微生物限度檢查方法驗證方案

1、頁碼：第1頁，共12頁文件編碼：ZYCWJ-TS-07156-01起草部門：質(zhì)量管理部版本號：01標(biāo)題微生物限度檢查方法驗證方案起草人起草時間審核人審核時間批準(zhǔn)人批準(zhǔn)時間頒發(fā)部門質(zhì)量管理部生效日期分發(fā)部門份數(shù)質(zhì)量管理部生產(chǎn)部設(shè)備部物料部行政人事部銷售部財務(wù)部變更記載：修訂號批準(zhǔn)日期執(zhí)行日期變更原因微生物驗證實施小組主要成員:部門質(zhì)量管理部質(zhì)量管理部質(zhì)量管理部質(zhì)量管理部質(zhì)量管理部姓名職位驗證領(lǐng)導(dǎo)小組審查匯簽:姓名部門職務(wù)或崗位簽字日期企業(yè)負(fù)責(zé)人質(zhì)量管理部經(jīng)理生產(chǎn)部經(jīng)理設(shè)備部經(jīng)理質(zhì)量管理部QC主管質(zhì)量管理部QA主管物料部經(jīng)理1 .概述藥典微生物限度檢查法中要求在建立藥品的微生物限度檢查法時，應(yīng)進展

2、方法的驗證，以證明所采 用的方法適合于該藥品的微生物限度檢查。所以對感冒靈顆粒微生物限度檢查進展方法的驗證。.word.zl-2 目的為了保證檢驗質(zhì)量，對所用的檢驗方法必須經(jīng)過驗證，才能確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。3 適用圍本方案適用于感冒靈顆粒微生物方法學(xué)確實認(rèn)與驗證。4 驗證人員職責(zé)4.1 驗證小組 :組長：質(zhì)量管理部經(jīng)理成員： QC 主管、微生物操作人員4.2 職責(zé)及分工： QC 主管組織起草該驗證方案，并組織實施該方案；微生物操作人員具體實施該方案；質(zhì)量管理部經(jīng)理協(xié)助和監(jiān)控該方案的實施。4.3 驗證方案批準(zhǔn)后，應(yīng)進展培訓(xùn)。由驗證小組指定人員負(fù)責(zé)對小組成員及和驗證有關(guān)的人員進展培訓(xùn)。5 驗證

3、依據(jù)中國藥典 2015年版通那么“ 1105、“11066 .感冒靈顆粒微生物限度檢驗方法驗證風(fēng)險分析. word.zl-序號工程潛在的風(fēng)險分析潛在的失敗后果原因分析嚴(yán)重程度發(fā)生頻次風(fēng)險等級措施結(jié)果采取的措施嚴(yán)重程度發(fā)生頻次風(fēng)險等級1驗證方案編寫人員編寫人員未按照？ZYCWJ-SOP-10008-01微生物限度檢查法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程頌寫方案。驗證方法錯 誤，導(dǎo)致驗證 結(jié)果不可靠。人員培訓(xùn)考核/、到位F2P3ALARP對驗證編寫人員進展培訓(xùn)和考核，合格前方可編寫F2P5ACC可承受2試驗人員試驗人員未按照編寫的驗證方案進展操作操作/、止確，導(dǎo)致試驗結(jié)果/、可靠人員培訓(xùn)考核/、到位F2P3ALARP按

4、照驗證方案進展培訓(xùn)， 培訓(xùn)合格前方可操作F2P5ACC可承受3培養(yǎng)箱、凈化工作臺儀器未經(jīng)校驗或不在校驗期。導(dǎo)致檢驗環(huán)境 和培養(yǎng)環(huán)境小 符合要求，最 終導(dǎo)致驗證失 敗。使用人員使用前未對校驗期進展檢查F2P3ALARP設(shè)備人員使用前對設(shè)備進展檢查。F3P5ACC可承受4干熱火菌烘箱、壓力鍋儀器未經(jīng)校驗或不在校驗期。導(dǎo)致試驗結(jié)果出現(xiàn)異常。使用人員使 用前校 期進展檢查F2P3ALARP設(shè)備人員使用前對設(shè)備進展檢查。F3P5ACC可承受5對照培喬基、檢查用培喬基、檢對照培養(yǎng)基、檢查用培養(yǎng) 基、檢定菌失效導(dǎo)致驗證失敗使用前未對照培養(yǎng)基、基、檢定菌后F2P3ALARP對管理人員進展培訓(xùn)，嚴(yán) 格按照？ZY

5、CWJ-SMP-10020-00比加基及檢定國目理規(guī)F3P5ACC可承受.可修編.定菌進展核查。程 他展管理，使用前使 用人對有效期進展確認(rèn)。6/口加小、緩沖液、消毒齊IJ培養(yǎng)基、緩沖液、消毒劑配制/、止確導(dǎo)致驗證失敗嚴(yán)格按照標(biāo) 準(zhǔn)要求制備 中液和消 毒劑F2P3ALARP對實驗人員進展驗證培訓(xùn)F3P5ACC可承受7火菌器具、干凈月艮已火菌器具和干凈服過效期導(dǎo)致驗證失敗使用前未對 菌器具和干凈服有 進展確 認(rèn)F2P3ALARP使用前對已火菌器具和 干凈服有效期進展確認(rèn)F3P5ACC可承受8驗證方法不止確1、驗證方某編與不止 確；2、未嚴(yán)格按照驗證方 案開展驗證工作導(dǎo)致驗證失敗驗證方某未經(jīng)批準(zhǔn)F

6、3P3ALARP對驗證方案進展審核F3P5ACC可承受9控制菌 檢驗結(jié) 果/、合 格實驗組尢菌落生長，供試 品可能有抑菌性導(dǎo)致驗證失敗1、式品可 育甜試驗菌 存在抑制作 用2、檢驗員判 誤。F2P3ALARP采用培養(yǎng)基稀釋法消除抑菌性F3P5ACC可承受10實驗組菌種回各試驗組回收率低于或高于標(biāo)準(zhǔn)圍導(dǎo)致驗證失敗1、式品可育甜試驗菌F2P3ALARP采用培養(yǎng)基稀釋法消除抑菌性F3P5ACC可承受.word.zl-收率不達(dá)標(biāo)存在抑制作 用2、檢驗人員 計數(shù)錯誤。11樣品儲 存劃、境樣品儲存環(huán)境、溫度異 常。導(dǎo)致樣品被污染或失敗樣品存放不當(dāng)F2P3ALARP嚴(yán)格控制樣品存放環(huán)境的溫濕度F3P5ACC

7、可承受12干凈區(qū)環(huán)境1、干凈區(qū)溫濕度、壓差異常2、干凈區(qū)環(huán)境被污染導(dǎo)致驗證失敗1干凈區(qū)溫濕 度、壓差控制 不當(dāng)2未定期對干 凈區(qū)進展清 吉和消毒；3未定期監(jiān)測 干凈區(qū)的環(huán) 境F2P3ALARP1 .每天定期監(jiān)察干凈 區(qū)的溫濕度；2 .按照SOP規(guī)定對干 凈區(qū)進展消毒；3 .嚴(yán)格按照？T凈度監(jiān) 測管理規(guī)程？對干凈 區(qū)環(huán)境進展監(jiān)測。F3P5ACC可承受.word.zl-6.1 結(jié)果分析：通過以上采取的措施，風(fēng)險均控制在可承受圍。7 .人員培訓(xùn)確認(rèn)表培訓(xùn)時間培訓(xùn)容培訓(xùn)對象培訓(xùn)地點培訓(xùn)講師主辦部門被培訓(xùn)人員簽名序號XX部門及崗位QA主管QC主管設(shè)備部經(jīng)理設(shè)備管理員生產(chǎn)部經(jīng)理質(zhì)量管理部QC檢驗員質(zhì)量管理

8、部QC檢驗員質(zhì)量管理部QC檢驗員質(zhì)量管理部QC檢驗員8 .驗證方法6.1儀器及設(shè)備名稱儀器及設(shè)備名稱型號生產(chǎn)廠家是否校驗備注生化培養(yǎng)箱是口含口恒溫培養(yǎng)箱是口含口凈化工作臺是口含口超凈工作臺是口含口立式壓力消毒器是口含口立式壓力火菌命是口含口6.1驗證用樣品：感冒靈顆粒規(guī)格：批號:感冒靈顆粒規(guī)格：批號：感冒靈顆粒規(guī)格：批號：6.2 .驗證用培養(yǎng)基：胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：麥康凱液體培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家

9、：批號：配制批號：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家：批號：配制批號：6.3 驗證用菌種：金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003、大腸埃希菌CMCC(B)44 102、枯草芽抱菌CMCC(B)63501、白 色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉菌CMCC(F)980036.4 菌液制備：6.4.4 取經(jīng)30C35 c培養(yǎng)1824小時的金黃色葡萄球菌、 大腸埃希菌與枯草芽抱桿菌營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)物 1ml參加9ml 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10 5- 10 7為不大于100cfu/ml備用。6.4.5 取經(jīng)2025c培養(yǎng)23天的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml,參加9ml 0.9%氯化鈉溶液中，

10、10倍稀釋至10 5為不大于100cfu/ml備用。6.4.6 將黑曲霉菌斜面的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，20? 25c培養(yǎng)5? 7天，使大量的抱子成熟。參加 3-5ml含0.05%ml/ml聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液或 pH7.0無菌氯化鈉-蛋白 月東緩沖液，將抱子洗脫。然后，采用適宜方法吸出抱子懸液無菌試管用含0.05%ml/ml聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液或 pH7.0無菌氯化鈉-蛋白月東緩沖液依次稀釋至，制成每1ml含抱子數(shù)小于100cfu的抱子懸液。6.4.7 上述菌懸液制備后假設(shè)在室溫下放置，應(yīng)在2小時使用；假設(shè)保存在28C,可在24使用。6.5

11、 供試液制備：取樣品10g,參加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白月東緩沖液100ml,為1: 10供試液。7.計數(shù)方法的驗證：7.1 需氧菌、霉菌及酵母菌計數(shù)平皿法所加菌液的體積不得超過供試液體積的1%。為確認(rèn)供試品中的微生物能被充分檢出，首先應(yīng)選擇最低稀釋級的供試液進展計數(shù)方法適用性檢查。7.2 試驗組取上述制備好的供試液，參加試驗菌液、混勻，使每 1ml供試液或每濾膜過濾的供試液中含菌量不大于100cfu。7.2.1 取的供試液9.9ml和小于10000cfu的銅綠假單胞菌菌懸液 0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即 傾注胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基1520ml,混勻，凝固，于3035c倒置培

12、養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備 2個平皿。7.2.2 取的供試液9.9ml和小于10000cfu的金黃色葡萄球菌菌懸液 0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立 即傾注胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基1520ml,混勻，凝固，于3035c倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備2個平皿。7.2.3 取的試液9.9ml和小于10000cfu的枯草芽抱桿菌菌懸液 0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾 注胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基 1520ml,混勻，凝固，于3035c倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備 2個平 皿。7.2.4 取的供試液9.9ml和小于10000cfu的白色念珠菌菌懸液 0.1ml混勻后，吸取1m

13、l注入平皿中，立即傾 注胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基 1520ml,混勻，凝固，于3035c倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備 2個平 皿。7.2.5 取的供試液9.9ml和小于10000cfu的黑曲霉菌懸液 0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰 酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基 1520ml,混勻，凝固，于3035c倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。平行制備2個平皿。7.2.6 取的供試液9.9ml和小于10000cfu的白色念珠菌菌懸液 0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾 注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 1520ml,混勻，凝固，于2025c倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。平行制備 2個平 皿。7.2.7 取

14、的供試液9.9ml和小于10000cfu的黑曲霉菌懸液 0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注沙 氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 1520ml,混勻，凝固，于 2025c倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。平行制備2個平皿。7.3 菌液組7.3.1 取小于100cfu的銅綠假單胞菌菌懸液、金黃色葡萄球菌菌懸液、枯草芽抱桿菌菌懸液、白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液各 1ml,注入平皿中，立即傾注胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基約1520ml,混勻，凝固，于3035c倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)。各平行制備 2個平皿。7.3.2 取小于100cfu的白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液各1ml,立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基各1520ml

15、,混勻，凝固，于 2025c倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。各平行制備2個平皿。7.4 供試品對照組7.4.1 取的供試液1ml,注入平皿中，分別立即傾注1520 ml溫度不超過45c胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基3035c倒置培養(yǎng)3天點計菌落數(shù)，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基2025c倒置培養(yǎng)5天點計菌落數(shù)。各組平行制備2個平皿。7.4 計算公式：稀釋劑對照組的回收率= 稀釋劑對照組菌落數(shù)-供試品對照組菌數(shù)X100%菌液組菌落數(shù)試驗組菌數(shù)回收率= 試驗組菌落數(shù)-供試品對照組菌數(shù)X 100%菌液組菌落數(shù)7.5 判定標(biāo)準(zhǔn)：實驗組、稀釋劑對照組的菌數(shù)回收率應(yīng)在0.5

16、2之間。假設(shè)各試驗菌的回收率均符合規(guī)定，照所用的供試液制備方法及計數(shù)方法進展該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。7.6 試驗結(jié)果表1平皿法驗證結(jié)果1#批號:實驗組別試驗菌種供試液對照組菌液組菌數(shù)試驗組菌數(shù)回收率1號2號1號2號金黃色葡萄球菌大腸埃布國枯草芽抱桿菌黑曲霉白色念珠菌表2平皿法驗證結(jié)果2#批號:實驗組別試驗菌種供試液對照組菌液組菌數(shù)試驗組菌數(shù)回收率1號2號1號2號金黃色葡萄球菌大腸埃布國枯草芽抱桿菌黑曲霉白色念珠菌表3平皿法驗證結(jié)果3#批號:實驗組別試驗菌種供試液對照組菌液組菌數(shù)試驗組菌數(shù)回收率1號2號1號2號金黃色葡萄球菌大腸埃布國枯草芽抱桿菌黑曲霉白色念珠菌結(jié)果說明:8.

17、控制菌檢查方法驗證1大腸埃希菌取1: 10供試液10ml兩份，分別參加兩瓶 100ml胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基，其中一瓶參加 1ml大腸埃 希菌液不大于 100cfu/ml為試驗組；一瓶為供試品；另取一瓶 100ml胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基參加 10ml 無菌氯化鈉-蛋白月東緩沖液為陰性對照。取上述培養(yǎng)物1ml,接種至含100ml麥康凱液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，4244c培養(yǎng)2448小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上3035c培養(yǎng)1872小時。表10大腸埃希菌常規(guī)法驗證結(jié)果1#批號：步驟實驗組陽性對照組陰性對照組胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基，3035 C培養(yǎng)1824小時麥康凱液體培養(yǎng)基，4244c

18、培養(yǎng)2448小時取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，3035c培養(yǎng)1872小時。假設(shè)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上后菌落生長，應(yīng)進展別離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希菌.；假設(shè)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒后菌落生長，或雖后菌落生長但鑒定結(jié)果為 陰性，判未檢出大腸埃希菌。表11大腸埃希菌常規(guī)法驗證結(jié)果2#批號:步驟實驗組陽性對照組陰性對照組胰酪大豆月東液體培養(yǎng)基，3035 C培養(yǎng)1824小時麥康凱液體培養(yǎng)基，4244c培養(yǎng)2448小時取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，3035c培養(yǎng)1872小時。假設(shè)麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上后菌落生長，應(yīng)進展別離、純化及適宜的鑒定試驗，確證是否為大腸埃希