實驗五酵母菌的形態(tài)觀察、死活細胞的鑒別及顯微鏡直接.

1、酵母菌的形態(tài)觀察、死活細胞鑒別及顯微鏡直接計數(shù)法一、實驗?zāi)康?、觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生璉方式，學(xué)習區(qū)分酵母菌死活 細胞的實驗方法.2、明確血細胞計數(shù)板的原理，掌握使用血細胞計數(shù)板進行微 生物計數(shù)的方法。二、實驗原理酵母菌是不運動的單細胞真核微生物，其大小通常比常見 細菌大幾倍甚至十幾倍。大多酵母菌以出芽方式進行無性繁殖,有的分裂繁殖，有性繁殖是通過接合產(chǎn)生子囊葩子。本實驗是通 過美藍染液水浸片來觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖方式.美藍是一種無垂性的染料,它的氧化型呈蘭色，還原型無色， 用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用， 細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍由蘭色的氧化型變?yōu)闊o

2、色 的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細胞是無色的，而死細 胞或代謝作用微弱的衰老細胞則呈蘭色或淡蘭色，借此即可對酵 母菌的死細胞和活 細胞進行鑒別.顯微錢直接計如是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別 的具有特定面積和容積的載玻片上（又稱計菌器），于顯微鏡下 直接計數(shù)的一種簡便.快速.直觀的方法。目前國內(nèi)常用的計菌 器有：血細胞計數(shù)板、Peteroff-Hauser計菌器以及Hawksley計 菌器等，它們都可用于酵母、細菌、霉菌葩子等懸液的計數(shù).利用血細胞計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)是一種常用的微生 物計數(shù)方法。該計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu) 成三個平臺，中間較寬的平臺又被一短橫槽

3、隔成兩半，每一邊 的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為幾個大方格， 中間的大方格即為計數(shù)室。血細胞計數(shù)板構(gòu)造如圖1,計數(shù)室的 刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中方格，而 每個中方格又分成16個小方格，另一種是一個大方格分成16個 中方格，而每個中方格又分成25個小方格，但無論是哪一種規(guī) 格的計數(shù)板，每一個大方格中的小方格400個，每一個大方格 邊長為1毫米，則每一個大方格的面積為linm2,蓋上蓋玻片后， 蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1毫米，所以計數(shù)室的容積為 0. ImnP （萬分之一毫升）。H；貞Q ( .1口 iTyXB-K-25壘SHANGHAITnipZA計數(shù)板

4、計»室孟JR片Bc血球計數(shù)板的構(gòu)造DA. 廁觀 B.側(cè)面觀 C.畝大后的網(wǎng)格 D.啟大后的計數(shù)室tn Haiti放大G的方格網(wǎng)計ft電（d）aAJG的計數(shù)家 血球汁數(shù)板的構(gòu)造 : iiaiiiiiltiHi*MM* iiaiHitiiiiiiiHHa' iinwiiiiiitmBBB iiiminiiiarHHBB計數(shù)時，通常數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方 格的平均值，再乘上25或16,就得出一個大方格中的總菌數(shù)， 然后再換算成毫升菌液中的總菌數(shù)。設(shè)五個中方格中總菌數(shù)A,菌液稀釋倍數(shù)B,如來是25個中 方格的計數(shù)板，則1ml 菌液中 的總菌數(shù)=35 X25X104 X

5、 B=50000AB同理，如果是16個中方格的計數(shù)板，則1ml 菌液中的總菌數(shù)=34 X16X104 X B=50000AB三、實驗器材:1、菌種：釀酒酵母2.儀器或其他用品：血細胞計數(shù)板，顯微鏡，蓋玻 片，載玻片等3. 0.1%美藍染色液等四、實驗內(nèi)容:1美藍浸片觀察在載玻片中央加一滴0.1%的美藍染色液，然后用 接科環(huán)取少量酵母菌于染液中，混合均勻；用議子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然 后慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上。將玻片放置 約三分鐘后，用顯微鏡觀察酵母的形態(tài)和出芽情況， 并判斷細胞的死活。2、顯微鏡計數(shù) 、菌懸液的制備 、鏡檢計數(shù)室 、加樣品將血細胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用滴管將剛混勻 的菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛 細滲透作用自動