光素的特異性結(jié)合使抗原抗體復(fù)合物連接在磁微粒上，在外加磁場 中直接沉淀，將免疫反應(yīng)形成的復(fù)合物與未結(jié)合的其它物質(zhì)分離。去上清后清洗沉淀的復(fù)合物，加入酶促 化學(xué)發(fā)光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便 發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)，通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄光子能量，并通過計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)將光能量強(qiáng)度在標(biāo) 準(zhǔn)曲線上轉(zhuǎn)換為待測(cè)抗原的濃度，并報(bào)告結(jié)果。磁微粒化學(xué)發(fā)光-競爭法：將待測(cè)抗原、用過量包被磁微粒的抗體和定量的標(biāo)記抗原同時(shí)加入反應(yīng)杯溫育，其免疫反應(yīng)的結(jié)合形 式有兩種，一是標(biāo)記抗原與抗體結(jié)合形成復(fù)合物；

5、二是待測(cè)抗原與抗體結(jié)合形成復(fù)合物。如待測(cè)標(biāo)本中含 有待測(cè)抗原，則與標(biāo)記抗原以同樣的機(jī)會(huì)與磁微粒包被的抗體結(jié)合，競爭性地占去了標(biāo)記抗原與磁微粒包 被的抗體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使標(biāo)記抗原與磁微粒包被的抗體的結(jié)合量減少。由于磁微粒包被的抗體是過量的， 足以與待測(cè)抗原結(jié)合。磁微粒在外加磁場中直接沉淀，將免疫反應(yīng)形成的復(fù)合物與未結(jié)合的其它物質(zhì)分離。 去上清后清洗沉淀的復(fù)合物，加入酶促化學(xué)發(fā)光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài) 中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)，通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄光子能量，并 通過計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)將光能量強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上轉(zhuǎn)換為待測(cè)抗原的濃度，并報(bào)告結(jié)果。磁磁微?；瘜W(xué)發(fā)光一間接法：待測(cè)抗體與熒光素標(biāo)記的抗原結(jié)合，隨后加入包被著抗熒光素抗體的磁微粒，通過抗熒光素抗體與熒 光素的特異性結(jié)合使抗原抗體復(fù)合物連接在磁微粒上，在外加磁場中直接沉淀，去上清后清洗沉淀的復(fù)合 物，加入酶標(biāo)抗體，形成磁微粒-抗原-抗體-酶標(biāo)二抗夾心免疫復(fù)合物。再次清洗后，加入酶促化學(xué)發(fā) 光底物。底物在酶作用下被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時(shí)便發(fā)出光 子，形成發(fā)光反應(yīng)，通過光量子閱讀系統(tǒng)記錄光子能量，并通過