放射性125I粒子照射小鼠膀胱癌模型的實驗研究

1、                 作者： 杜明華，高立寧，姚茂銀，郭金和 【關(guān)鍵詞】  碘    【Abstract】 AIM: To get insights into  the biological effect of implanting 125I seeds to treat bladder cancer model of T139 mice and  to provi

2、de an experimental basis for clinical utilization of 125I seed  brachytherapy for  bladder cancer. METHODS:  Eight  mice models bearing T139 bladder cancer were divided into 2 groups (experimental, 4; control, 4) at  random. 125I seeds were implanted into  the tumor in

3、experimental group while the empty seed was implanted in the control group at the same position as the experimental group. The experimental mice were executed after 24 d. Three tissues were cut from different positions according to the different distance (0.6, 1.2, 1.8 cm) from the implanted 125I se

4、eds and the tumor cells were primarily cultured and the pathomorphological changes, growth and proliferation of tumor cells were dynamically recorded. Tumor cell  count, efficiency and inhibitory rate of colony formation were calculated. RESULTS: The cell number of experimental group was obviou

5、sly fewer than that of control group at the same time point. There was a significant difference in the number of cultured cells from different positions of experimental group. The inhibitory rate of colony formation was 41.84%. Variance analysis of total cloning efficiency of the cells from differen

6、t positions showed  a  significant difference between experimental group and control group (P<0.01), and among different positions of experimental group (P<0.01). CONCLUSION: The radiation from implanted 125I seeds directly destroys tumor cells within the effective range.  The r

7、adiation dose and killing effect of ray decreased with the increasing distance  from 125I seeds.    【Keywords】 125I seed;  bladder neoplasms; interstitial implant;  mice    【摘要】 目的： 揭示125I粒子照射膀胱癌的生物學(xué)效應(yīng)，為臨床應(yīng)用125I粒子治療膀胱癌提供實驗依據(jù). 方法： 把T739近交系小鼠膀胱低分化移行細(xì)胞癌動物8只隨

8、機(jī)分為兩組，實驗組和對照組，每組4只. 在小鼠瘤體內(nèi)植入MSI125型125I粒子，在對照組小鼠瘤體內(nèi)相應(yīng)部位植入粒子空殼，繼續(xù)飼養(yǎng)24 d后處死. 在距粒子植入部位0.6, 1.2, 1.8 cm的小鼠腫瘤內(nèi)分別取3塊組織，分離后行癌細(xì)胞培養(yǎng)，顯微鏡下動態(tài)觀察細(xì)胞病理形態(tài)變化及生長、增殖狀況. 統(tǒng)計克隆形成率，計算克隆形成抑制率. 結(jié)果： 實驗組細(xì)胞數(shù)量明顯少于對照組. 實驗組不同部位的培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量有較明顯差異. 實驗組克隆形成抑制率為41.84%. 兩組不同部位所取組織細(xì)胞的總體克隆形成率有顯著差異（P<0.01），實驗組不同部位間亦有顯著差異(P<0.01). 結(jié)論： 植入的

9、125I粒子主要是靠射線的穿透力在有效射程內(nèi)直接殺傷癌細(xì)胞，隨著距離延長，輻射劑量減少，射線對癌細(xì)胞殺傷作用下降.    【關(guān)鍵詞】 碘125粒子；膀胱腫瘤；組織間植入；小鼠     膀胱癌作為一種高發(fā)的惡性泌尿系腫瘤，其放療實踐與研究只局限于外放療和腔內(nèi)放療，對于組織間種植治療的應(yīng)用較少1，其基礎(chǔ)性研究也鮮見報道. 我們通過對125I粒子植入治療膀胱癌產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)的實驗研究，揭示125I粒子的殺瘤效應(yīng)，為臨床應(yīng)用125I粒子治療膀胱癌提供實驗基礎(chǔ).    1材料和方法  

10、;  1.1材料T739近交系普通清潔級小鼠4 wk齡8只，雌雄隨機(jī)，由同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供. 含小鼠可移植性膀胱移行細(xì)胞癌株（BTT739）的荷瘤T739小鼠2只作瘤源，由上海市第一人民醫(yī)院病理科提供. MSI125型125I粒子由中國原子能科學(xué)研究院同位素研究所提供. 攝像顯微鏡(Nikon Fx35DX，日本尼康公司). 二氧化碳孵育箱（NAPCO，U.S.A）.    1.2.1建立膀胱癌動物模型用T739近交系小鼠8只，通過瘤源接種的方法建立BTT739源于化學(xué)致癌劑NbutylN（4hydroxybutyl）nitrosamine（

11、BBN）誘導(dǎo)的T739近交系小鼠膀胱低分化移行細(xì)胞癌動物模型. 隨機(jī)分為兩組： 實驗組4只，對照組4只.     1.2.2種植125I粒子在實驗組小鼠瘤體內(nèi)植入MSI125型125I粒子，待移植瘤長到直徑約0.7 cm大小后，在瘤體內(nèi)偏心約1/4處植入一枚MSI125型125I粒子；在對照組小鼠瘤體內(nèi)相應(yīng)部位植入粒子空殼，繼續(xù)飼養(yǎng)24 d后用頸椎脫位法處死全部實驗小鼠. 于無菌條件下，在距粒子植入部位0.6, 1.2, 1.8 cm的小鼠腫瘤內(nèi)分別取3塊組織記作a, b, c部位.    1.2.3細(xì)胞培養(yǎng)、克隆 瘤細(xì)胞的分離： 無

12、菌條件下將取下的瘤結(jié)分別處理. 先各移入一干凈平皿中，加入4含青霉素10萬u，鏈霉素0.1 g的PBS緩沖液，沒過除去包膜、血塊及壞死組織的瘤結(jié)，漂洗34次. 再將瘤結(jié)分別移入一干凈平皿中，加入4 RPMI1640合成培養(yǎng)液沒過瘤結(jié)，用眼科剪輕輕剪碎瘤結(jié)，成1 mm×1 mm×1 mm大小的小瘤塊. 用2.5 g/L胰酶37水浴消化11.5 h，每15 min搖1次. 將自制的濾網(wǎng)罩于燒杯口上，用研磨棒輕輕碾磨上述胰酶消化過的瘤塊，收集燒杯中的癌細(xì)胞濾液. 4, 500 r/min離心5 min，棄上清液后，用吸管小心除去上層血細(xì)胞、結(jié)締組織. 再用RPMI1640培養(yǎng)液重

13、懸后，以相同條件離心純化細(xì)胞，重復(fù)34次. 最后將收集的癌細(xì)胞重懸于37預(yù)熱的RPMI1640培養(yǎng)液中，用毛細(xì)吸管反復(fù)吹打，使細(xì)胞盡量分散. 取0.9 mL稀釋的癌細(xì)胞懸液用0.1 mL的臺盼藍(lán)染色液染色，滴一滴于血細(xì)胞計數(shù)板上，在光鏡下觀察癌細(xì)胞的活率并計數(shù)，制成1×1010/L的癌細(xì)胞懸液備用. 癌細(xì)胞培養(yǎng)：將上述制成的1×1010/L的癌細(xì)胞懸液，分別接種至25 mL培養(yǎng)瓶中，每瓶加含200 mL/L小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液3 mL，在37, 50 mL/L CO2條件下置二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng). 待細(xì)胞貼壁后，首次換液，以后每24  h換培養(yǎng)液1次.- 28 焦靈利，倪孟祥，陳日，等. 頭孢唑林鈉聯(lián)合舒巴坦鈉對產(chǎn)酶和非產(chǎn)酶菌的體內(nèi)抗菌活性J. 中國藥師，2000,3(5):26629 Gavalda J, Torres C, Tenorio C, et al. Efficacy of ampicillin plus ceftriaxone in treatment of expeimental endocarditis due to Enterococcus fae