紫外分光光度法測定阿霉素聚乳酸微球的含量

1、第 28卷 , 第 4期 光譜實驗室 Vol . 28, No . 4 2011年 7月 Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor atory July , 2011紫外分光光度法測定阿霉素聚乳酸微球的含量吳景梅 邰燕芳秦英月(蚌埠學(xué)院應(yīng)用化學(xué)與環(huán)境工程系安徽省蚌埠市曹山路 1866號 233030摘要 采用復(fù) 乳 -溶劑揮 發(fā)法制備 阿霉素聚乳 酸微球 , 通過掃描 電鏡觀察微 球的形態(tài) , 采用 紫外分 光 光度 法測 定微 球中 阿霉 素的 含量。 結(jié)果 表明 , 所 制備 的阿 霉素 聚乳 酸微 球外 形 圓整 , 阿 霉素 溶 液在 1. 7

2、0 34. 1 g /mL 濃 度范 圍 內(nèi)線 性 良 好 , 校 準 曲線 回 歸 方 程為 A =0. 0422C +0. 1845, 相 關(guān) 系數(shù) r 為 0. 9997, 平均回收率為 99. 5%(RSD =0. 50% 。關(guān)鍵詞 乳化溶劑揮發(fā)法 ; 阿霉素 ; 聚乳酸微球 ; 紫外分光光度法中圖分類號 :O 657. 32文獻標識碼 :B 文章編號 :1004-8138(2011 04-1940-031引言阿霉素 (Adriamycin, ADM 屬蒽環(huán)類抗生素 , 是當今公認的強效廣譜抗癌藥物 , 具有較強的細 胞毒性作用 , 臨床上廣泛應(yīng)用于白血病和各種惡性腫瘤的治療 1, 但

3、該藥具有較強的心臟毒性及骨 髓抑制作用 , 在一定程度上限制了其臨床應(yīng)用。如將阿霉素制備成具有緩釋作用的微球制劑 , 理論 上可減輕阿霉素對機體的心臟毒性及骨髓抑制作用 , 提高化療效果 2。生物可降解材料聚乳酸 (Polylactide, PLA 因其優(yōu)良的生物相容性及生物可降解性 , 被廣泛地用于藥物緩 /控釋系統(tǒng) 3。本 文采用復(fù)乳 -溶劑揮發(fā)法 4制備了阿霉素聚乳酸微球 , 考察了微球的形態(tài) , 并用紫外分光光度法測 定了載藥微球中阿霉素的含量。2實驗部分2. 1試劑與儀器聚乳酸 (PLA, 分子量 30000, 濟南岱罡生物科技有限公司 ; 阿霉素 (浙江海正藥業(yè)有限公司 , 國藥準

4、字 :H 33021980 ; 明膠、 Tw een -60、 二氯甲烷均為分析純 ; 0. 9%生理鹽水。 實驗用水為去離子 水。FA 2004型 電子天 平 (上海舜 宇恒平 公司 ; 79-1型 恒溫 磁力攪 拌器 (金 壇中大 儀器 廠 ; UV 1102型紫外分光光度儀 (上海天美公司 ; 0406-1型離心沉淀器 (上海醫(yī)療器械集 團公司 ; S -450掃描電子顯微鏡 (日本日立公司 。2. 2實驗方法將 0. 5g 聚乳酸溶解于 5mL 二氯甲烷中 , 加入 1mL 5mg /mL 阿霉素水溶液 , 高速攪拌 10min 得到初乳液 , 室溫下倒入含 0. 15%Tw een-

5、60的 1%明膠溶液 100m L 中 , 高速攪拌乳化 20min 得復(fù)安徽省優(yōu)秀人才基金項目 (No:2008jqw 1159作者簡介 :吳景梅 (1974 , 女 , 山東省菏澤市人 , 講師 , 碩士 , 主要從事生物醫(yī)用降解材料研究工作。乳液 , 然后低速攪拌 3h 使二氯甲烷揮發(fā)完全 , 于 1500r /min 轉(zhuǎn)速下離心分離 3min , 收集微球 , 用蒸 餾水沖洗 , 常溫干燥得粉末狀桔紅色固體微球。用掃描電鏡分析微球形態(tài) , 用紫外分光光度法測定 微球中阿霉素的含量。3結(jié)果與討論3. 1 微球的形態(tài)及表面特性圖 1阿霉素聚乳酸微球的掃描電鏡 a (×500 ,

6、b (×1000 從圖 1可以看出 , 阿霉素聚乳酸微球呈球形 , 有少量空白微球 , 可能是攪拌速度過快所致。 微球 表面粗糙 , 有較小的凹凸現(xiàn)象 , 這可能是溶劑揮發(fā)過程所致 , 這也將成為內(nèi)部藥物與外相溶液自由 “ 交換” 的通道。 并且由于聚乳酸的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度較低 , 熔點較低 , 微球在局部放大時 , 由于真空條 件下電子束能量很高容易使微球變形 5, 所以對于聚乳酸微球放大倍數(shù)一般不要超過 5000倍 , 以 防止聚合物的融化變形。在藥物釋放過程中 , 除了隨著聚乳酸的降解藥物釋放以外 , 這些小的凹凸 也有助于藥物分子從微球本體逃逸到體液中。3. 2測定波長的選擇以

7、阿霉素原藥制劑為對照品 , 取阿霉素對照品的生理鹽水溶液 (6. 82 g/mL , 以生理鹽水為空 白 , 在 200 400nm 波長 范 圍內(nèi) 作 紫外 掃 描 , 阿 霉 素 在波 長 232. 5nm 處有 最 大 吸收 , 故 選 定 232. 5nm 為測定波長。圖 2阿霉素濃度與吸光度的關(guān)系曲線 3. 3校準曲線的繪制準確稱取干燥恒重 的阿霉素對照品 3. 41mg置 于 小燒 杯 中 , 加 20mL 生 理鹽 水 溶 解 后 轉(zhuǎn)入100mL 容量瓶中 , 用生理鹽水稀釋定容 , 配制濃度為 34. 1 g/mL 的標準液。分別取 0. 5、 1. 0、 1. 5、2. 0、

8、 3. 0、 4. 0、 5. 0、 10. 0mL 標準溶液 , 以生理鹽水定容至 10mL , 配成系列濃度。在 232. 5nm 波長處以 生 理 鹽 水 為 空 白 , 測 定 吸 收 度 值 (A , 繪制校準曲 線 (圖 2 , 并 計 算 得 回 歸 方 程A =0. 0422C +0. 1845(r =0. 9997, n =8 , 線性范圍為 1. 70 34. 1 g /m L 。3. 4穩(wěn)定性實驗取濃度為 6. 82 g /m L 的阿霉素對照品生理鹽水溶液 , 室溫下避光放置 , 分別于 0、1、 2、 3、 4、 5h , 1941第 4期 吳景梅等 :紫外分光光度法

9、測定阿霉素聚乳酸微球的含量3. 5回收率實驗取阿霉素含量為 5. 96 g /m L 的阿霉素聚乳酸微球樣品溶液 3份 , 分別準確加入濃度為 8. 52、 17. 05、 25. 58 g /mL 的標準溶液 , 測定吸光度 , 根據(jù)校準曲線 (圖 2 , 計算實測結(jié)果 , 根據(jù)回收率 = 100%·(測得量 -樣品原含量 /加標量計算回收率 , 結(jié)果見表 1。 3種濃度的阿霉素溶液的平均回 收率為 99. 5%, 相對平均偏差 RSD 為 0. 50%。表 1阿霉素的回收率實 驗 (n =3樣品原含量 ( g /mL 加標量( g /mL 測得量( g /mL 回收率(%平均回收

10、率(%相對偏差(%相對平均偏差 (%5. 968. 5214. 3898. 80. 705. 9617. 0523. 04100. 299. 50. 700. 505. 9625. 5831. 3899. 40. 103. 6阿霉素聚乳酸微球中阿霉素含量的測定稱取阿霉素聚乳酸微球樣品 3份分別置于帶塞具的刻度試管中 , 加入二氯甲烷溶解聚乳酸 , 再 加入生理鹽水振蕩 30min, 取水層在波長 232. 5nm 處測吸光度 , 代入回歸方程 , 計算得微球中阿霉 素含量平均值為 6. 53 g/mg 。4結(jié)論采用復(fù)乳 -溶劑揮發(fā)法制備了阿霉素聚乳酸微球 , 掃描電鏡分析表明所制得的微球外形圓

11、整。 利用紫外分光光度法測定微球中阿霉素的含量 , 突出優(yōu)點是操作簡單易行 , 回收率符合要求 , 重現(xiàn) 性好 , 尤其適應(yīng)微球研制初期反復(fù)大量地進行含量測定的需要 , 具有很高的實用價值 , 亦適用于其 它水溶性藥物聚乳酸微球的載藥量的測定。參考文獻1Dos Santos R A, Takah ashi C S. Anticlastogenic and Antigenotoxic Effects of S elenomethionine on Doxorubicin-Induced Damage in Vitro in Human LymphocytesJ. Food and C hemic

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14、e(Dep ar tment of A pp lied Chemi str y and Env ironmental E ng ineer i ng , Bengbu College , B eng bu , A nhui 233030, P . R . China Abstract Adriamycin polylactic acid microballoon was prepared w ith double emulsion-solvent evaporation technique , and the shape of the microballoon characterized by scanning electron microscopy (SEM . The concentration of adriamycin in the microballon w as analyzed by ultraviolet spectrophotom etry . The results show ed that the micr