綜合項(xiàng)目一不同蔬菜水果中基本營(yíng)養(yǎng)成分分析

1、綜合項(xiàng)目一 不同蔬菜水果中基本營(yíng)養(yǎng)成分分析實(shí)驗(yàn)一 總糖含量的測(cè)定（3,5-二硝基水楊酸法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握總糖的測(cè)定原理。2、學(xué)習(xí)用比色法測(cè)定還原糖的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑1、2mol/L氫氧化鈉溶液：稱(chēng)取4g氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL。2、3,5-二硝基水楊酸試劑：稱(chēng)取0.325g 3,5-二硝基水楊酸溶于15mL熱蒸餾水中，溶解后移入50ml容量瓶中，加入2mol/L氫氧化鈉溶液16.25mL，再加入2.25ml丙三醇，搖勻，冷卻后定容至50mL。3、2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取0.04g葡萄糖，加少量的蒸餾水溶解后，定容至20mL。4、6mol/L鹽酸

2、：取25mL濃鹽酸用蒸餾水稀釋至50mL。5、6mol/L氫氧化鈉：稱(chēng)取12g氫氧化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作取6支試管，按下表加入2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和蒸餾水：管號(hào)2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL蒸餾水/mL葡萄糖濃度mg/mLOD540101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21.66102在上述試管中分別加入3,5-二硝基水楊酸試劑2mL，搖勻后于沸水浴中加入2min進(jìn)行顯色，取出后用流動(dòng)水迅速冷卻，各加入蒸餾水9mL，搖勻，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）為橫坐標(biāo)

3、，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得出回歸方程。2、總糖的提取稱(chēng)取1g實(shí)驗(yàn)材料（如新鮮果蔬），充分研磨后，放在錐形瓶中，加入6mol/L鹽酸10mL，蒸餾水15mL，在沸水浴中加熱30min。水解完畢后，冷卻至室溫后，加入8mL 6mol/L氫氧化鈉，最終用蒸餾水定容至50mL，此為總糖水解液，用于總糖測(cè)定。3、總糖含量的測(cè)定取4支試管，按下表加入不同溶液：管號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基水楊酸試劑/mLOD5401102201230124012加完試劑后，搖勻后于沸水浴中加入2min進(jìn)行顯色，取出后用流動(dòng)水迅速冷卻，各加入蒸餾水9mL，搖勻，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值

4、。測(cè)定后，取樣品的光吸收值平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出相應(yīng)的糖含量（mg/mL）。4、計(jì)算總糖的百分含量總糖=（C×V / m×1000）×稀釋倍數(shù)×0.9×100%式中,C為總糖提取液的濃度mg/mL；V為總糖提取液的總體積mL；m為樣品質(zhì)量g五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制（1）光吸收值測(cè)得結(jié)果管號(hào)2mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL蒸餾水/mL葡萄糖濃度mg/mLOD540101020.20.80.430.40.60.840.60.41.250.80.21.66102（2）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖：（3）回歸方程為：2、樣品總糖含量的測(cè)定（1）材料_總

5、糖含量的測(cè)定管號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基水楊酸試劑/mLOD5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為_(kāi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程計(jì)算得出總糖濃度為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：從而得出樣品_總糖的百分含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：（2）材料_總糖含量的測(cè)定管號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-二硝基水楊酸試劑/mLOD5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為_(kāi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程計(jì)算得出總糖濃度為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：從而得出樣品_總糖的百分含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：（3）材料_總糖含量的測(cè)定管號(hào)蒸餾水/mL總糖水解液/mL3,5-

6、二硝基水楊酸試劑/mLOD5401102201230124012樣品的光吸收值平均值為_(kāi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程計(jì)算得出總糖濃度為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：從而得出樣品_總糖的百分含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：3、對(duì)比分析不同樣品總糖含量。實(shí)驗(yàn)二 蛋白質(zhì)含量的測(cè)定（考馬斯亮藍(lán)法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的基本原理與方法。2、了解考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的優(yōu)缺點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑1、0.15mol/L氯化鈉溶液：稱(chēng)取0.2633g氯化鈉，加少量的蒸餾水溶解后，定容至30mL。2、0.1mg/mL牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液：（1）母液：稱(chēng)取0.01g牛血清白蛋白溶于10m

7、L 0.15mol/L氯化鈉溶液中，配成濃度為1mg/mL的溶液。（2）標(biāo)準(zhǔn)液：取母液1mL，用0.15mol/L氯化鈉溶液定容至10mL，配成0.1mg/mL的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。3、考馬斯亮藍(lán)G-250試劑：稱(chēng)取0.005g考馬斯亮藍(lán)G-250溶于2.5mL 95%乙醇，加蒸餾水40mL，加5mL 85%磷酸，最后加蒸餾水定容至50mL。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)取6支試管，按下表加入各種試劑。試劑加完后混勻，室溫靜置3min，以1號(hào)管為空白調(diào)零，在595nm處測(cè)定其吸光值。以蛋白質(zhì)含量（mg/mL）為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制蛋白質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得出回歸方程。試劑/mL管號(hào)1

8、234560.1mg/mL牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍(lán)G-250試劑555555蛋白質(zhì)濃度（ug/mL）020406080100OD5952、總蛋白的提取稱(chēng)取1g實(shí)驗(yàn)材料（如新鮮果蔬），加5mL蒸餾水研磨，過(guò)濾后將濾液用蒸餾水定容至10mL。3、總蛋白測(cè)定取3支試管，分別加0.1mL未知濃度的蛋白質(zhì)樣品液，加0.9mL 0.15mol/L氯化鈉溶液，再加入5mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，搖勻，室溫靜置3min，以1號(hào)管為空白管調(diào)零，在595nm處測(cè)其吸光值。測(cè)定后，取樣品的光吸收值平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查

9、出相應(yīng)的蛋白濃度（ug/mL）。4、蛋白質(zhì)含量（mg/g）蛋白質(zhì)含量（mg/g）=（C×VT）/（1000×VS×WF）式中，C為蛋白質(zhì)提取液的濃度ug/mL；VT為提取液總體積mL；VS為測(cè)定時(shí)加樣量mL；WF為樣品鮮重g。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制（1）光吸收值測(cè)得結(jié)果試劑/mL管號(hào)1234560.1mg/mL牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液00.20.40.60.81.00.15mol/L氯化鈉溶液1.00.80.60.40.20考馬斯亮藍(lán)G-250試劑555555蛋白質(zhì)濃度（ug/mL）020406080100OD595（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖：（3）回歸方程

10、為：2、樣品蛋白質(zhì)含量的測(cè)定（1）樣品_的光吸收值分別為_(kāi)、_、_，其平均值為_(kāi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程計(jì)算得出蛋白質(zhì)濃度為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：從而得出樣品_蛋白質(zhì)的含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：（2）樣品_的光吸收值分別為_(kāi)、_、_，其平均值為_(kāi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程計(jì)算得出蛋白質(zhì)濃度為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：從而得出樣品_蛋白質(zhì)的含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：（3）樣品_的光吸收值分別為_(kāi)、_、_，其平均值為_(kāi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程計(jì)算得出蛋白質(zhì)濃度為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：從而得出樣品_蛋白質(zhì)的含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程：3、對(duì)比分析不同樣品蛋白質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)三 維生素C含量的測(cè)

11、定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握2,6-二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素C的原理與方法。2、了解水果與蔬菜中維生素C的含量情況。二、實(shí)驗(yàn)原理 三、實(shí)驗(yàn)試劑1、2%草酸：稱(chēng)取1g草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL。2、1%草酸：稱(chēng)取0.5g草酸，加少量的蒸餾水溶解后，定容至50mL。3、0.1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液：稱(chēng)取0.0025g抗壞血酸溶于少量1%草酸溶液中，最終加1%草酸定容至25mL。用棕色試劑瓶保存于4。最好臨用前配制。4、0.05% 2,6-二氯酚靛酚溶液：稱(chēng)取0.025g 2,6-二氯酚靛酚溶于15mL含有0.0052g碳酸氫鈉的熱水中，冷卻后加水定

12、容至50mL。濾去不溶物，用棕色試劑瓶保存于4。約可保存1周。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品的制備稱(chēng)取10g實(shí)驗(yàn)材料（如新鮮果蔬），加入5-10mL 2%草酸，研磨成漿狀，過(guò)濾后，將濾液定容至25mL。2、標(biāo)準(zhǔn)液滴定準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液1mL置于50mL錐形瓶中，加9mL 1%草酸，以0.05% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡粉色，并保持15s不褪色，即達(dá)到終點(diǎn)；取10mL 1%草酸作空白對(duì)照，按以上方法滴定。記錄所用染料溶液的體積（mL），計(jì)算出1mL染料溶液所能氧化抗壞血酸的量（mg）。3、樣品滴定準(zhǔn)備吸取樣品濾液2份，每份為10mL，分別放入2個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，另取10mL 1%草酸作空白對(duì)照滴定；

13、按上面的操作滴定并記錄所用染料溶液的體積（mL）。4、維生素C含量的計(jì)算取2份樣品滴定所用染料體積平均值，代入下列公式中計(jì)算100g樣品還原型抗壞血酸含量。維生素C含量（mg/100g樣品）=（VA-VB）×C×T×100/（ D×W）式中，VA為滴定樣品所好用的染料的平均用量mL；VB為滴定空白對(duì)照所用的染料的平均用量mL；C為樣品提取液的總體積mL；D為滴定時(shí)所取的樣品提取液體積mL；T為1mL染料能氧化抗壞血酸質(zhì)量mg（由操作2計(jì)算出）；W為待測(cè)樣品的質(zhì)量g。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液滴定時(shí)，所用染料溶液的體積為_(kāi)，從而計(jì)算出1mL染料溶液所

14、能氧化抗壞血酸的量為_(kāi)。2、樣品維生素C含量的測(cè)定（1）樣品_滴定時(shí)所用染料溶液的體積分別為_(kāi)和_。其平均用量為_(kāi)。則樣品維生素C含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程。（2）樣品_滴定時(shí)所用染料溶液的體積分別為_(kāi)和_。其平均用量為_(kāi)。則樣品維生素C含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程。（3）樣品_滴定時(shí)所用染料溶液的體積分別為_(kāi)和_。其平均用量為_(kāi)。則樣品維生素C含量為_(kāi)。請(qǐng)說(shuō)明具體計(jì)算過(guò)程。3、對(duì)比分析不同樣品維生素C含量。實(shí)驗(yàn)四 纖維素含量的測(cè)定（比色法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)并掌握比色法測(cè)定纖維素的原理與方法。2、了解水果與蔬菜中纖維素的含量情況。二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)試劑1、60%硫酸：量取30mL濃硫酸

15、，緩慢倒入15mL蒸餾水中，最終加水定容至50mL。2、濃硫酸3、2%蒽酮試劑：將1g蒽酮溶解于50mL乙酸乙酯中，存放在棕色試劑瓶中。4、100ug/mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液：（1）母液：稱(chēng)取25mg纖維素，放入燒杯中，將燒杯放入冰浴中，然后加冷的60%硫酸15-17mL，在冷的條件下消化處理20-30min，用60%硫酸定容至25mL。（2）吸取母液5mL放入另一個(gè)容量瓶中，將容量瓶放入冰浴中，加蒸餾水定容至50mL。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、纖維素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制取6支試管，按下表加入不同試劑：試劑/mL管號(hào)123456100ug/mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.4

16、0纖維素含量ug/mL020406080100OD620將各管搖勻后，向每管加入0.5mL 2%蒽酮，再沿管壁加入5mL濃硫酸，緩慢搖勻后，靜置1min。然后在620nm下，測(cè)得不同含量纖維素溶液的吸光值。以測(cè)得的吸光值為Y值，以對(duì)應(yīng)的纖維素含量為x值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得出回歸方程。2、樣品纖維素含量的測(cè)定（1）稱(chēng)取1g實(shí)驗(yàn)材料（如新鮮果蔬）置于燒杯中，將燒杯置于冷水浴中，加入60%硫酸15mL，并消化30min，然后將消化好的纖維素溶液轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，并用60%硫酸定容至25mL。然后用布氏漏斗過(guò)濾于另一個(gè)燒杯中。（2）取上述溶液2mL于試管中，加入0.5mL 2%蒽酮試劑，并沿管壁加5mL濃硫酸，緩慢搖勻后，靜置12min，然后在620nm波長(zhǎng)下測(cè)定光吸收值。3、纖維素百分含量纖維素百分含量=（X×10-6×a / W）×100%式中，X為按按回歸方程計(jì)算出的纖維素含量ug；W為樣品重量g；10-6為微克換算成克的系數(shù)；a為樣品稀釋倍數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、纖維素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制（1）光吸收值測(cè)得結(jié)果試劑/mL管號(hào)123456100ug/mL纖維素標(biāo)準(zhǔn)液00.40.81.21.62蒸餾水21.61.20.80.40纖維素含量ug/mL02040608