第1章組織學(xué)緒論

1、 第一章 組織學(xué)緒論學(xué)習(xí)重點本章主要介紹組織學(xué)研究內(nèi)容、發(fā)展簡史、學(xué)習(xí)方法和主要研究技術(shù)。 重點學(xué)習(xí)光鏡用石蠟切片，HE染色技術(shù)，電鏡技術(shù)的基本原理，常用光鏡和電鏡組織學(xué)術(shù)語；組化、免疫組化和原位雜交技術(shù)的基本原理；了解組織培養(yǎng)、組織工程和圖像分析等技術(shù)。 主要內(nèi)容一、組織學(xué)的定義、內(nèi)容及其在醫(yī)學(xué)中的地位1、 組織學(xué)（histology）：是研究正常人體微細結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)，即在光鏡(Light Microscope, LM)和電鏡(Electron Microscope, EM)下觀察人體的微細結(jié)構(gòu)，及其與功能的關(guān)系，重點是形態(tài)結(jié)構(gòu)。2、 學(xué)習(xí)內(nèi)容包括：總論：上皮組織、結(jié)締組織、肌肉組

2、織、神經(jīng)組織等基本組織的組織結(jié)構(gòu)與功能。各論：各系統(tǒng)器官的組織結(jié)構(gòu)及其與功能的關(guān)系。3、組織學(xué)是重要的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)形態(tài)學(xué)科, 是學(xué)習(xí)病理學(xué)的基礎(chǔ)，也是學(xué)習(xí)生理、生化等機能學(xué)科的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)課程。二、組織學(xué)常用的研究技術(shù)（一）一般光鏡技術(shù)1、石蠟切片，蘇木精, 伊紅(Hematoxylin， Eosin，HE)染色制作基本原理：取材：取出所需的組織，切成小塊。固定：用固定劑（甲醛等）使組織塊中的蛋白質(zhì)變性凝固，以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)。石蠟包埋：先用由低到高濃度的酒精脫去組織塊中的水，再用溶解的石蠟滲透入組織塊，冷凝后組織塊變硬，便于切片。切片：在切片機上切成510m厚的組織切片，貼到載玻片上。HE染色：用H

3、E染色，增加組織、細胞各部分之間的色差，光鏡下才能觀察分辨。封片：樹膠封固組織切片，便于切片保存和光鏡下觀察。蘇木精(H)：為堿性染料，將細胞核和核糖體等染成藍色，故細胞核等具有嗜堿性。伊紅(E)：為酸性染料,可將細胞質(zhì)的其它成份染成紅色,故細胞質(zhì)具有嗜酸性。2、恒冷箱切片：取材快速冷凍恒冷箱切片機切片染色封片。不須石蠟包埋，快捷。不經(jīng)高溫，對酶活性保存好，常用于酶組化和外科快速診斷。3、涂片：刮取物或液體涂片固定染色封片此外，用于光鏡的還有火膠包埋切片、撕片(鋪片)和磨片等切片方法。除HE染色法外，還有硝酸銀染色法、醛復(fù)紅染色法和活體染色法等。（二）電鏡技術(shù)包括 透射電鏡術(shù)：觀察組織細胞的平

4、面超微結(jié)構(gòu)（Ultrastructure）。掃描電鏡術(shù)：觀察組織細胞的表面立體結(jié)構(gòu)。普通光鏡和透射電鏡的主要不同普通光鏡 透射電鏡光 源 可見光束 電子束透鏡 玻璃透鏡 電磁透鏡切 片 石蠟包埋切片 樹脂包埋切片 厚 510m 5080nm（超薄切片）染 色 有機染料 重金屬：鈾、鉛等成 像 彩色 黑白有效分辨率 可達0.1m 可達0.2nm描述術(shù)語 顯微結(jié)構(gòu) 超微結(jié)構(gòu) 嗜酸性，嗜堿性 高電子密度，低電子密度3、組織化學(xué)與細胞化學(xué)：通過化學(xué)或物理反應(yīng)原理,研究組織或細胞內(nèi)某種化學(xué)成分的研究方法。如：過碘酸希夫反應(yīng)（periodic acid Schiff reaction, PAS反應(yīng)）：顯示

5、多糖和某 些糖蛋白。 過碘酸 （無色）多糖 多糖醛基 + 希夫試劑 紫紅色產(chǎn)物 福爾根反應(yīng)（Feulgen反應(yīng)）：顯示核酸。 稀鹽酸 （無色）DNA DNA醛基 + 希夫試劑 紫紅色產(chǎn)物 酶組化：顯示存在于組織細胞內(nèi)的酶，如過氧化酶等。 細胞內(nèi)過氧化酶聯(lián)笨胺+H2O2 聯(lián)笨胺蘭（藍色產(chǎn)物） +2 H2O4、免疫細胞化學(xué)：應(yīng)用抗原與抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)原理，用熒光、酶、膠體金等標(biāo)記抗體，標(biāo)記抗體與組織細胞內(nèi)的抗原（多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)）發(fā)生特異性結(jié)合，形成帶有標(biāo)記物的抗原抗體復(fù)合物。檢測標(biāo)記物，確定抗原的存在與分布。5、原位雜交術(shù)(in situ hybridizatio

6、n)：即核酸分子雜交組織化學(xué)術(shù)。該技術(shù)應(yīng)用已知堿基序列的帶有標(biāo)記物（放射性核素、酶、地高辛等)的RNA或DNA片段作為核酸探針（probe），按兩條單鏈核苷酸堿基互補專一配對的特點，與組織切片或細胞內(nèi)的待測核酸進行雜交。在光鏡或電鏡下原位觀察標(biāo)記物，指示目的mRNA或DNA的定性與定位分布，研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。6、組織細胞體外培養(yǎng)與組織工程技術(shù)：取活組織或細胞在體外無菌的適宜條件（如適宜的營養(yǎng)、生長因子、pH值、滲透壓、溫度等）下培養(yǎng)生長。在倒置相差顯微鏡下觀察細胞的生長、代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，以及各種理化因子(激素、藥物、毒物、輻射等)對活細胞的直接影響等。組

7、織工程是用細胞培養(yǎng)術(shù)在體外模擬構(gòu)建機體組織或器官的技術(shù)。7、圖象分析術(shù)(image analysis)又稱形態(tài)計量術(shù)(morphometry)：是應(yīng)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計學(xué)原理，在圖象分析儀下分析組織切片上的平面圖像，從而獲得組織和細胞內(nèi)的各種有形成分的數(shù)量、體積、表面積等參數(shù)，如肺泡的數(shù)量和表面積、腎小體的數(shù)量和表面積等，從量的角度顯示了結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。測試題（一）單項選擇題1光鏡下觀察的組織石蠟包理切片厚度一般是A.100um B.50umC.5-10um D.1um左右 E.0.1-0.5um2透射電鏡下觀察的組織切片厚度一般是A.50-80nm B.5-10nmC.1-2nm D.100-50

8、0nm E.1um左右3PAS反應(yīng)是檢測組織內(nèi)的A.核酸 B.脂類C.蛋白水解酶 D.多糖類 E.抗原4光鏡組織切片和電鏡組織切片A.均為超薄切片 B.均用化學(xué)染料染色C.均可制冷凍切片 D.均要固定組織和細胞E.均可攝彩色照片5掃描電鏡是主要用于觀察A.生物膜內(nèi)部結(jié)構(gòu)B.細胞器的內(nèi)部結(jié)構(gòu)C.組織和細胞的表面結(jié)構(gòu)D.細胞內(nèi)的多糖E.細胞核內(nèi)的結(jié)構(gòu)6掃描電鏡術(shù)不同于透射電鏡術(shù)的一點是A.組織勿需固定B.勿需制備超薄切片C.是以激光掃描標(biāo)本D.不在熒光屏上顯像E.可觀察活細胞7. 觀察體外培養(yǎng)細胞首選的顯微鏡是 A. 一般光鏡 B. 倒置相差顯微鏡 C.相差顯微鏡 D. 暗視野顯微鏡 E. 偏光顯

9、微鏡8. 原位雜交術(shù)檢測A.DNA、RNA B.DNA、mRNAC.DNA、脂肪 D.DNA、蛋白質(zhì)E. DNA、多糖二、多項選擇題1組織固定的意義是A.使蛋白質(zhì)迅速溶解B.防止細胞自溶C.使組織膨脹D.使組織堅硬E.防止組織腐敗2組織化學(xué)術(shù)可檢測組織內(nèi)的A.抗原 B.酶C.脂類 D.糖類E.核酸3透射電鏡術(shù)中的組織塊和組織切片A.組織塊大小與光鏡術(shù)的相近B.組織塊用戊二醛,四氧化鋨等固定C.組織塊石蠟包埋D.切片用重金屬電子染色E.切片置在玻片上于電鏡下觀察4組織培養(yǎng)術(shù)A.取新鮮組織和細胞B.標(biāo)本以高溫滅菌C.溶液和用具均需滅菌D.標(biāo)本培養(yǎng)于近似體內(nèi)的條件下E.可直接觀察記錄活細胞的行為5.

10、 對伊紅親合力強的結(jié)構(gòu)有A.細胞膜 B.細胞質(zhì) C.細胞核D.糖原 E.嗜酸性顆粒6. 關(guān)于染色,下列哪項是對的A. 易被堿性染料著色的組織細胞成分稱為嗜堿性B. 易被酸性染料著色的組織細胞成分稱為嗜酸性C.組織細胞成分若對堿性和酸性染料親和力都不強稱為中性D.電鏡下呈黑或深灰色的結(jié)構(gòu)描述為高電子密度E.電鏡下呈淺深灰色的結(jié)構(gòu)描述為低電子密度（三）填空題1HE染色法的染料是_和_,組織切片中與前者親和力強的著色結(jié)構(gòu)具有_性，與后者親和力強的著色結(jié)構(gòu)具有_性，與兩者親和力均不強者具有_性。2組織塊在包埋前需先經(jīng)_，常用的包埋劑是_、_和_。3在光學(xué)顯微鏡下觀察的固定標(biāo)本除組織切片外，還有_、_和

11、_。4基本組織一般分為四大類，即_、_、_和_。5超薄切片染色常用_，染色深的結(jié)構(gòu)稱為_，染色淺的結(jié)構(gòu)稱為_。6對光鏡標(biāo)本或光鏡與電鏡圖片進行形態(tài)計量研究的儀器稱_，它能分析組織細胞的平面_ ，從而獲得立體的組織和細胞內(nèi)的各種有形成分的數(shù)量、體積、表面積等 _ ，從量的角度顯示了結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。 （四）判斷題1組織在固定包埋后才能做組織切片。2由幾種固定劑配制而成的混合固定液，其固定組織的效果較單一固定劑的好。3組織化學(xué)和細胞化學(xué)染色切片只能在光鏡下觀察，不能在電鏡下觀察。4一種組織中的細胞，它們的起源、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能表達都是相同或近似的。5免疫細胞化學(xué)間接法優(yōu)于直接法，是因為間接法既比直接

12、法更敏感，又可應(yīng)用標(biāo)記二抗商品試劑而簡便易行。6細胞培養(yǎng)術(shù)的特點是可用以研究各種生物、理化因素對細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理功能和病理變化的直接影響。（五）名詞解釋1.Histology2.HE染色3.嗜酸性4.嗜堿性 5、組織化學(xué)技術(shù)（六）問答題1. 簡述HE染色，石蠟切片制作基本步驟和原理。2. 簡述免疫細胞化學(xué)技術(shù)的基本原理和應(yīng)用意義。本章參考題解 一、單項選擇題1. C2. A3. D4. D5. C6. B7. B8. B二、多項選擇題1 BE2 BCDE3 BD4 ACDE5 BE6 ABCDE三、填空題1. 蘇木精，伊紅，嗜堿性，嗜酸性，中性2. 固定，石蠟，火棉膠，樹脂3. 涂片，鋪片，

13、磨片4. 上皮組織，結(jié)締組織，肌組織，神經(jīng)組織5. 醋酸鈾，電子密度高，電子密度低6. 圖像分析儀，圖像，參數(shù)四、判斷題正確: 2,5,6錯誤：1. 恒冷箱切片不需要固定組織就可做組織切片，也可固定后切片。3也有用于電鏡的組織化學(xué)和細胞化學(xué)染色方法。4一種組織中的細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能可以不相同。五、名詞解釋1. 組織學(xué) (Histology)：是研究正常人體微細結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)，即在光鏡和電鏡下研究人體的微細結(jié)構(gòu)，及其與功能的關(guān)系，重點是形態(tài)結(jié)構(gòu)。學(xué)習(xí)內(nèi)容包括上皮組織、結(jié)締組織、肌肉組織與神經(jīng)組織等基本組織的組織結(jié)構(gòu)與功能以及各系統(tǒng)器官的組織結(jié)構(gòu)及其與功能的關(guān)系。2.HE染色：H是蘇木精

14、的縮寫，為堿性染料，將細胞核和核糖體等染成藍色，故細胞核等具有嗜堿性。E代表伊紅，為酸性染料，可將細胞質(zhì)的其它成份染成紅色，故細胞質(zhì)具有嗜酸性。3.嗜酸性：組織細胞中易被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)，稱為具有嗜酸性，如細胞的胞質(zhì)以及結(jié)締組織中的膠原纖維等。4.嗜堿性：組織細胞中易被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)，稱為具有嗜酸性，如細胞核以及胞質(zhì)中的核糖體等。 5、組織化學(xué)技術(shù)：通過化學(xué)或物理反應(yīng)原理,研究組織或細胞內(nèi)某種化學(xué)成分的研究方法。如顯示多糖和某些糖蛋白的PAS反應(yīng)， 顯示核酸 的Feulgen反應(yīng)，以及顯示存在于組織細胞內(nèi)的酶的酶組化方法。六、論述題1. 石蠟切片，HE染色是光鏡最常用的制片方法。其基本步驟和原理如下：取材：取出所需的組織，切成小塊。固定：用固定劑（如甲醛等）使組織塊中的蛋白質(zhì)變性凝固，以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)。石蠟包埋：先用由低到高濃度的酒精脫去組織塊中的水，再用溶解的石蠟滲透入組織塊，冷凝后組織塊變硬，便于切片。切片：在切片機上切成510m厚的組織切片。用HE染色，以增加組織、細胞的各部分之間的色差，光鏡下才能分辨。蘇木精(H)：為堿性染料，將細胞核和核糖體等染成藍色，故細胞核等具有嗜堿性。伊紅(E)：為酸性染料,可將細胞質(zhì)的其它成份染成紅色，故細胞質(zhì)具有嗜酸性。封片：用樹膠封