核酸分子雜交精彩試題

1、核酸分子雜交試題一.名詞解釋：1. 核酸分子雜交2. DNA 復性3. Southern雜交4. Northern雜交5. 斑點印跡6. 原位雜交二.單項選擇題：1. 在加熱或紫外線照射下，可導致兩條DNA鏈中間的氫鏈斷裂，而核酸分子中所有的共價鍵則不受影響的稱為（）。A. DNA變性 B. DNA 復性 C. DNA 重組 D. DNA 雜交2. DNA變性的本質(zhì)是（）的斷裂。A. 鹽鍵 B. 氫鍵 C. 離子鍵 D. 共價鍵3. 一般影響核酸變性的溫度可選在（）。A. 60 70C B. 70 80C C. 80 90C D. 90 100C4. 在核酸分子雜交時，一般對應(yīng)溫度作圖得到的D

2、NA復性曲線所用的紫外吸收值是（）。A. A260吸收值B. A280吸收值C. A320吸收值D. A360吸收值5. 進行核酸分子雜交時，一般適宜的探針濃度是（ B ）。A. 0.1 卩 0.5 卩 gC.0.5-13 1.5 卩 g6. 雜交時如果使用單鏈核酸探針，隨著溶液中探針濃度的增加，雜交效率也會增加，所以探針長度控制在（ ）。A. 50 300bp B. 20 200bp C.300 400bp D.200 5007. 進行核酸雜交時，一般適宜的復性溫度較Tm值低（）。A.10 CB.15CC.20CD.25C8.寡核酸探針雜交反應(yīng)一般在低于而值（)下進行。A.5 CB.10CC

3、.15CD.25C9.下列哪種試劑能降低核酸雜交的Tm®(B）。A.尿素B.甲酰胺 C.甲醛D乙醇10.在凝膠中核酸變性時，為了使DNA片段在合理的時間內(nèi)從凝膠中移動出來，必須將最長的DNA片段控制在大約（）。A. 1Kb B. 2 Kb C. 3 Kb D. 4 Kb11. 將RNA或 DNA變性后直接點樣于硝酸纖維素膜上，用于基因組中特定基因及其表達的定性及定量研究,稱為（）。文檔大全A.原位雜交B.核酸酶保護實驗C.斑點印跡D.狹縫印跡12. 核酸保持在細胞或組織切片中經(jīng)適當方法處理細胞或組織后，將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為（）。A.原位雜交B.核酸酶保護

4、實驗C. 斑點印跡 D.狹縫印跡13. 在將固定于膜上的 DNA片段與探針進行雜交之前，必須將膜上所有能與DNA吉合的位點全部封閉，稱為（B ）。A.雜交 B.預雜交C.雜交前處理D. Nouthern 印跡雜交14. 進行間期細胞內(nèi)染色體DNA勺原位雜交時，關(guān)鍵是（）。A.細胞的培養(yǎng)B.加固定液C.載波片上的固定D.細胞染色體的制備15. 組織細胞雜交前的預處理的關(guān)鍵是（ C ）。A.降解細胞外蛋白B.降解細胞內(nèi)蛋白C.降解核酸表面蛋白D.降解核酸內(nèi)DNA16. 組織細胞雜交前預處理時，降解核酸表面的蛋白質(zhì)常用的蛋白酶是（）。A.蛋白酶CB.蛋白酶KC.蛋白酶AD.蛋白酶I17. 在進行原位

5、雜交時，RNA探針雜交的時間最好是（）。A. 2 4h B. 4 6h C. 6 8hD. 過夜18. 在核酸雜交中，目前應(yīng)用最為廣泛的一種探針是（A ）。A.基因組DNA探針B.寡核苷酸探針C. cDNA探針 D. RNA探針19. 在Southern印跡雜交中用來標記核酸探針最常用的核素是（）。A. 32P B. 3H C. 35S D. 125I20在下列非核素標記物中，既屬于半抗原，同時也屬于配體的是（）。A.地高辛 B. 生物素 C. 親合素 D. 羅丹明21. 一些標記物可與某種物質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)生化學發(fā)光現(xiàn)象，通過化學發(fā)光可以象核素一樣直接使X線膠片上的乳膠顆粒感光。這些標記物稱為（）。

6、A.半抗原 B.配體 C. 熒光素 D.化學發(fā)光探針22. Sephadex G 50柱析法中，隨著流動相流出的是（）。A.小分子物質(zhì)B. dATPC.大分子探針D. dGTP23. 下列DNA分子的組成中，哪種是核酸變性的最主要的因素（C ）。A. AT B. AG C. GC D. TC24. 在探針的純化時，無水乙醇可以沉淀（）。A. DNA片段B.蛋白質(zhì)分子C. RNA片段D.小分子物質(zhì)25. 待測DNA樣品的電泳分離中，作為分子量標準的入DNA是用（）酶消化的。A. Hind 川 B. Bgll C. ApaI D. BamHI三.多項選擇題：1. 導致DNA變性的常用方法有（）。A

7、.熱變性B. 堿變性 C.酸變性 D.化學試劑變性2.影響核酸雜交的因素有（）。A.核酸分子的濃度和長度B. 溫度C.離子濃度D.核酸分子的復雜性3.核酸分子處于何種情況下，核酸的雙鏈可以完全打開成為單鏈（)A.PH V 3 B. 3v PH< 5C. 5< PH< 10 D. PH > 104. 在雜交液中加入甲酰胺，其目的是（）。A. 在低溫下探針更穩(wěn)定B. 使雜交液為中性C. 能更好的保留非共價結(jié)合的核酸D. 減少核酸雜交的副反應(yīng)5. 為減少非特異性雜交反應(yīng)，在雜交前將非特異性雜交位點進行封閉，常用的封閉物有（B. 復性的非特異性RNAC. 變性的非特異性DNAD

8、. 高分子化合物E. 低分子化合物6. 下列哪些步驟屬于 Southern印跡雜交（ ）。A. 待測核酸樣品的制備B. 待測DNA樣品的電泳分離C. 凝膠中核酸的變性D. Souther n 轉(zhuǎn)膜7. Southern 轉(zhuǎn)膜時常用的膜是（）。A.化學活化膜B. 尼龍膜C. 硝酸纖維素膜 D. 濾紙8. 常用的Southern轉(zhuǎn)膜方法有哪幾種（）。A.硝酸纖維素膜法B.毛細管虹吸印跡法C.電轉(zhuǎn)印法D.真空轉(zhuǎn)移法9. 用于Southern印跡雜交的探針可以是（）。A.純化的DNA片段 B. 純化的RNA片段C.多核苷酸 D. 寡核苷酸片段10. 原位雜交可以用來檢測（）。A. DNA B. RNA

9、 C. cDNA D. RNA和 DNA11. 原位雜交所用的探針可以是（）。A. mRNA B. DNAC. RNAD. cDNA12.Northern印跡雜交中轉(zhuǎn)膜時可米用的方法有（A.毛細管虹吸印跡法B.電轉(zhuǎn)印法C.真空轉(zhuǎn)移法D凝膠分離法13核酸原位雜交包括（）。A.組織細胞的固定B.預雜交C. 雜交 D. 沖洗14.下列哪些屬于核酸原位雜交的常用固定液（）。A. 10%甲醛B. 4%多聚甲醛C.乙醇：冰醋酸（3： 1） D. 戊二醛15. RNA酶保護分析法可用于（）。A. mRNA定量B. mRNA定性C. mRNA末端定位D.確定內(nèi)含子在相應(yīng)基因中16. 核酸酶S1能降解（）。A.

10、 DNA 單鏈 B. DNA雙鏈C. RNA單鏈 D. DNA/RNA雜交雙鏈17. 根據(jù)檢測方法的不同，非核素標記物可分為以下幾類（）。A.半抗原B.配體C.熒光素 D. 化學發(fā)光探針18. 下列物質(zhì)屬于半抗原的是（）。A.親和素 B. 羅丹明 C. 生物素 D. 地高幸19. 核酸分子雜交所用探針采用體外標記法的優(yōu)點是（）。A. 安全系數(shù)高B. 需要活體生物或細胞培養(yǎng)系統(tǒng)C. 探針，核酸分離和純化及儲存很方便D. 體外標記一般比體內(nèi)標記的比放射活性高20. 化學法體外標記核酸探針最常用的是（°°A. 125I B.光敏生物素C. 3H D. 32P21. DNA探針的酶

11、促標記法包括（隨機引物法末端標記法A.缺口平移法B.C. PCR標記法D.22. 探針的純化包括（B. SephadexG-50絲柱離心法A 乙醇沉淀法C.甲醇沉淀法D.23 DNA變性后的理化性質(zhì)的變化有（D.A.粘度降低B.密度增加C.紫外吸收值增加D. 熔點減小24. Southern雜交結(jié)果檢測包括（° °A.放射自顯影 B.比色或化學發(fā)光檢測C.酶切圖譜分析D.凝膠電泳分離25. Southern 雜交在醫(yī)學中的應(yīng)用包括（）。A.酶切圖譜分析B.特定基因定性和定量C.基因突變分析D.限制性片段長度多態(tài)性的分析四. 填空題：1. 核酸分子雜交中，雜交的雙方分別稱為

12、與°2. 核酸分子雜交中已知的核酸序列稱為 °3. 適當?shù)碾娪揪彌_液中，DNA在電場作用下，由負極向正極泳動，分子越大，泳動速度 °4. 當促使變性的因素解除后，兩條DNA又通過堿基互補配對結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為 5. 在DNA的堿基組成中，AT之間是氫鍵，GC之間是氫鍵。6. 鑒別DNA靶分子的雜交稱為 ，鑒別RNA靶分子的雜交稱為 °7. 根據(jù)檢測對象的不同，可將原位雜交分為 和°8. 常用的液相雜交有 和°9. RNA酶保護分析法（RPA°的基本程序包括： 、 °_、和。-32P，末端標記必須使用標記

13、。10. 液相雜交的核酸酶 S1保護分析法可用于 、11. 核酸探針包括： 、和。12. 在用核酸標記的探針，大多數(shù)標記方法需要的是a13. 核酸的體外標記法分為和 。14. 核酸的體外標記法中的酶法最常用的是 和五、簡答題1、DNA變性的常用方法有哪幾種？2、簡述DNA的復性過程。3、一個良好固相支持物應(yīng)具備哪些特性?4、試比較硝酸纖維素膜、尼龍膜和化學活化膜的優(yōu)缺點。5、核酸原位雜交的理想固定液應(yīng)具備哪些特點?6、一種理想標記物應(yīng)具備哪些特性?7、隨機引物法標記 DNA探針有哪些優(yōu)點?六、論述題1、試述核酸分子雜交的原理。2、試述影響核酸分子雜交的因素。3、試述Southern印跡雜交的基

14、本步驟。4、試述Southern印跡的常用方法及原理。5、試述核酸原位雜交的基本過程。6、試述探針的種類及其制備。7、試述切口平移法標記 DNA探針的原理。名詞解釋:SiRNA:利用雙鏈小片段 RNA高效、特異性降解細胞內(nèi)同源mRNA從而阻斷體內(nèi)靶基因表達，使細胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型。Blue/white scree n:藍白斑篩選。即B -半乳糖苷酶基因失活篩選。其原理是：某些質(zhì)粒載體帶有大腸桿菌乳糖操縱子的lacZ '基因，該基因含一段編碼B-半乳糖苷酶氨基末端145個氨基酸a-肽的 DNA片斷，IPTG可誘導此片斷合成，此片斷能與宿主細胞所編碼的缺陷型B-半乳糖苷酶實現(xiàn)基因內(nèi)a-

15、互補，形成完整的B-半乳糖苷酶。該酶能催化指使劑底物X- gal形成藍色菌落。當外源基因插入lacZ '基因中MCS侈克隆位點），laca-肽基因閱讀框架被破壞，細菌內(nèi)將無B-半乳糖苷酶活性，結(jié)果重組克隆呈白色菌落。Kn ock dow n:（基因）敲除。是指對一個結(jié)構(gòu)已知但功能未知的基因，從分子水平上設(shè)計實驗，將基因去除，或用其它 順序相近基因取代，然后從整體觀察實驗動物，推測相應(yīng)基因的功能?；蚯贸梢越K止某一基因的表 達外，還包括引入新基因及引入定點突變，既可以是用突變基因或其它基因敲除相應(yīng)的正常基因，也可以 用正常基因敲除相應(yīng)的突變基因。G-protein :G蛋白。是三聚體

16、 GTP結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白的簡稱，位于質(zhì)膜內(nèi)胞漿的一側(cè)，由a,3, 丫三個亞基組成，By 二聚體通過共價結(jié)合錨定于膜上起穩(wěn)定a亞基的作用，而a亞基本身具有GTP酶活性。G蛋白在信號轉(zhuǎn)導過程中起著分子開關(guān)的作用，當G蛋白a亞基與 GDP吉合，處于關(guān)閉態(tài)；當胞外配體與受體結(jié)合形成復合物時，導致受體胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域與a亞基偶連，并促使a亞基結(jié)合的GDP被 GTP交換而被活化，即處于開啟狀態(tài)，從而傳遞信號。DNA-chip:DNA芯片。指通過微陣列技術(shù)將高密度DNA片斷陣列通過高速機器人或原位合成方式以一定的順序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相表面作為探針，熒光標記的樣品DNA/RNA借助堿基互補作用與探針進行

17、雜交，從而進行大量的基因表達及檢測等方面的研究。Off-target effect:脫靶效應(yīng)。指的是與一個內(nèi)源性基因某一位點并不完全同源的RNA亦能通過抑制翻譯而導致基因表達的靜默。Super gene family:超基因家族。指一個共同的祖先基因通過各種各樣的變異，產(chǎn)生了結(jié)構(gòu)大致相同但功能卻不盡相似的一大 批基因，這一大批基因分屬于不同的基因家族，但可以總稱為一個超基因家族。En viro nment gen etic project :環(huán)境基因工程，指專門鑒定體積暴露在特定環(huán)境下的那些顯示易感或抗性基因的DNA多態(tài)性。Tumor vacci ne:腫瘤疫苗。腫瘤疫苗的本質(zhì)是將某一抗原組份

18、作用于生物體，從而激發(fā)該機體對該抗原或抗原載體的免疫 保護，這種抗原形式或抗原的載體形式即是疫苗。腫瘤疫苗的形式有細胞性疫苗和可溶性抗原疫苗兩大類。細胞疫苗是將腫瘤細胞進行某些處理滅活后直接作用于機體?？扇苄钥乖蚨嚯囊呙鐒t是在體外通過基因 工程的方法制備出已知某腫瘤的抗原成分，與不同的佐劑聯(lián)合應(yīng)用達到免疫激發(fā)的目的。問答題：1. 請從“一條基因一條蛋白”到“一條蛋白一條基因”說說你對基因概念的變化的理解。2. 基因診斷的優(yōu)缺點及發(fā)展前景。3. 逆轉(zhuǎn)錄酶在RNA病毒感染宿主及自身復制中的意義。4. PCR與細胞內(nèi)DNA復制的異同點。（不少于5點）5. 試從腫瘤多基因，多機制說明腫瘤的基因篩選。

19、答：1.基因概念演變過程如下：基因一次是1909年丹麥生物學家 W.Johannsen首先使用，以代替在此之前所用的“遺傳因子”這個 術(shù)語。在開始使用“基因” 一詞時，基因是遺傳性狀的符號，并未設(shè)計到基因的物質(zhì)概念。1926 年Morgan發(fā)表了“基因論”，指出基因?qū)嵲谔囟ㄈ旧w上，而且是呈直線排列在染色體上的遺傳顆粒，位于同源染色體的同一位置的相對基因叫做等位基因；基因是世代相傳的，基因決定了遺傳性狀的 表達。20 世紀40年代，Bendle和Tatum用X射線照射鏈孢霉菌使其產(chǎn)生不同的突變體，發(fā)現(xiàn)突變可以影響 代謝反應(yīng)，故認為突變可致催化代謝的酶發(fā)生缺陷，因而提出了“一個基因，一個酶”的學

20、說。20 世紀50年代初，Benzer在研究T4噬菌體的一群緊密連鎖的突變?nèi)簳r發(fā)現(xiàn)了順反效應(yīng)，從而提出 了“順反子”概念。一個順反子即是一個基因。但后來“順反子”多用于指RNA分子中對應(yīng)于一個結(jié)構(gòu)基因的序列，現(xiàn)代分子生物學中所稱單順反子RNA和多順反子RNA,即是由此而來。20 世紀60年代，遺傳密碼的破譯使人們對基因表達的機制有了更多的了解，認識到基因是基因組中 的一個區(qū)域（一段 DNA序列），其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是編碼一條多肽鏈的RNA分子或者是一個有獨力功能的RNA分子（tRNA或 rRNA）。20 世紀90年代以來，對基因的結(jié)構(gòu)與功能的研究不斷深入，許多基因的核苷酸序列被測定，對基因 的認識更加

21、豐富，逐漸形成了基因的現(xiàn)代概念?；虻默F(xiàn)代分子生物學概念是：基因是核酸分子中貯存遺 傳信息的遺傳單位，是 RNA和蛋白質(zhì)相關(guān)遺傳信息的基本存在形式，是指貯存RNA序列信息和有功能蛋白質(zhì)多肽鏈序列信息、以及表達這些信息所必需的全部核苷酸序列。大部分生物中構(gòu)成基因的核苷酸物質(zhì)是 DNA少數(shù)生物（如 RNA病毒）中是 RNA.題中“一條基因一條蛋白”反應(yīng)的是20世紀40年代“一個基因，一個酶”的學說，而“一條蛋白一條基因”反應(yīng)的是基因的現(xiàn)代概念。兩種學說都是正確的，體現(xiàn)了對基因概念的理解的不斷深化。2.基因診斷是指采用分子生物學的技術(shù)方法來分析受檢者的某一特定基因的結(jié)構(gòu)（DNA水平）或功能（RNA水

22、平）是否異常，以此來對相應(yīng)的疾病進行診斷。基因診斷有時也稱為分子診斷或 DNA診斷（DNA diag no sis）。與傳統(tǒng)的方法相比，基因診斷具有下列優(yōu)點：（1）應(yīng)用范圍廣。（2）簡便、快速、經(jīng)濟。（3）特異性強，敏感性高，且便于定量操作。（4）可預先診斷?；蛟\斷的應(yīng)用：（1） 輔助遺傳病的臨床診斷（2） 遺傳病患病風險分析，如出生缺陷的產(chǎn)前診斷，植入前遺傳診斷，遺傳篩選等。（3） 其他疾病易感性預測性診斷，如腫瘤或其他家族性疾?。ㄌ悄虿?、高血壓、肥胖和AD等多基 因?。┑囊赘行灶A測。（4） 療效評價及用藥指導，例如評價臨床治療急性淋巴細胞性白血病。（5） 法醫(yī)學個體認定（6） 病原體診斷

23、，包括病毒、細菌、真菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體以及寄生蟲等的 診斷。3. 逆轉(zhuǎn)錄酶的三種反應(yīng)活性 RNA旨導的DNA合成RNA水解DNA旨導的DNA合成逆轉(zhuǎn)錄酶的意義：（1）用于合成cDNA建立cDNA文庫；（2）獲得基因或探針；（3）用于RT-PCR4. 原理相同，都是利用堿基配對互補的原則而且復制的時候都是半保留復制，都需要引物，底物都是dNTP不同點：所處的反應(yīng)環(huán)境不同，復制方式不同，所需酶原料不同，復制起始點不同，聚合酶不同，終止方式不同1。一個體內(nèi)一個體外2。聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR不會產(chǎn)生岡崎片斷3。 一個細胞只在有絲和減數(shù)分裂的時候進行DNAM制而PCR可以反復進行4。細胞中的DNA復制受到許多復雜的因子的調(diào)控5。兩者進行的溫度不同6。PCR產(chǎn)物短小，DNAM制不精確；體內(nèi)DNAM制