常用緩沖液配置

1、實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案1)1 M Tris-HCl ,組份濃度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1 .稱量121.1 g Tris 置于1 L燒杯中。2 .加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? .按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。PH值濃HCl約 70ml約 60ml約 42ml4 .將溶液定容至1 L。5 .局溫身壓火菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低個(gè)單位。2)10 XTE Buffer,組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制

2、量：1 L配制方法：1 .量取下列溶液，置于1 L燒杯中1M Tris - HCl Buffer(,)100ml500mM EDTA20ml2 .向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。3 .將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。4 .室溫保存。3)1.5 M Tris-HCl組份濃度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1 .稱量181.7 g Tris 置于1 L燒杯中。2 .加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? .用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至。4 .將溶液定容至1 L。5 .局溫身壓火菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值

3、隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低個(gè)單位。4)3 M醋酸鈉組份濃度：3M醋酸鈉配制量：100ml配制方法：1 .稱量40.8g NaAc-3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙? .加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3 .加去離子水將溶液定容至 100ml4局溫身壓火菌后，室溫保存。5)PBS Buffer組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1.稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.

4、向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? .滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4 .局溫身壓火菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。6)10 M醋酸俊組份濃度：10 M醋酸鏤配制量：100 ml配制方法:1 .稱量g醋酸鏤置于100200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻? . 加去離子水將溶液定容至100 ml 。3 .使用mm濾膜過(guò)濾除菌。4 . 密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7)苯酚/氯仿/異戊醇(

5、25 : 24 : 1)配制方法：1. 說(shuō)明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/ 氯仿/ 異戊醇(25 : 24 : 1) 。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過(guò)程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法：將Tris-HCl 平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 : 1 )混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8) 10 (W/V) SDS組份濃度：10 (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1 .稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68c加入溶解2 .滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3 . 將溶液定容至100ml 后，室溫保存

6、。9) 2 N NaOH組份濃度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1 .量取80 ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中（NaOH容解過(guò)程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂） 。2 . 稱取 8 g NaOH 小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3 .待NaOHE全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4 . 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。10） N HCl組份濃度：N HCl配制量：100 ml配制方法：1. 在 ml 的去離子水中加入ml 的濃鹽酸（N） ，均勻混合。2. 室溫保存。11） 5 M NaCl組份濃度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：

7、1. 稱取 292.2 g NaCl 置于 1 L 燒杯中，加入約800 ml 的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1 L 后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。11) 20(W/V) Glucose組份濃度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1 .稱取20 g Glucose 置于100200 ml燒杯中，加入約 80 ml的去離子水后,攪拌溶解。2 .加去離子水將溶液定容至 100 ml o3 .局溫身壓火菌后，4c保存。12) Solution I(質(zhì)粒提取用)組份濃度：25 mM Tris-HCl (, 10 mM EDTA, 50

8、 mM Glucose配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于1 L燒杯中。1M Tris-HCl ()25ml0.5M EDTA ()20ml20% Glucose (1.11M)45mldH2O910ml2.局溫身壓火困后，4c保存。3.使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A (20 mg/ml)。13) Solution II(質(zhì)粒提取用)組份濃度：200mM NaO H 1 % (W/V)SDS配制量：500ml 配制方法:1 .量取下列溶液，置于 500ml燒杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2 .加滅菌水定容至5

9、00ml，充分混勻3 .室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過(guò)一個(gè)月注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?4) Solution川(質(zhì)粒提取用)組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1 .稱量下列試劑，置于 500 ml燒杯中。KOAc147gCH3COOH2 .加入300 ml去離子水后攪拌溶解c3 .加去離子水將溶液定容至 500 ml4 .局溫身壓火菌后，4c保存。15) 0.5 M EDTA組份濃度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法： 稱取g Na2EDTA 2H2Q置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?.

10、 用 NaOHM節(jié) pH值至（約 20 g NaOH）。注意：pH值至?xí)r，EDTAt能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1 L 。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。16） 1 M DTT組份濃度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1. 稱取 g DTT ，加入到50 ml 塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的M NaOAc（,溶解后使用 mm濾器過(guò)濾除菌。3. 適量分成小份后，-20 保存。17） 10 mM ATP組份濃度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 稱取121 mg Na2ATP-3H2Q加入到 50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加 20 m

11、l 的 25 mM Tris-HCl （，攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20 保存。一 . 常用貯液與溶液1mol/L 亞精胺 （ Spermidine ） : 溶解 2.55g 亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml分裝成小份貯存于-20 。1mol/L精胺（Spermine ）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20 。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate ） ：將 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）:加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無(wú)DN

12、AB）于水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml， 然后分裝成小份貯存于-20。1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT） ：在二硫蘇糖醇5g 的原裝瓶中加水，分成小份貯存于-20 或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加的水配制成1mol/L 二硫蘇糖醇溶液。8mol/L 乙酸鉀（potassium acetate ） ：溶解 78.5g 乙酸鉀于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯化鉀（KCl） ：溶解 7.46g 氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸鈉（s

13、odium acetate ） ：溶解 40.8g 的三水乙酸鈉于約90ml 水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至，再加水定容到100ml。L EDTA:配制等摩爾的Na2EDT厭口 NaOH容液（L）,混合后形成EDTA勺三鈉鹽?；蚍Q取186.1g的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES將溶于約90ml的水中，用 NaOHH pH（）,然后用水定容至100ml。1mol/L HCl ：加的濃鹽酸至的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT （異丙基硫代-B -D-半乳糖背）于10ml水中，分成小份貯存于-20 。1mol/LMg

14、Cl2:溶解20.3g MgCl2 . 6H2O于足量的水中,定容到 100mL 100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20 C 020mg/ml蛋白酶K （proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20 C。10mg/mlRnase （無(wú) DNase） （DNase-free RNase ）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH ）。溶解

15、后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl調(diào)pH至，于-20 C貯存。（配制過(guò)程中要戴手套）5mol/L氯化鈉（NaCl）:溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至 100ml。10N氫氧化鈉（NaOH：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10%SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol ）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為 100ml。100%三氯乙酸（TCA

16、 :在裝有500gTCA的試齊U瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器 攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）% X gal （5-溟-4-氯-3- 口引噪一B -半乳糖昔）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF ,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20 C 0100X Denhardt 試齊J （ Denhardts regent ）“分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll , 400 型）2g2%聚乙烯口比咯烷酮（PVP-40）2g2%BSA （組分 V）2g加水至總體積為100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過(guò)濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20 C

17、貯存。10X標(biāo)準(zhǔn)DNA接酶緩沖液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端連接）成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L鹽酸亞精胺（可選）ml BSA （組分V）（可選）水5ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液200ul 100 mmol/L 貯液50ul 1 mmol/L 貯液10 mg/mL 貯液將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于 -20 C 0100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions

18、）可以購(gòu)買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80 C可貯存至少6個(gè)月。10mmol/L dNTP 混合液分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dATP 貝匕液2ul 100 mmol/L dCTP 貝匕液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP貯液10mmol/L dllP2ul 100 mmol/L dllP貯液12ul20 % PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為20%聚乙二20g醇50ml 5 mol/L 氯化鈉 或14.6g

19、固一氯化鈉體氯化鈉補(bǔ)足100ml加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml,用磁力攪拌器攪拌溶解20XSSC分及終濃度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L檸檬酸三鈉（二88.2g175.3g3mol/L氯化鈉補(bǔ)足1L溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH容液調(diào)pH為,用水補(bǔ)足體積至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水加100ul DEPC于100ml水中，使 DEPC勺體積分?jǐn)?shù)為。在 37c溫浴至少12h,然后在15 psi條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPCfe活。DEP篌與胺起反應(yīng)，不可用DEPO理Tris緩沖液。甲酰胺（deion

20、ized formamide ）直接購(gòu)買或加Dowex XG8混合樹(shù)脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾除去樹(shù)脂后分成小份，充氮?dú)庥?80C貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffer ）按照下表所給定的體積，混合1 mol/L的磷酸二氫鈉（單堿）和 1mol/L磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制 1 mol/L的磷酸二氫鈉（NaH2PO4H2O貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4貯液：溶解142g于足量水中使終體積為 1L。1mol/L

21、磷酸二氫鈉（ml）1mol/L磷酸氫二鈉（ml）最終pH值877123850150815185775225735265685315625375565435510490450550390610330670280720TE （用于懸7?和貯存DNA成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl(, 25 C)200ul mol/L EDTA ( pH )Tris 緩沖液（Tris-HCl buffer ）將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH （25C下）加一定量的濃鹽酸（），用水

22、調(diào)整終體積至1L。濃鹽酸的體積（ml）PH14213846566676二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50X Tris -乙酸(TAE緩沖液分及終濃度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 堿242g1mol/L乙酸ml的冰乙酸(mol/L )100 mmol/L EDTA200ml 的 mol/L EDTA (pH )水補(bǔ)足1L5x Tris -硼酸(TBE緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 堿54g445 mmol/L硼酸鹽27.5g硼酸10 mmol/L EDTA20 ml 的 mol/L EDTA (pH )水補(bǔ)足1L染料1 %澳

23、酚藍(lán)(bromophenol blue )加1g水溶性鈉型漠酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF (xylene cyanole FF )溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的澳化乙錠(ethidium bromide )小心稱取1g濱化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加 100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4 c貯存。凝膠上樣液(gel loading solutions )6X堿性凝膠上樣液(室溫貯存)成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量N氫氧化鈉300ul 10N氫氧化鈉6 mmol/L EDTA120u

24、l L EDTA ()18%聚蔗糖（400型）1.8g漠甲酚綠15mg%一甲” FF25mg補(bǔ)足到10ml6 x聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量上臭酚藍(lán)1 %漠酚藍(lán)%一甲” FF1 %一甲” FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()15%聚蔗糖（400型）1.5g補(bǔ)足到10ml6X澳酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）分及終濃度配制10ml溶液各成分用量上臭酚藍(lán)%一甲” FF15%聚蔗糖（400型）1 %漠酚藍(lán)1 %一甲” FF1.5g補(bǔ)足到10ml6X甘油凝膠上樣液（4c貯存）分及終濃度配制10ml溶液各成分用量上臭酚藍(lán)1 %漠酚

25、藍(lán)%一甲” FF1 %一甲” FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()50%甘油3ml6X蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量%漠酚藍(lán)1 %漠酚藍(lán)%一甲” FF1 %一甲” FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()40%聚蔗糖4g水補(bǔ)足到10ml10X十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）”及終濃度配制10ml溶液各成分用量（漠酚藍(lán)20mg%一甲” FF20mg200 mmol/L EDTA4mlL EDTA%SDS100ul 10 % SDS50%甘油5ml補(bǔ)足到10ml三.常用培養(yǎng)基1） LB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.

26、9L水中:M白月東10g酵母提取物5g氯化鈉10g如果需要用1N NaOH(1ml)調(diào)整pH至，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L0SOBW養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白陳20g酵母提取物5g“化鈉0.5g1 mol/L 氯化鉀用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂。2) SOCW養(yǎng)基成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過(guò)菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g

27、葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml,用的濾膜過(guò)濾除菌)。3) TB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：12g酵母提取物24g“油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60 C,再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/mol/LK2HPO4勺溶液(的KH2P。和溶在足量的水中，使終體積為 100ml。高壓滅菌或用的濾膜過(guò)濾除菌)。4) 2XYT培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中:16g酵母提取物10gX化鈉4ml如果需要用1N NaOH(1ml)調(diào)整pH至，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉 7g/L05) YPDW養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：20g酵母提取物10g，萄糖20g用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培