NMDA和AMPA型谷氨酸受體亞基在成年大鼠前腦室管膜及室管膜下區(qū)的分布

1、NMDA和AMPA型谷氨酸受體亞基在成年大鼠前腦室管膜及室管膜下區(qū)的分布         07-08-24 16:04:00     編輯：studa20               作者： 魏麗春，石梅，曹榮，陳良為 【關(guān)鍵詞】  谷氨酸受體；NMDA受體；AMPA受體；室管膜；免疫組織化學(xué)   

2、 cnLocalization of NMDA and AMPAtype  glutamate receptors in forebrain ventricular membrane and subventricular zone of adult rats    【Abstract】 AIM: To investigate the distribution patterns of NMDAtype and AMPAtype glutamate receptor subunits in the forebrain ventricular mem

3、brane and subventricular zone of adult rats. METHODS: Immunohistochemical staining was applied to visualize the localization of 5 kinds of NMDA and AMPA receptor subunits in the forebrain sections of adult rats. RESULTS: The immunoreactivities for NMDAR1 (NR1), NR2C, AMPA receptor subunit 1(GluR1),

4、GluR2/3, and GluR4 were detected in the ventricular membrane and subventricular zone.  The immunoreactive products for NMDA or AMPA receptor subunits were homogeneously localized in the cytoplasma and cell membrane.  Semiquantitative analysis indicated that NR1 and GluR4immunoreactive cell

5、s were more and distributed more densely than NR2C, GluR1 or GluR2/3immunopositive ones in ventricular membrane and subventricular zone. CONCLUSION: The localization of NMDA and AMPA receptor subunits in the ventricular membrane and subventricular zone suggests that NMDA and AMPA receptors may be in

6、volved in functional modulation of neurogenesis in above regions.    【Keywords】 glutamate receptors; NMDA receptor; AMPA receptor; ventricular membrane; immunohistochemistry    【摘要】 目的：觀察前腦室管膜及室管膜下區(qū)N甲基D天門冬氨酸（NMDA）和使君子酸（AMPA）型谷氨酸受體的分布. 方法：應(yīng)用成年SD大鼠前腦切片免疫組織化學(xué)方法，顯示NMDA和AMPA

7、受體六種亞基的細(xì)胞定位. 結(jié)果：在室管膜及室管膜下區(qū)有NMDA受體亞基NR1，NR2C及AMPA受體亞基GluR1，GluR2/3，GluR4免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物的分布，免疫陽性產(chǎn)物則均勻地分布在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜. 半定量分析表明NR1和GluR4陽性細(xì)胞的數(shù)目和染色密度均高于NR2C，GluR1和GluR2/3陽性細(xì)胞. 結(jié)論：結(jié)合以往研究，NMDA和AMPA受體亞基在大鼠前腦室管膜及室管膜下區(qū)定位結(jié)果提示NMDA和AMPA受體可能參與該區(qū)域神經(jīng)發(fā)生等功能活動(dòng)的調(diào)節(jié).    【關(guān)鍵詞】 谷氨酸受體；NMDA受體；AMPA受體；室管膜；免疫組織化學(xué)  

8、;  0引言    興奮性氨基酸是參與神經(jīng)元興奮性傳遞、增殖發(fā)育、興奮性毒性等活動(dòng)的重要遞質(zhì)1-5. 其興奮性傳遞主要由谷氨酸受體來介導(dǎo)，包括N甲基D天門冬氨酸（NmethylDaspartate，NMDA）、使君子酸（alphaamino3hydroxy5methyl4isoxazolepropionic acid，AMPA）和海人藻酸（kainic acid，KA）受體1-2. 以往對(duì)NMDA和AMPA受體在腦內(nèi)神經(jīng)元上分布和功能已有許多報(bào)道6-9，但缺乏對(duì)室管膜及室管膜下區(qū)分布和功能的研究. 資料表明室管膜及室管膜下區(qū)是成年動(dòng)物神經(jīng)發(fā)生活躍的主要區(qū)

9、域之一. 為此，我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法10，觀察NMDA和AMPA受體在大鼠室管膜及室管膜下區(qū)的分布，旨在探討NMDA或AMPA受體參與該區(qū)神經(jīng)發(fā)生等功能活動(dòng)的意義.    1材料和方法    11材料正常成年雄性SD大鼠6只，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供. 第一抗體包括小鼠抗NR1抗體(11000)，兔抗NR2C抗體（11000），兔抗GluR1，GluR2/3，GluR4抗體（1300）均為Chemicon公司產(chǎn)品；biotin標(biāo)記的羊抗小鼠IgG或羊抗兔IgG (1200)，Vector公司產(chǎn)品；ABC復(fù)合物(1200),

10、Vector公司產(chǎn)品.    12方法    121動(dòng)物固定與切片動(dòng)物在戊巴比妥鈉(40 mg/kg，ip)麻醉下，開胸、經(jīng)左心室至主動(dòng)脈插管，用生理鹽水約100 mL快速?zèng)_去血液，隨即灌注含40 g/L多聚甲醛0.1 mol/L的磷酸緩沖液(pH 7.4)，灌流30 min. 注畢立即取出大腦, 4下后固定4 h. 然后換入300 g/L蔗糖溶液內(nèi)，4下過夜. 冰凍連續(xù)冠狀切片，片厚30 m. 切片按順序分為數(shù)套，分別作NMDA受體亞基NR1，NR2C，AMPA受體亞基GluR1，GluR2/3和GluR4免疫組織化學(xué)染色和對(duì)照染色

11、.    122免疫組織化學(xué)染色參照文獻(xiàn)10的方法進(jìn)行，切片于10 mmol/L PBS內(nèi)涮洗, 再入含0.3 mL/L過氧化氫溶，液內(nèi)處理30 min，用以滅活內(nèi)源性過氧化物酶. 經(jīng)PBS涮洗后，分別入第一抗體血清（用含2 mL/L正常山羊血清和0.1 mL/L Triton X100的PBS稀釋）內(nèi)，4下孵育48 h. 然后入biotin標(biāo)記的羊抗小鼠IgG或羊抗兔IgG (1200)溶液，室溫下放置4 h、入ABC復(fù)合物(1200,)溶液，室溫下孵育2 h. 每次抗體孵育后均用PBS涮洗，3×10 min. 最后入DAB/H2O2溶液(0.050.

12、01 g/L)反應(yīng)10 min. 用正常血清溶液代替特異性第一抗體孵育切片，作為免疫染色對(duì)照. 切片裱于載玻片上，晾干、脫水、透明和封片，在BX60顯微鏡下進(jìn)行觀察、圖像采集和陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)分析.    123半定量數(shù)據(jù)分析為便于描述前腦室管膜及室管膜下區(qū)內(nèi)NMDA，AMPA受體免疫陽性細(xì)胞的數(shù)量，將陽性細(xì)胞密度分為高（多于10個(gè)細(xì)胞/高倍視野，表示為）,中（310個(gè)細(xì)胞/高倍視野，表示為）,低（低于3個(gè)細(xì)胞/高倍視野，表示為+）.    2結(jié)果    21NMDA和AMPA受體亞基免疫反應(yīng)產(chǎn)物的定位特征在

13、應(yīng)用特異性第一抗體孵育的切片上，免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈深棕色，主要定位于細(xì)胞胞體及突起上. NMDA受體和AMPA受體亞基NR1，NR2C，GluR1，GluR2/3 和GluR4的免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物呈均勻的棕色分布在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上. 在用正常血清取代特異性第一抗體進(jìn)行孵育的切片上，未發(fā)現(xiàn)陽性染色.    22NMDA受體亞基在成鼠室管膜及室管膜下區(qū)的定位NR1及NR2C陽性產(chǎn)物均勻地分布在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，室管膜及室管膜下區(qū)均有免疫陽性細(xì)胞存在，NR1的免疫染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞的密度均比NR2C大（圖1）.A: NR1; B: NR1; C: NR2C; D: NR2C.    23AMPA受體在室管膜及室管膜下區(qū)的分布GluR1和GluR2/3的免疫陽性產(chǎn)物主要分布在細(xì)胞