索氏抽提法測(cè)粗脂肪

1、索氏抽提法測(cè)粗脂肪作者 XX2、脂類組成及分類食品中脂肪的存在形式有游離態(tài)的， 如動(dòng)物性脂肪和植物性油脂； 也有結(jié)合態(tài)的， 如天 然存在的磷脂、糖脂、脂蛋白及其某些加工食品（如焙烤食品、麥乳精等）中的脂肪與蛋白 質(zhì)或碳水化合物等形成結(jié)合態(tài)。脂類是脂肪酸和醇所組成的酯類及其衍生物。 他包括脂肪、 蠟、磷脂、 糖脂、 類固醇等， 其元素組成主要是碳、氫、氧，有的還有氮、磷、硫。按脂類的化學(xué)組成，可將其分成三類。（1）單脂類單脂類大由脂肪酸與醇類所形成的脂。 脂肪酸與甘油所形成的酯稱為脂肪， 脂肪酸與高 級(jí)一元醇形成的酯稱為蠟。（2）復(fù)合脂類 復(fù)合脂類是有脂肪酸、醇和其他基團(tuán)組成的酯。重要的復(fù)合脂類

2、有磷脂、糖脂、硫脂和 蛋白脂等。（3）脂肪伴隨物指能溶于油脂的非酯物質(zhì)， 因常與油脂伴隨在一起而得名。 比較重要的有脂肪酸、 高級(jí) 醇類、色素和脂溶性維生素等。二、脂類的提取及樣品預(yù)處理脂類不溶于水， 但能溶于有機(jī)溶劑， 脂類的測(cè)定大多是利用脂類的這一化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行的。 由于脂類包括單脂類、 復(fù)合脂類和脂肪伴隨物， 其化學(xué)性質(zhì)及在各種食品中的存在狀態(tài)不同。 因此， 對(duì)于不同種類、 性狀的食品所選用的有機(jī)溶劑也不同。 對(duì)于結(jié)合態(tài)脂類或由于被食品 中其他組分所包裹不易被有機(jī)溶劑直接提取的脂類， 需要在提取前經(jīng)過一定的預(yù)處理， 破壞 結(jié)合態(tài)或分解包裹組分， 使脂類游離出來。提取脂類常用的有機(jī)溶劑有乙醚

3、、石油醚、 氯仿 -甲醇等。1、提取劑的選擇（ 1）乙醚對(duì)脂肪的溶解能力強(qiáng)，是脂肪測(cè)定的最常用的試劑。但乙醚中約含2%的水分，含水乙醚回同時(shí)食品中的非脂類物質(zhì) （如糖類等） 提取出來， 使結(jié)果偏高， 所以測(cè)定時(shí)應(yīng)使 用有、 無水乙醚，待測(cè)樣品應(yīng)預(yù)先干燥。 乙醚只適于游離態(tài)脂肪的提取，對(duì)于復(fù)合脂類的提 取效果不是很好，對(duì)于結(jié)合態(tài)脂肪則需要先將結(jié)合態(tài)破壞，游離出脂肪，再用乙醚提取。（ 2）石油醚提取脂肪的能力低于乙醚。 用石油醚作提取劑時(shí)， 允許樣品中含有微量水分， 它沒有膠溶現(xiàn)象， 不會(huì)夾帶膠態(tài)的淀粉、 蛋白質(zhì)等物質(zhì)。 石油醚也只適于游離態(tài)脂肪的提取。（3）氯仿 -甲醇是提取磷脂、 蛋白脂、 脂

4、蛋白的有效溶劑， 適用范圍很廣， 特別適用于魚、 肉、家禽、蛋等食品中脂類的測(cè)定。2、樣品的預(yù)處理（ 1）乙醚提取脂肪時(shí)，樣品應(yīng)預(yù)先干燥。乙醚滲入細(xì)胞中的速度與樣品的含水量有關(guān)， 樣品很潮濕時(shí)，乙醚不能滲入組織內(nèi)部，而且樣品被水分飽和后，提取脂肪的效率降低。（ 2）對(duì)于面粉及其焙烤制品，如點(diǎn)心、雞蛋面等，由于脂類被淀粉包裹，乙醚不能充分 滲入樣品內(nèi)部， 或由于脂肪與蛋白質(zhì)、 糖類形成結(jié)合脂， 不能用非極性溶劑直接提取。 因此， 需將包裹的糖類水解，或?qū)⒔Y(jié)合脂破壞（ 3）牛乳中的脂肪并不呈溶解狀態(tài)。 而是以脂肪球呈乳濁液狀態(tài)存在， 它周圍有一層膜，使脂肪球得以在乳中保持乳濁液的穩(wěn)定狀態(tài)。用濃硫酸

5、可破壞脂肪球膜，使脂肪游離出來。乳的膠體性狀及脂肪球膜還可利用氨-乙醇溶液將非脂成分溶于氨-乙醇溶液中，使脂肪 游離出來。一、目的脂肪廣泛存在于許多植物的種子和果實(shí)中，測(cè)定脂肪的含量，可以作為鑒別其品質(zhì)優(yōu)劣的一個(gè)指標(biāo)。脂肪含量的測(cè)定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、電測(cè)和 核磁共振法等。目前國(guó)內(nèi)外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法(Soxhlet extractor method)是公認(rèn)的經(jīng)典方法，也是我國(guó)糧油分折首選的標(biāo)準(zhǔn)方法。通過本實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)，掌握索氏抽提法測(cè)定粗脂肪含量的原理和操作方法。二、原理本實(shí)驗(yàn)采用索氏抽提法中的殘余法，即用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑(乙醚或石油醚)回流抽提， 除去樣

6、品中的粗脂肪，以樣品與殘?jiān)亓恐?，?jì)算粗脂肪含量。由于有機(jī)溶劑的抽提物中除脂肪外，還或多或少含有游離脂肪酸、甾醇、磷脂、蠟及色素等類脂物質(zhì)，因而抽提法測(cè) 定的結(jié)果只能是粗脂肪。三、實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑 1實(shí)驗(yàn)材料油料作物種子、中速濾紙2. 儀器：冷凝管濾紙筒抽提管虹橋管(1 )索氏脂肪抽提器(圖)(2) 干燥器(直徑1518cm，盛變色硅膠)(3) 不銹鋼鑷子(長(zhǎng) 20cm)(4) 培養(yǎng)皿(5 )分析天平(感量 0.001g)(6)稱量瓶(7 )恒溫水浴(8) 烘箱(9) 樣品篩(60 目)3. 試劑無水乙醚或低沸點(diǎn)石油醚(A.R.)四、操作步驟1將濾紙切成8cmX8cm，疊成一邊不封口

7、的紙包，用硬鉛筆編寫順序號(hào)，按順序排列在培 養(yǎng)皿中。將盛有濾紙包的培養(yǎng)皿移入105+2C烘箱中干燥2h,取出放入干燥器中， 冷卻至室溫。按順序?qū)⒏鳛V紙包放人同一稱量瓶中稱重(記作a)、稱量時(shí)室內(nèi)相對(duì)濕度必須低于70%。2.包裝和干燥在上述已稱重的濾紙包中裝入3g左右研細(xì)的樣品，封好包口，放入105+2C的烘箱中干燥3h,移至干燥器中冷卻至室溫。按順序號(hào)依次放入稱量瓶中稱重(記作b)。3抽提 將裝有樣品的濾紙包用長(zhǎng)鑷子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的 1.67 倍的無水乙醚，使樣 品包完全浸沒在乙醚中。連接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒溫水浴中進(jìn)行抽提，調(diào)節(jié)水溫在7080C之間，使冷凝下滴的

8、乙醚成連珠狀（120150滴/min或回流7次/h以上），抽提至抽取筒內(nèi)的乙醚用濾紙點(diǎn)滴檢查無油跡為止（約需612h）。抽提完畢后，用長(zhǎng)鑷子取出濾紙包，在通風(fēng)處使乙醚揮發(fā)（抽提室溫以1225C為宜）。提取瓶中的乙醚另行回收。4稱重待乙醚揮發(fā)之后，將濾紙包置于105±2C烘箱中干燥2h,放入干燥器冷卻至恒重為止（記作c）。五、結(jié)果與計(jì)算粗脂肪含量（%） =（ b c）/（b a）為 式中：a：稱量瓶加濾紙包重（g）b：稱量瓶加濾紙包和烘干樣重（g）c：稱量瓶加濾紙包和抽提后烘干殘?jiān)兀╣）六、附 注（ 1 ）測(cè)定用樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都需要進(jìn)行脫水處理。這是因?yàn)椋旱谝?，抽?體

9、系中有水，會(huì)使樣品中的水溶性物質(zhì)溶出，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高；第二，抽提體系中有水， 則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約2 的水） ，從而影響抽提效率；第三，樣品中有水，抽提溶劑不易滲入細(xì)胞組織內(nèi)部，結(jié)果不易將脂肪抽提干凈。（ 2）試樣粗細(xì)度要適宜。試樣粉末過粗，脂肪不易抽提干凈；試樣粉末過細(xì)，則有可能透 過濾紙孔隙隨回流溶劑流失，影響測(cè)定結(jié)果。（3） 索氏抽提法測(cè)定脂肪最大的不足是耗時(shí)過長(zhǎng)，如能將樣品先回流 12 次，然后浸泡在 溶劑中過夜，次日再繼續(xù)抽提，則可明顯縮短抽提時(shí)間。（4） YG-n型油分測(cè)定器容量大，適合于樣品較多的選種鑒定工作使用，溫度控制在70 C 左右， 8h 可提取完

10、畢。（ 5）必須十分注意乙醚的安全使用。抽提室內(nèi)嚴(yán)禁有明火存在或用明火加熱。乙醚中不得 含有過氧化物， 保持抽提室內(nèi)良好通風(fēng)， 以防燃爆。乙醚中過氧化物的檢查方法是：取適量 乙醚，加入碘化鉀溶液，用力搖動(dòng)，放置1min，若出現(xiàn)黃色則表明存在過氧化物，應(yīng)進(jìn)行處理后方可使用。處理的方法是：將乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀 KOH 溶液洗滌23次，以除去乙醇；然后用鹽酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振CaCl2搖，靜置，分層后棄去下層水溶液，以除去過氧化物；最后用水洗至中性，用無水或無水 Na2SO4 脫水，并進(jìn)行重蒸餾。七、思考題1如何利用殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗脂肪含量？殘余法測(cè)定油料作物種子中的粗脂肪含量，是用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑（乙醚或石油醚）回流 抽提，除去樣品中的粗脂肪，以樣品與殘?jiān)亓恐?，來?jì)算粗脂肪含量。2測(cè)定過程中為什么需要對(duì)樣品、抽提器、抽提用有機(jī)溶劑都要進(jìn)行脫水處理？進(jìn)行脫水處理的原因有三：第一，抽提體系中有水，會(huì)使樣品中的水溶性物質(zhì)溶出，導(dǎo) 致測(cè)定結(jié)果偏高；第二，抽提體系中有水，則抽提溶劑易被水飽和（尤其是乙醚，可飽和約 2的水），從而影響抽提效率；第三，樣品中有水