第六節(jié)蛋白質(zhì)的性質(zhì)及分離分析技術(shù)ppt課件

1、第六節(jié)第六節(jié) 蛋白質(zhì)的性質(zhì)及分別分蛋白質(zhì)的性質(zhì)及分別分析技術(shù)析技術(shù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)一、兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)一、兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)二、膠體性質(zhì)二、膠體性質(zhì)三、變性與復(fù)性作用三、變性與復(fù)性作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用五、沉降作用五、沉降作用六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響七、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)七、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)一、蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn)蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的側(cè)鏈上存在游離的蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的側(cè)鏈上存在游離的氨基和羧基，因此蛋白質(zhì)與氨基酸一樣具有兩氨基和羧基，因此蛋白質(zhì)與氨基酸一樣具有兩性解離性質(zhì)，具有特定的等電點(diǎn)性解離性質(zhì)，具有特定的等電點(diǎn)pI。溶液溶液pHpI

2、時(shí)，蛋白質(zhì)所帶正負(fù)電荷相等；時(shí)，蛋白質(zhì)所帶正負(fù)電荷相等； pHpI時(shí)，蛋白質(zhì)帶凈負(fù)電荷；時(shí)，蛋白質(zhì)帶凈負(fù)電荷； pHpI時(shí)，蛋白質(zhì)帶凈正電荷。時(shí)，蛋白質(zhì)帶凈正電荷。& 等電點(diǎn)時(shí)特點(diǎn)：等電點(diǎn)時(shí)特點(diǎn)：&1凈電荷為零凈電荷為零&2一定離子強(qiáng)度的緩沖液：一定離子強(qiáng)度的緩沖液：等離子點(diǎn)特征常數(shù)等離子點(diǎn)特征常數(shù)&3多數(shù)蛋白質(zhì)在水中等電點(diǎn)多數(shù)蛋白質(zhì)在水中等電點(diǎn)偏酸偏酸& 堿性堿性AA/酸性酸性AA 等電點(diǎn)等電點(diǎn)& 胃蛋白酶胃蛋白酶 0.2 1.0& 血紅蛋白血紅蛋白 1.7 6.7& 細(xì)胞色素細(xì)胞色素C 2.9 10.7& 菊糖酶菊糖酶

3、 0.34 8.2&4導(dǎo)電性、溶解度、黏度及導(dǎo)電性、溶解度、黏度及浸透壓都最小。浸透壓都最小。& 等電沉淀和蛋白電泳：等電沉淀和蛋白電泳：& 遷移率與凈電荷量、分子大小、遷移率與凈電荷量、分子大小、分子外形等有關(guān)分子外形等有關(guān)帶電粒子在電場(chǎng)中挪動(dòng)的景象稱為電泳帶電粒子在電場(chǎng)中挪動(dòng)的景象稱為電泳electrophoresiselectrophoresis 。電泳：電泳： Whats electrophoresis?一、蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn)蛋白質(zhì)分子在一定蛋白質(zhì)分子在一定pH的溶液中可帶凈的負(fù)電的溶液中可帶凈的負(fù)電荷或正電荷，故可在電場(chǎng)中發(fā)生挪動(dòng)。荷或正電荷，故可在電場(chǎng)

4、中發(fā)生挪動(dòng)。不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷量不同，且分子大不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷量不同，且分子大小也不同，故在電場(chǎng)中的挪動(dòng)速度也不同，小也不同，故在電場(chǎng)中的挪動(dòng)速度也不同，據(jù)此可相互分別。據(jù)此可相互分別。一、蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)分子的顆粒直徑已達(dá)蛋白質(zhì)分子的顆粒直徑已達(dá)1100nm1100nm，處于膠，處于膠體顆粒的范圍。親水膠體體顆粒的范圍。親水膠體蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)：布朗運(yùn)動(dòng)、丁道蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)：布朗運(yùn)動(dòng)、丁道爾景象、不能透過(guò)半透膜、具有吸附力等。爾景象、不能透過(guò)半透膜、具有吸附力等。1 1、蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)、蛋白質(zhì)具有膠體

5、溶液的性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)2 2、穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水溶膠的兩個(gè)重要要素：、穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水溶膠的兩個(gè)重要要素：水化膜水化膜 - - 經(jīng)過(guò)氫鍵與水結(jié)合經(jīng)過(guò)氫鍵與水結(jié)合外表電荷外表電荷- - 在非等電點(diǎn)形狀下，雙電層，在非等電點(diǎn)形狀下，雙電層，帶帶 同性電荷蛋白質(zhì)分子相互排同性電荷蛋白質(zhì)分子相互排斥。斥。 蛋白質(zhì)顆粒的外表電荷和水化膜蛋白質(zhì)顆粒的外表電荷和水化膜+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作

6、用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用3.3.蛋白質(zhì)凝膠蛋白質(zhì)凝膠凝膠作用：凝膠作用： 蛋白質(zhì)顆粒周圍的水膜是不蛋白質(zhì)顆粒周圍的水膜是不均勻均勻, ,使它們以一定的部位結(jié)合形生長(zhǎng)鏈。使它們以一定的部位結(jié)合形生長(zhǎng)鏈。這些長(zhǎng)鏈又彼此結(jié)合成為復(fù)雜的網(wǎng)狀構(gòu)造這些長(zhǎng)鏈又彼此結(jié)合成為復(fù)雜的網(wǎng)狀構(gòu)造的凝膠體。的凝膠體。 溶膠：蛋白質(zhì)作為分散相，水為延續(xù)相構(gòu)成的溶液。溶膠：蛋白質(zhì)作為分散相，水為延續(xù)相構(gòu)成的溶液。 凝膠：蛋白質(zhì)為延續(xù)相，水為分散相構(gòu)成的網(wǎng)狀凝膠體。凝膠：蛋白質(zhì)為延續(xù)相，水為分散相構(gòu)成的網(wǎng)狀凝膠體。二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)3.3.蛋白質(zhì)凝膠蛋白質(zhì)凝膠凝膠具有脹潤(rùn)作用：凝膠具有

7、脹潤(rùn)作用：分類：分類：1 1可逆性凝膠可逆性凝膠 2 2不可逆性凝膠不可逆性凝膠部分破壞水化膜、適當(dāng)加熱和遠(yuǎn)離等電點(diǎn)部分破壞水化膜、適當(dāng)加熱和遠(yuǎn)離等電點(diǎn)4.4.蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)的運(yùn)用蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)的運(yùn)用滲析透析滲析透析超濾超濾二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)三、蛋白質(zhì)的變性、復(fù)性與凝固作用三、蛋白質(zhì)的變性、復(fù)性與凝固作用& 在某些物理或化學(xué)要素的作用下，蛋白質(zhì)嚴(yán)厲在某些物理或化學(xué)要素的作用下，蛋白質(zhì)嚴(yán)厲的空間構(gòu)造被破壞肽鍵不斷裂，一級(jí)構(gòu)造不的空間構(gòu)造被破壞肽鍵不斷裂，一級(jí)構(gòu)造不變，從而引起蛋白質(zhì)假設(shè)干理化性質(zhì)和生物學(xué)變，從而引起蛋白質(zhì)假設(shè)干理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)的改動(dòng)，稱為蛋白質(zhì)的

8、變性性質(zhì)的改動(dòng)，稱為蛋白質(zhì)的變性(denaturation)。 Whats denaturation of protein?1 1、變性實(shí)際、變性實(shí)際 蛋白質(zhì)的變性就是天然蛋白質(zhì)分子中蛋白質(zhì)的變性就是天然蛋白質(zhì)分子中肽鏈的高度規(guī)那么的嚴(yán)密陳列方式因氫鍵及其肽鏈的高度規(guī)那么的嚴(yán)密陳列方式因氫鍵及其他次級(jí)鍵的破壞而變成不規(guī)那么的松散陳列方他次級(jí)鍵的破壞而變成不規(guī)那么的松散陳列方式。式。2 2、引起蛋白量變性的要素：、引起蛋白量變性的要素： 物理要素：物理要素： 高溫、高壓、紫外線、電離輻射、超聲波、機(jī)高溫、高壓、紫外線、電離輻射、超聲波、機(jī)械攪拌械攪拌 化學(xué)要素：化學(xué)要素： 強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、

9、尿素、胍、重金屬鹽強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、尿素、胍、重金屬鹽等。等。變性的要素及作用機(jī)制變性的要素及作用機(jī)制 物理性質(zhì)：物理性質(zhì)： 旋光性改動(dòng)，溶解度下降，結(jié)晶才干下降，沉旋光性改動(dòng)，溶解度下降，結(jié)晶才干下降，沉降率升高，粘度升高，光吸收度添加等；降率升高，粘度升高，光吸收度添加等； 化學(xué)性質(zhì)：化學(xué)性質(zhì)： 官能團(tuán)反響性添加，呈色反響加強(qiáng)，易被蛋白官能團(tuán)反響性添加，呈色反響加強(qiáng)，易被蛋白酶水解。酶水解。 生物學(xué)性質(zhì)：生物學(xué)性質(zhì)： 原有生物學(xué)活性喪失，抗原性改動(dòng)。原有生物學(xué)活性喪失，抗原性改動(dòng)。 變性蛋白質(zhì)的性質(zhì)改動(dòng)變性蛋白質(zhì)的性質(zhì)改動(dòng)&蛋白量變性的可逆性復(fù)性：蛋白量變性的可逆性復(fù)性：&am

10、p;某些蛋白量變性后可以在一定的條件下重新構(gòu)某些蛋白量變性后可以在一定的條件下重新構(gòu)成原來(lái)的空間構(gòu)造，并恢復(fù)原來(lái)部分理化特性成原來(lái)的空間構(gòu)造，并恢復(fù)原來(lái)部分理化特性和生物學(xué)活性，這個(gè)過(guò)程稱為蛋白質(zhì)的復(fù)性和生物學(xué)活性，這個(gè)過(guò)程稱為蛋白質(zhì)的復(fù)性renaturation。蛋白量變性的可逆性與復(fù)性蛋白量變性的可逆性與復(fù)性 蛋白質(zhì)在體外變性后，絕大多數(shù)情況下不能復(fù)性；蛋白質(zhì)在體外變性后，絕大多數(shù)情況下不能復(fù)性； 如變性程度淺，蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象未被嚴(yán)重破壞；或蛋如變性程度淺，蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象未被嚴(yán)重破壞；或蛋 白質(zhì)具有特殊的分子構(gòu)造白質(zhì)具有特殊的分子構(gòu)造,并經(jīng)特殊處置那么可以復(fù)性。并經(jīng)特殊處置那么可以復(fù)性

11、。核糖核酸酶的變性與復(fù)性核糖核酸酶的變性與復(fù)性去除變性劑去除變性劑并緩慢氧化并緩慢氧化天然構(gòu)象天然構(gòu)象尿素，尿素，- -巰基乙?guī)€基乙醇醇變性形狀變性形狀蛋白量變性的可逆性與復(fù)性蛋白量變性的可逆性與復(fù)性 可逆變性：可逆變性： 變性條件除去后仍可恢復(fù)天然形狀的變變性條件除去后仍可恢復(fù)天然形狀的變性。性。 不可逆變性：不可逆變性： 變性條件除去后不能恢復(fù)天然形狀的變性。變性條件除去后不能恢復(fù)天然形狀的變性。蛋白質(zhì)的熱變性與凝固作用蛋白質(zhì)的熱變性與凝固作用1、熱變性、熱變性 熱變性的定義熱變性的定義 熱變性三個(gè)階段熱變性三個(gè)階段 影響熱變性的要素影響熱變性的要素: 溫度、砂糖、溫度、砂糖、H+濃度、蛋

12、白質(zhì)含水量、濃度、蛋白質(zhì)含水量、電解質(zhì)；電解質(zhì)；蛋白質(zhì)的熱變性與凝固作用蛋白質(zhì)的熱變性與凝固作用2、蛋白質(zhì)的凝固作用、蛋白質(zhì)的凝固作用 天然蛋白量變性后，天然蛋白量變性后，變性蛋白質(zhì)分子相互凝變性蛋白質(zhì)分子相互凝集或相互交叉纏繞在一集或相互交叉纏繞在一同的景象成為蛋白質(zhì)的同的景象成為蛋白質(zhì)的凝固凝固coagulation 。凝固作用分兩個(gè)階段：凝固作用分兩個(gè)階段： 首先是變性；首先是變性； 其次失去規(guī)律性的肽鏈聚集纏繞在一同而其次失去規(guī)律性的肽鏈聚集纏繞在一同而凝固或結(jié)絮凝固或結(jié)絮; ;蛋白量變性的運(yùn)用蛋白量變性的運(yùn)用F 實(shí)際上：實(shí)際上：F 研討蛋白質(zhì)分子構(gòu)造與功能研討蛋白質(zhì)分子構(gòu)造與功能,分

13、子量測(cè)定分子量測(cè)定,亞單位拆分；亞單位拆分；F 消費(fèi)生活中有利的一面：消費(fèi)生活中有利的一面：F 食品加工，消毒滅菌等；食品加工，消毒滅菌等；F 非蛋白生物物質(zhì)提取純化，終止酶促反響；非蛋白生物物質(zhì)提取純化，終止酶促反響；F 消費(fèi)生活中不利的一面：消費(fèi)生活中不利的一面：F 活性蛋白制品酶、抗體的分別提取和保管；活性蛋白制品酶、抗體的分別提取和保管；&外加一些要素去除蛋白質(zhì)膠體的穩(wěn)定要素后，使蛋外加一些要素去除蛋白質(zhì)膠體的穩(wěn)定要素后，使蛋白質(zhì)分子相互聚集而從溶液中析出的景象稱為沉淀白質(zhì)分子相互聚集而從溶液中析出的景象稱為沉淀precipitationprecipitation。1. Wha

14、ts precipitation of protein?|變性后的蛋白質(zhì)由于疏水變性后的蛋白質(zhì)由于疏水基團(tuán)的暴露而易于沉淀，基團(tuán)的暴露而易于沉淀，但沉淀的蛋白質(zhì)不一定都但沉淀的蛋白質(zhì)不一定都是變性后的蛋白質(zhì)。是變性后的蛋白質(zhì)。四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用2.沉淀種類：可逆與不可逆沉淀種類：可逆與不可逆四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用3.沉淀方法：沉淀方法： 沉淀后蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方沉淀后蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法法 沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法2.沉淀種類：可逆與不可逆沉淀種類：可逆與不可逆四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋

15、白質(zhì)的沉淀作用3.沉淀方法：沉淀方法： 沉淀后蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方沉淀后蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法法1 1鹽析中性鹽沉淀法鹽析中性鹽沉淀法2 2有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法3 3酸沉淀法酸沉淀法1鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀& 鹽溶作用鹽溶作用& 鹽析作用鹽析作用Whats salt precipitation of protein? 蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法1鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀& 定義：在蛋白質(zhì)溶液中參與大量中性鹽，以定義：在蛋白質(zhì)溶液中參與大量中性鹽，以破壞蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)，使蛋白質(zhì)從溶液中破壞蛋白質(zhì)

16、的膠體性質(zhì)，使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀析出，稱為鹽析沉淀析出，稱為鹽析salt precipitation。& 作用機(jī)制作用機(jī)制:& 中和電荷的同時(shí)破壞水化膜中和電荷的同時(shí)破壞水化膜;Whats salt precipitation of protein? 蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法|常用的中性鹽：硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等。常用的中性鹽：硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等。|鹽析時(shí)，鹽析時(shí)，pHpH在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)處效果最好。在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)處效果最好。|鹽析沉淀蛋白質(zhì)通常不會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性。鹽析沉淀蛋白質(zhì)通常不會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性。|優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)|鹽析運(yùn)用舉

17、例鹽析運(yùn)用舉例1鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀 蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法& 分段鹽析：分段鹽析：& 半飽和硫酸銨溶液可沉淀分子量較半飽和硫酸銨溶液可沉淀分子量較大的血漿球蛋白大的血漿球蛋白, ,而飽和硫酸銨溶液可沉而飽和硫酸銨溶液可沉淀分子量較小的血漿清蛋白。因此淀分子量較小的血漿清蛋白。因此, ,運(yùn)用運(yùn)用不同濃度的硫酸銨溶液就可將分子量不不同濃度的硫酸銨溶液就可將分子量不同的蛋白質(zhì)進(jìn)展初步分別。同的蛋白質(zhì)進(jìn)展初步分別。1鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀凡能與水以恣意比例混合的有機(jī)溶劑，如乙凡能與水以恣意比例混合的有機(jī)溶劑，如乙醇、甲醇、丙酮等

18、，均可用于沉淀蛋白質(zhì)。醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白質(zhì)。沉淀原理：沉淀原理： 脫水作用脫水作用破壞水化膜；破壞水化膜； 使水的介電常數(shù)降低，蛋白質(zhì)溶解度使水的介電常數(shù)降低，蛋白質(zhì)溶解度降低。降低。2有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法 蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法& 處置條件：處置條件： 低溫操作；低溫操作；& 沉淀完全后盡快分別；沉淀完全后盡快分別；2有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法 蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法& 機(jī)制：破壞電荷，等電點(diǎn)沉淀。機(jī)制：破壞電荷，等電點(diǎn)沉淀。3酸沉淀法酸沉淀法1 1重金屬鹽沉

19、淀法重金屬鹽沉淀法2 2生物堿試劑沉淀法除蛋白作用生物堿試劑沉淀法除蛋白作用3 3熱凝固沉淀法熱凝固沉淀法4 4抗體對(duì)抗原蛋白質(zhì)的沉淀抗體對(duì)抗原蛋白質(zhì)的沉淀3.沉淀方法：沉淀方法： 沉淀后蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方沉淀后蛋白質(zhì)仍能堅(jiān)持生物活性的沉淀方法法 沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用沉降的概念沉降的概念沉降速率：沉降速率：v=dx/dtv=dx/dt沉降常數(shù)與單位沉降常數(shù)與單位運(yùn)用：運(yùn)用： 沉降速度法測(cè)定分子量的原理；沉降速度法測(cè)定分子量的原理； 梯度離心分別蛋白質(zhì)氯化銫；梯度離心分別蛋白質(zhì)氯化銫；五、蛋白質(zhì)的

20、沉降作用五、蛋白質(zhì)的沉降作用六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響1. 雙縮脲反響雙縮脲反響2. 茚三酮反響茚三酮反響3. 考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán)G2504. 福林酚試劑反響福林酚試劑反響5. 黃色反響黃色反響-芳香族氨基酸的特有反響芳香族氨基酸的特有反響6. 米倫氏反響米倫氏反響酪氨酸的特有反響酪氨酸的特有反響7. 乙醛酸反響乙醛酸反響色氨酸的特有反響色氨酸的特有反響8. 坂口反響坂口反響精氨酸特有的反響精氨酸特有的反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響1. 雙縮脲反響雙縮脲反響 兩分子雙縮脲與堿性硫酸銅作用，生成粉紅色復(fù)合物兩分子雙縮脲與堿性硫酸銅作用，生成粉紅色復(fù)合物 含有兩個(gè)或兩

21、個(gè)以上肽鍵的化合物，能發(fā)生同樣反響含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物，能發(fā)生同樣反響 肽鍵的反響，肽鍵越多顏色越深，粉紅，紫紅，藍(lán)紫肽鍵的反響，肽鍵越多顏色越深，粉紅，紫紅，藍(lán)紫 受蛋白質(zhì)特異性影響小受蛋白質(zhì)特異性影響小 蛋白質(zhì)定量測(cè)定；測(cè)定蛋白質(zhì)水解程度蛋白質(zhì)定量測(cè)定；測(cè)定蛋白質(zhì)水解程度六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響2. 茚三酮反響茚三酮反響 靈敏度差。靈敏度差。3.考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán)G-250本身為棕色，與蛋白質(zhì)反響呈藍(lán)色本身為棕色，與蛋白質(zhì)反響呈藍(lán)色與蛋白的親和力強(qiáng)，靈敏度高與蛋白的親和力強(qiáng)，靈敏度高1-1000微克微克/毫升毫升六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響4. 福林

22、酚試劑反響福林酚試劑反響酪氨酸、色氨酸的反響復(fù)原反響酪氨酸、色氨酸的反響復(fù)原反響福林試劑：磷鉬酸福林試劑：磷鉬酸-磷鎢酸磷鎢酸與雙縮脲法結(jié)合與雙縮脲法結(jié)合-Lowry法法在堿性條件下，蛋白質(zhì)與硫酸銅發(fā)生反響在堿性條件下，蛋白質(zhì)與硫酸銅發(fā)生反響蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物，將福林試劑復(fù)原，產(chǎn)生磷銅絡(luò)合物，將福林試劑復(fù)原，產(chǎn)生磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物靈敏度提高靈敏度提高100倍倍六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響5. 黃色反響黃色反響-芳香族氨基酸的特有反響芳香族氨基酸的特有反響濃硝酸與酪氨酸、色氨酸的反響濃硝酸與酪氨酸、色氨酸的反響生成黃色化合物生成黃色化合物指甲、皮膚、毛發(fā)指甲、

23、皮膚、毛發(fā)6. 米倫氏反響米倫氏反響酪氨酸的特有反響酪氨酸的特有反響酪氨酸的顯色反響酚羥基反響酪氨酸的顯色反響酚羥基反響米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物酸汞的混合物蛋白溶液中，參與米倫試劑，產(chǎn)生白色沉蛋白溶液中，參與米倫試劑，產(chǎn)生白色沉淀，加熱后變成紅色淀，加熱后變成紅色六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響7. 乙醛酸反響乙醛酸反響色氨酸的特有反響色氨酸的特有反響在蛋白質(zhì)溶液中參與在蛋白質(zhì)溶液中參與HCOCOOH，將濃硫，將濃硫酸沿管壁緩慢參與，不使相混，在液酸沿管壁緩慢參與，不使相混，在液面交界處，即有紫色環(huán)構(gòu)成面交界處，即有紫色環(huán)構(gòu)成

24、色氨酸的反響吲哚環(huán)的反響色氨酸的反響吲哚環(huán)的反響鑒定蛋白質(zhì)中能否含有色氨酸鑒定蛋白質(zhì)中能否含有色氨酸明膠中不含色氨酸明膠中不含色氨酸六、蛋白質(zhì)的顏色反響六、蛋白質(zhì)的顏色反響8. 坂口反響坂口反響精氨酸特有的反響精氨酸特有的反響精氨酸的反響胍基的反響精氨酸的反響胍基的反響精氨酸與精氨酸與-萘酚在堿性次氯酸鈉或次溴酸萘酚在堿性次氯酸鈉或次溴酸鈉溶液中發(fā)生反響，產(chǎn)生紅色產(chǎn)物鈉溶液中發(fā)生反響，產(chǎn)生紅色產(chǎn)物鑒定蛋白質(zhì)中能否含有精氨酸鑒定蛋白質(zhì)中能否含有精氨酸定量測(cè)定精氨酸定量測(cè)定精氨酸七、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)七、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)y大部分蛋白質(zhì)均含有帶芳香環(huán)的苯丙氨酸、大部分蛋白質(zhì)均含有帶芳香環(huán)的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。酪氨酸和色氨酸。y這三種氨基酸在這三種氨基酸在280nm 280nm 附近有最大吸收。附近有最大吸收。因此，大多數(shù)蛋白質(zhì)在因此，大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm 280nm 附近顯示強(qiáng)附近顯示強(qiáng)的吸收?？梢詫?duì)蛋白質(zhì)進(jìn)展定性和定量檢的吸收。可以對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)展定性和定量檢測(cè)。測(cè)。 y蛋白質(zhì)濃