賁門腺癌P170蛋白表達的研究

1、賁門腺癌P170蛋白表達的研究 作者：彭學宏，陳暖，許建衡，林靜華，焦曉陽 【關鍵詞】 賁門腫瘤 摘要 目的:研究并探討P170蛋白在賁門腺癌組織中的表達及其意義。方法：用流式細胞術檢測55例賁門腺癌患者癌組織和距離腫瘤5 cm以上癌旁正常組織P170。結果：55例賁門腺癌組織P170陽性表達率為50.9%,癌旁正常組織未見P170表達，兩者差別有統(tǒng)計意義。結論：賁門腺癌組織中具有多藥耐藥性,檢測癌組織P170表達水平對化療效果有一定意義。關鍵詞 賁門腫瘤；藥物耐受性；基因表達；流動血細胞計數(shù)Study on P170 Protein Expression in Cardiac Adenoca

2、rc InomaAbstract:Objective To study the expression and signicance of P170 protein in cardiac adenocarcinoma.Methods The expression of P170 protein in 55 cases of cardiac adenocarcinoma was detected by flow cytometry.Results The positive expression rate of P170 protein was 50.9% in 55 cases of cardia

3、c cancer tissue.Normaltissue near cancer has no positive expression of P170 protein.There was an obvious difference between normal and cancer tissue.Conclusion There was multiple drug tolerlance in cardiac adenocarcinoma,detection of P170 protein expression in cancer tissue had significance in evalu

4、ation of chemotherapy.Key words：Cardiac neoplasms；Drug tolerlance；Gene expression；Flow cytometry耐藥現(xiàn)象是腫瘤化療所面臨的最常見和最棘手的問題，其結果是腫瘤病人對化療無效，降低病人的生存期。多藥耐藥性（MDR）是指抗某種細胞毒藥的耐藥細胞對許多結構上無關和作用機制上不同的其他細胞毒藥物產生交叉耐藥。產生MDR的分子基礎是人的mdr1基因高表達引起P170蛋白表達增強，本文應用流式細胞術檢測P170蛋白，研究并探討mdr1基因編碼的蛋白P170在賁門腺癌組織中的表達及其意義。1材料與方法1.1臨床資料

5、 我院近2年住院手術的賁門腺癌患者55例，男47例，女8例。年齡47歲76歲。入選標準：術前經胃鏡病理活檢確診為賁門腺癌，術前未接受化療，腫瘤病灶起源于賁門，性別、年齡不限。術中取賁門癌組織及距離腫瘤5 cm以上癌旁正常組織各一塊，采用流式細胞術，檢測P170蛋白。1.2試劑 鼠抗人MDR產物，（P170）單克隆抗體（Immunotech公司，法國），F(xiàn)ITC標記兔抗鼠Ig（Dako公司，丹麥）。1.3流式細胞儀檢測方法1.3.1實體瘤組織單細胞懸液制備 術中取新鮮賁門癌及距離腫瘤5 cm以上正常癌旁組織0.2 g1.0 g，以生理鹽水洗去血跡，至于重疊的100目銅網(wǎng)和260目尼龍網(wǎng)上，以眼科

6、剪剪成1 mm3碎塊，在以眼科鑷夾持組織在銅網(wǎng)上輕搓，邊挫邊以磷酸鹽緩沖液（PBS）將搓下的細胞洗入網(wǎng)下的平皿內，直至組織搓完。將收集的細胞懸液以260尼龍網(wǎng)過濾一次去除組織碎塊，收入10 ml試管內離心（1 500 r/min，10 min），棄去上清再以PBS漂洗，同前述方法離心2次，均棄上清，備用。1.3.2免疫標記 標記前用PBS漂洗離心1次（1 500 r/min，10 min）以去除固定劑，再將每分懸液分兩管，其一加20 l P170工作液（一抗），其二加20 l羊抗鼠IgG（一抗）工作液，室溫下20 min，離心（2 000 r/min，5 min），除上清后加1 ml PBS漂

7、洗離心2次，再向上兩管中各加20 l羊抗鼠IgGFITC、室溫避光30 min，離心后去除上清以除去未結合的熒光抗體，以PBS漂洗離心2次，均棄上清，最后加500 l PBS待檢。取少許細胞液圖片，在熒光鏡下可見P170陽性細胞光點位于細胞膜上。1.3.3流式細胞儀檢測 上機前以標準熒光微球調整儀器使變異系數(shù)在2.0以內，上機后收集2萬個細胞，熒光強度以對數(shù)放大，光散射數(shù)據(jù)存軟盤，測試后在計算機上用Cell Quest Plot軟件分析數(shù)據(jù)，由打印機打印結果，包括點圖和組方圖。MDR1表達產物P170膜糖蛋白含量以P170陽性細胞百分率表示（細胞膜含P170糖蛋白的細胞稱為P170陽性細胞），

8、其計算方法：P170陽性細胞P170陽性細胞數(shù)/（P170陰性P170陽性細胞數(shù)）×100非特異結合細胞數(shù)/所收集細胞數(shù)×100。陽性表達程度：低表達P170值<10%,中度表達P170值為1030，高表達P170值>30%。1.4統(tǒng)計2檢驗。2結果P170蛋白在賁門腺癌組織中的具體表達情況如表1。表1 P170在賁門腺癌組織的表達（略）距離腫瘤5 cm以上癌旁正常組織，55例標本均未見P170表達。3討論耐藥現(xiàn)象是化療所面臨的最常見和最棘手的問題，其結果是化療對腫瘤病人無效或療效降低。MDR即腫瘤細胞對許多常見化療藥物產生抗藥性和交叉抗藥的能力

9、。產生MDR的分子基礎是人的mdr1基因引起P170蛋白表達增強1。P170是一種分子量為170KD的糖蛋白，已證實其表達與腫瘤細胞的耐藥程度正相關1，2。這種蛋白嵌插在細胞的漿膜上，作為一種能量依賴的藥物流出泵，通過ATP提供能量，與化療藥物結合，將進入細胞內的藥物泵出細胞外，從而使藥物在細胞內濃度不斷下降，導致細胞毒性作用減弱或喪失而產生耐藥現(xiàn)象。與MDR相關的藥物稱之為MDR藥物，一般包括植物堿類、抗生素類、烷化劑類、激素類等一些分子量較大的親脂類化合物。對P170高表達者應避開MDR藥物。有研究表明，P170蛋白在腎、腎上腺、肝、胃、結腸的上皮細胞表面有不同程度表達，來源于上述器官的惡

10、性腫瘤P170蛋白表達均有增高35，提示組織器官發(fā)生腫瘤后，腫瘤細胞所具有的內在抗藥性與P170蛋白表達有關。本文研究發(fā)現(xiàn)賁門腺癌組織有P170蛋白表達，陽性表達率50.9%，癌旁正常組織未見P170表達，兩者差別有統(tǒng)計意義（P<0.05）。提示賁門腺癌總體化療效果不令人滿意的原因之一與賁門腺癌所具有的內在抗藥性有關。本組資料顯示P170蛋白與賁門腺癌患者的性別、年齡、臨床分期、淋巴結轉移無關（P>0.05），提示P170蛋白作為一種多藥耐藥基因與賁門癌生物學行為無關。參考文獻：1Fuji H,Tanjgawa N,Muraoda R,et al.Detection

11、 of Pglycoprotein by flow cytometry.Anticancer Res,1993,13:2171.2Sukbitz KM.Pglycoprotein and multidrug resistance.Am J Clin Pathol,1990,93:156.3Pavelic ZP,Reising J,Pavelic,et al.Detection of Pglycoprotein with four monoclonal antibodies in normal and tumor or tissues.ArchOtolaryngol Head Neck Surg,1993,119:753.4Goldstein LJ,Galski H,Fojo AT,et al.Expression of a multiddrug resistance gene in human cancer