保健食品中總黃酮、總皂甙、粗多糖的測(cè)定

1、保健食品中總黃酮、總皂甙、粗多糖的測(cè)定附錄A（規(guī)范性的附錄）保健食品中總黃酮的測(cè)定A.1 試劑A.1.1 聚酰胺粉A.1.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液： 稱取5.0g蘆丁，加甲醇溶解并定容至100mL，即得50g/mL。A.1.3 乙醇 分析純。A.1.4 甲醇 分析純。A.2 分析步驟A.2.1 試樣處理：稱取一定量的試樣，加乙醇定容至25mL，搖勻后，超聲提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸發(fā)皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20mL苯洗，苯液棄去，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25mL。此液于波長(zhǎng)360nm測(cè)定吸收值。同時(shí)以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程

2、，計(jì)算試樣中的總黃酮含量。A.2.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線： 吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醛至刻度，搖勻，于波長(zhǎng)360nm比色。求回歸方程，計(jì)算試樣中總黃酮含量。A.3 計(jì)算和結(jié)果表示： 式中：X：試樣中總黃酮的含量，mg/100g；A：由標(biāo)準(zhǔn)曲線算得被測(cè)液中總黃酮量，gM：試樣質(zhì)量，gV1：測(cè)定用試樣體積，mLV2：試樣定容總體積，mL計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。此方法選自保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）附錄B（規(guī)范性的附錄）保健食品中總皂甙的測(cè)定B.1 試劑B.1.1 Amberlite-XAD-2 大孔樹脂，Sigma 化學(xué)公司

3、、U.S.AB.1.2 正丁醇 分析純。B.1.3 乙 醇 分析純。B.1.4 中性氧化鋁 層析用，100-200目。B.1.5 高氯酸 分析純。B.1.6 冰乙酸 分析純。B.1.7 香草醛溶液 稱取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。B.1.8 人參皂甙Re 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。B.1.9 人參皂甙Re標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取人參皂甙Re標(biāo)準(zhǔn)品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升人參皂甙Re2.0mg。B.2 儀器B.2.1 比色劑B.2.2 層析柱B.3 實(shí)驗(yàn)步驟B.3.1 試樣處理B.3.1.1 固體試樣：稱取1.000g左右的試樣（根據(jù)試樣含人參量定），置

4、于100mL容量瓶中，加少量水，超聲30min，再用水定容至100mL，搖勻，放置，吸取上清液1.0mL進(jìn)行柱層析。B.3.1.2 液體試樣：含乙醇的補(bǔ)酒類保健食品，吸取1.0mL試樣（假如濃度高、或顏色深，需稀釋一定體積后再取1.0mL）進(jìn)行柱層析。B.3.2 柱層析：用10mL注射器做層析管，內(nèi)裝3cm Amberlite-XAD-2 大孔樹脂，上加1cm中性氧化鋁。先用25mL70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0mL已處理好的試樣溶液（見B.3.1），用25mL水洗柱，棄去洗脫液，用25mL70%乙醇洗脫人參皂甙，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60水浴揮

5、干。以此作顯色用。B.3.3 顯色：在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，轉(zhuǎn)動(dòng)蒸發(fā)皿，使殘?jiān)既芙?，再?.8mL高氯酸，均勻后移入5mL帶塞刻度離心管中，60水浴加熱10min，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0mL，搖勻后，以1cm比色池與560nm波長(zhǎng)處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測(cè)定。B.3.4 標(biāo)準(zhǔn)管：吸取人參皂甙Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0mg/mL）100l放蒸發(fā)皿中，放在水浴揮干（低于60），或熱風(fēng)吹干（勿使過熱），以下操作從“B.3.2柱層析”起，與試樣相同。測(cè)定吸光度值。計(jì)算： 式中：X：試樣中總皂甙量（以人參皂甙Re計(jì)），g/100g；A1：被測(cè)液的吸光度值；

6、A2：標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值；C：標(biāo)準(zhǔn)管人參皂甙Re的量，gV：試樣稀釋體積，mLm：試樣質(zhì)量，g計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。此方法選自保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）附錄C粗多糖的測(cè)定C.1 試劑C.1.1 濃硫酸C.1.2 無(wú)水乙醇C.1.3 5%本分溶液C.1.4 80%乙醇溶液C.2 分析步驟C.2.1 試樣處理：取本品50.0mL，加熱濃縮至約10.0mL，放冷，加入40mL無(wú)水乙醇，3000轉(zhuǎn)/分離心5min，棄去上清液，殘?jiān)?0%乙醇洗滌，離心（重復(fù)此過程2次），用水溶解殘?jiān)ㄈ?0mL。此液即為樣品處理液。C.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線： 取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL，用水定容為1.0mL，加入0.5mL苯酚溶液，10mL濃硫酸，混勻，放置至室溫，于L=1cm，波長(zhǎng)=485nm測(cè)定吸光度，繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線。C.2.3 樣品測(cè)定 取樣品處理液0.5mL于具塞比色管中，以下同標(biāo)準(zhǔn)曲線操作。測(cè)定吸光