無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)

1、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)簡(jiǎn)介無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)簡(jiǎn)介內(nèi)容提要內(nèi)容提要sd_常見(jiàn)染色體疾病概述常見(jiàn)染色體疾病概述染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理 傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)介紹傳統(tǒng)產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)介紹 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前項(xiàng)目、院內(nèi)流程無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前項(xiàng)目、院內(nèi)流程 四一二三一，染色體非整倍體概述（唐氏綜合征為例一，染色體非整倍體概述（唐氏綜合征為例 ）sd_7世紀(jì)考古學(xué)家挖掘出考古學(xué)家挖掘出典型唐氏綜合征典型唐氏綜合征體征顱骨。體征顱骨。素描畫(huà)中見(jiàn)到具素描畫(huà)中見(jiàn)到具有唐氏綜合征樣有唐氏綜合征樣面容的兒童。面容的兒童。John Langdon John Langdon D D own own 醫(yī)生第一次對(duì)醫(yī)生第一

2、次對(duì)唐氏綜合征的典型唐氏綜合征的典型體征進(jìn)行完整的描體征進(jìn)行完整的描述并發(fā)表述并發(fā)表。Downs syndromeDowns syndrome. .法國(guó)遺傳學(xué)家法國(guó)遺傳學(xué)家(Jerome (Jerome LeJeuneLeJeune) )發(fā)現(xiàn)唐氏綜合征發(fā)現(xiàn)唐氏綜合征是由人體的是由人體的第第2121號(hào)染色體的三體號(hào)染色體的三體變異變異造成的現(xiàn)象。造成的現(xiàn)象。16世紀(jì) 18661866年年19591959年年 21、18、13-三體綜合征是人類(lèi)最常見(jiàn)的三種染色體疾病，患兒面容特殊，絕大多數(shù)為嚴(yán)重智力障礙及器官畸形，對(duì)家庭和社會(huì)造成巨大危害和負(fù)擔(dān)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)胎兒染色體疾病尚無(wú)有效治療方法，最好的方法

3、是在孕期通過(guò)產(chǎn)前篩查及診斷，發(fā)現(xiàn)異常并及時(shí)采取相應(yīng)措施染色體非整倍體疾病臨床表現(xiàn)染色體非整倍體疾病臨床表現(xiàn)2121三體照片三體照片a. a. 同源染色體同源染色體不分離不分離;b. ;b. 姐妹染色單體姐妹染色單體不分離不分離 二，二，染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理染色體非整倍體病發(fā)病機(jī)理 減數(shù)分裂中染色體不分離減數(shù)分裂中染色體不分離第一次減數(shù)分裂第一次減數(shù)分裂第二次減數(shù)分裂第二次減數(shù)分裂三，三，現(xiàn)有的現(xiàn)有的產(chǎn)前篩查與診斷手段產(chǎn)前篩查與診斷手段 sd_l 產(chǎn)前篩查產(chǎn)前篩查 母血清學(xué)篩查母血清學(xué)篩查 頸項(xiàng)透明膜厚度篩查頸項(xiàng)透明膜厚度篩查l 產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷 羊水穿刺羊水穿刺 絨毛取樣絨毛取樣 臍靜脈穿

4、刺臍靜脈穿刺7侵入性診斷方式侵入性診斷方式風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算現(xiàn)有產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷的現(xiàn)有產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷的缺陷性缺陷性來(lái)源：來(lái)源：Estimated prenatal screening performance 1991-2006 (2006 data are provisional), England and Wales. sd_產(chǎn)前篩查（S）100,000篩查結(jié)果陽(yáng)性（SP）7,000篩查結(jié)果陰性（SN）93,000唐氏綜合征胎兒 400真陽(yáng)性 （TSP） 340假陰性 （FSN） 60非唐氏綜合征胎兒 99,600假陽(yáng)性（FSP） 6,660真陰性 （TSN） 92,9401992-20

5、06傳統(tǒng)診斷方法（穿刺）導(dǎo)致的正常胎兒流失傳統(tǒng)診斷方法（穿刺）導(dǎo)致的正常胎兒流失5619最緊迫任務(wù)：最緊迫任務(wù)：新方法新方法的探索：的探索：提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性與檢出率、降低檢測(cè)過(guò)程提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性與檢出率、降低檢測(cè)過(guò)程中的假陽(yáng)性率和假陰性率。中的假陽(yáng)性率和假陰性率。sd_四，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)技術(shù)產(chǎn)生前四，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)技術(shù)產(chǎn)生前提一：孕婦外周血中存在胎兒提一：孕婦外周血中存在胎兒DNADNA胎兒胎兒DNADNA來(lái)源和特點(diǎn)來(lái)源和特點(diǎn)來(lái)源：來(lái)源：1 胎兒細(xì)胞通過(guò)胎盤(pán)滲透到母血中，被母體免疫系統(tǒng)破壞，胎兒DNA殘留下來(lái)；2 胎兒細(xì)胞凋亡；3 胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞的凋亡基本特點(diǎn)：基本特點(diǎn)：1 含量有一定的變

6、化規(guī)律。妊娠第4周開(kāi)始可檢出胎兒游離DNA，隨著孕周增加而增加，存在個(gè)體差異，平均濃度。2 分娩后短時(shí)間內(nèi)消失，平均半衰期為16.3min (4-30min)， 2h就無(wú)法檢出。再次妊娠不影響檢測(cè)結(jié)果。3 DNA片段較小，平均166bp左右。常規(guī)技術(shù)很難檢測(cè)前提二前提二：第二代高通量測(cè)序儀發(fā)明第二代高通量測(cè)序儀發(fā)明6 6億個(gè)億個(gè)DNADNA片段片段/ /次，全基因組測(cè)序只要次，全基因組測(cè)序只要1010天天/ /臺(tái)；臺(tái)；9090個(gè)個(gè)DNADNA片段片段/ /次，全基因組測(cè)通要次，全基因組測(cè)通要5050年年/ /臺(tái)。臺(tái)。（20122012年）年）無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)：無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)：母血漿母血漿DN

7、A+DNA+高通量測(cè)序高通量測(cè)序2021-12-31母體和胎兒的混合物13Unique reads (單一序單一序列讀取列讀取）: no mismatch, one location(Lo (Lo et alet al, , PNASPNAS, , 20082008) )理論模型理論模型 母親母親Chr 21Chr 21：95952=1902=190母體外周血中母體外周血中Chr 21=190+10=200Chr 21=190+10=200以21-三體為例：100 DNA單位 /毫升血漿。其中，95個(gè)單位來(lái)源于母親， 5個(gè)單位來(lái)源于胎兒 通過(guò)大規(guī)模并行測(cè)序，獲得分布在每條染色體上的真實(shí)的核酸片

8、段數(shù)通過(guò)大規(guī)模并行測(cè)序，獲得分布在每條染色體上的真實(shí)的核酸片段數(shù)量，經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)與比較：量，經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)與比較： 正常胎兒正常胎兒 或者或者 21-21-三體胎兒三體胎兒 正常胎兒正常胎兒 Chr 21Chr 21：5 52=102=10 母親母親ChrChr 21 21：95952=1902=190 21-21-三體胎兒三體胎兒 Chr 21 Chr 21：5 53=153=15母體外周血中母體外周血中Chr 21=Chr 21=190+190+15=20515=205 醫(yī)醫(yī) 院院華大基因華大基因無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)流程無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)流程sd_準(zhǔn)確性高于準(zhǔn)確性高于99%99%；早期診斷早期診斷，121

9、2孕周即可檢測(cè)；減少妊娠晚期引產(chǎn)對(duì)孕婦造孕周即可檢測(cè)；減少妊娠晚期引產(chǎn)對(duì)孕婦造成的傷害；成的傷害；非侵入性非侵入性，減輕孕婦心理負(fù)擔(dān)，無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)以及產(chǎn)前診斷，減輕孕婦心理負(fù)擔(dān)，無(wú)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)以及產(chǎn)前診斷引起的并發(fā)癥；引起的并發(fā)癥；可以同時(shí)檢測(cè)可以同時(shí)檢測(cè)其它染色體異常其它染色體異常所需樣本量所需樣本量少少，只需，只需5 5毫升毫升母體外周血。母體外周血。無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)：優(yōu)勢(shì)：無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)：保險(xiǎn)保障優(yōu)勢(shì)：保險(xiǎn)保障檢測(cè)結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)受檢者檢測(cè)結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)受檢者產(chǎn)前診斷所產(chǎn)生的費(fèi)用含：羊膜腔穿刺術(shù)(或經(jīng)皮臍靜脈穿刺術(shù))和染色體核型分析和染色體熒光原位雜

10、交（或FISH），保險(xiǎn)公司給予報(bào)銷(xiāo)超過(guò)2500元。檢測(cè)結(jié)果為低風(fēng)險(xiǎn)檢測(cè)結(jié)果為低風(fēng)險(xiǎn)，若受檢者嬰兒出生后一年內(nèi)經(jīng)縣級(jí)以上檢測(cè)醫(yī)院專(zhuān)科醫(yī)生明確診斷患有“21-三體綜合征”、“18-三體綜合征”、“13-三體綜合征”，保險(xiǎn)公司支付受檢者保險(xiǎn)二十萬(wàn)元整 孕期各項(xiàng)檢測(cè)信息圖孕期各項(xiàng)檢測(cè)信息圖10-13.510-13.5周周早孕期篩查早孕期篩查( (檢出率檢出率85%85%)中孕期篩查中孕期篩查 (檢出率檢出率81%)15-2015-20周周16-2216-22周周羊水穿刺羊水穿刺（流產(chǎn)率（流產(chǎn)率0.5-1%0.5-1%）9-119-11周周絨毛取樣絨毛取樣（流產(chǎn)率（流產(chǎn)率1-5%1-5%） 24-282

11、4-28周周 臍帶血取樣臍帶血取樣（流產(chǎn)率（流產(chǎn)率1-3%）0 04040周周12-2412-24周周無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)（準(zhǔn)確率準(zhǔn)確率99%99%）適應(yīng)人群和適應(yīng)癥適應(yīng)人群和適應(yīng)癥 經(jīng)B超確認(rèn)為單、活胎孕婦； 可檢測(cè)胎兒-13三體、18三體和21三體； 孕12周以上均可進(jìn)行檢測(cè)。禁忌人群、禁忌癥禁忌人群、禁忌癥 懷多胞胎的孕婦； 孕婦本人為染色體非整倍體疾病患者； 孕婦接受過(guò)異體輸血、移植手術(shù)、干細(xì)胞治療、接受過(guò)配偶或親屬淋巴細(xì)胞免疫治療等； 無(wú)法精確檢測(cè)胎兒染色體嵌合型、易位型、微缺失、微重復(fù)、微缺失等結(jié)構(gòu)性異常；院內(nèi)流程院內(nèi)流程檢測(cè)前確認(rèn)事項(xiàng)：1.單活胎（超聲確認(rèn)）2.孕后未

12、接受過(guò)異體的血液制品；3. 孕12周以后開(kāi)始檢測(cè) 產(chǎn)前診斷中心/產(chǎn)科就診,醫(yī)生解釋該項(xiàng)目孕婦簽署知情同意書(shū)/送檢單,領(lǐng)取保險(xiǎn)卡孕婦交費(fèi)后返回產(chǎn)前診斷護(hù)士站抽血（附知情同意/送檢單）采血：EDTA抗凝管采集外周血5ml（輕微顛倒采血管4次）護(hù)士打印2張條形碼1張貼于采血管上，1張貼于申請(qǐng)單的右上角采血后護(hù)士立即交給標(biāo)本處理人員標(biāo)本處理人員（附申請(qǐng)單）（產(chǎn)前診斷中心3樓標(biāo)本接收處（標(biāo)本4保存，不可室溫放置）；）；標(biāo)本處理人員標(biāo)本處理人員8小時(shí)內(nèi)分離血漿，并填寫(xiě)樣本信息單全血采集抽取孕婦外周血5 mL，采用 EDTA 抗凝；采血完畢后，輕微顛倒采血管4次，并及時(shí)將采血管放置于4冰箱中，在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行

13、血漿分離工作。【注意事項(xiàng)】采血時(shí)孕婦無(wú)需空腹；采血管為 5 mL EDTA 抗凝管；顛倒混勻時(shí)動(dòng)作不能太劇烈，防止溶血。血漿分離（本步驟在華大基因完成）1 1、將采血管、將采血管4 4 1600g1600g離心離心10min10min，上清（血漿）分裝到置于冰盒上且已編號(hào)的，上清（血漿）分裝到置于冰盒上且已編號(hào)的2.0ml2.0ml的的 EP EP 管中。管中?！咀⒁馐马?xiàng)】1）嚴(yán)格核對(duì)樣本編號(hào)、確保編號(hào)唯一； 2）開(kāi)啟離心管時(shí)，不能碰到管內(nèi)蓋；3）吸取血漿過(guò)程中不要吸到中間層的白細(xì)胞；2 2、上述血漿、上述血漿 4 4 16000g 16000g 離心離心10 min10 min，冰盒上將上清

14、轉(zhuǎn)入已編號(hào)的，冰盒上將上清轉(zhuǎn)入已編號(hào)的2.0ml EP 2.0ml EP 管管中，每個(gè)離心管轉(zhuǎn)入中，每個(gè)離心管轉(zhuǎn)入600ul600ul血漿。同時(shí)在每個(gè)血漿。同時(shí)在每個(gè)2.0ml2.0ml離心管上標(biāo)記樣本編號(hào)、血漿體離心管上標(biāo)記樣本編號(hào)、血漿體積、分離日期。積、分離日期?！咀⒁馐马?xiàng)】1）嚴(yán)格核對(duì)樣本編號(hào)、確保樣本編號(hào)唯一；2）開(kāi)啟離心管管蓋時(shí)，不能碰到離心管內(nèi)蓋；3）將分離好的血漿貼上對(duì)應(yīng)的條碼并用封口膜密封，密封結(jié)束后立即將血漿放入-20 或-80 冰箱中，避免反復(fù)凍融?！咀⒁馐马?xiàng)】全血須保證在8小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血漿分離；分離后的血漿在-20 冰箱中可保存3天，長(zhǎng)期保存需存放于-80 冰箱。樣本儲(chǔ)存

15、與運(yùn)輸1、全血樣本在冰袋(4 )條件下運(yùn)輸，且在4小時(shí)內(nèi)送達(dá)樣本接收處，樣本接收后要立即完成血漿分離。2、血漿樣本在干冰（-20 ）條件下運(yùn)輸，并確保樣本送達(dá)時(shí)有干冰剩余，到達(dá)后及時(shí)存放于-80 冰箱中，禁止將樣本在室溫下放置。【注意事項(xiàng)】1）泡沫箱的規(guī)格：壁厚6cm、外徑長(zhǎng)39cm、外徑寬32cm、外徑高35cm。2）干冰用量：10公斤/2-3天；15公斤/4-5天；根據(jù)運(yùn)送時(shí)間的長(zhǎng)短，相應(yīng)增加干冰用量。樣本數(shù)T21T18T13XOXXYXXXXYY樣本總數(shù)26619272891513753核型分析347619163108643假陽(yáng)性 1101000假陰性 0000000檢出率100%100

16、%100%100%100%100%100%假陽(yáng)性率0.03%0.03%0.00%0.02%0.00%0.00%0.00%陽(yáng)性預(yù)測(cè)值99.48%98.44%100%88.89%100%100%100%假陰性率 - 0%0%0%0%0%0%0%陰性預(yù)測(cè)值100%100%100%100%100%100%100%數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)（截至2012年3月）全球全球100100多家合作醫(yī)院。多家合作醫(yī)院。完成核型驗(yàn)證完成核型驗(yàn)證34763476例，產(chǎn)后隨訪驗(yàn)證例，產(chǎn)后隨訪驗(yàn)證54895489例。例。病例分析：?jiǎn)渭冃?標(biāo)準(zhǔn)型標(biāo)準(zhǔn)型標(biāo)準(zhǔn)型T21T21樣本編號(hào)：樣本編號(hào)： PDP10003761PDP10003761孕婦年

17、齡：孕婦年齡：3131唐唐 篩：篩：1/510 1/510 （低風(fēng)險(xiǎn)）（低風(fēng)險(xiǎn)）無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T21T21核型分析：核型分析：4747，XXXX，+21+21T13T13 樣本編號(hào)：樣本編號(hào)：PDP100003321PDP100003321 孕婦年齡：孕婦年齡：3232 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T13T13 核型分析：核型分析：4747，XXXX，+13+13病例分析：?jiǎn)渭冃?標(biāo)準(zhǔn)型T18T18 樣本編號(hào)：樣本編號(hào)：PDP100002190PDP100002190 孕婦年齡：孕婦年齡：3232 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T18T18 核型分析：核型分析：4747，XYXY，+18+18T9T9 P

18、DB11AJ00026 PDB11AJ00026，4141歲，孕歲，孕23w+423w+4周周 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：T9T9 羊水核型：羊水核型：T9T9T16T16 PDB11AJ00783 PDB11AJ00783 ，3030歲，孕歲，孕1919周周 無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：1616號(hào)染色體偏多號(hào)染色體偏多 羊水羊水FISHFISH：T16T16病例分析：其它染色非整倍體病例分析：T9嵌合體PDB11AG00106PDB11AG00106，3939歲，孕歲，孕2020周周無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：兩次測(cè)序結(jié)果均顯示無(wú)創(chuàng)檢測(cè)：兩次測(cè)序結(jié)果均顯示9 9號(hào)染色體偏多號(hào)染色體偏多羊水核型：羊水核型：47,XX,+955/46,XX3347,XX,+955/46,XX33臍血核型：臍血核型：47,XX,+93/46,XX,22547,XX,+93/46,