電針對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠血清白介素-6含量的影響

1、 電針對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠血清白介素-6含量的影響王福菊 丁霜紅 李冬臨 李佳儀 王晶指導(dǎo)老師：趙英俠 摘要 通過電針12月齡SD雌性大鼠，研究電針對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠血清白介素-6含量的影響。已往在體實(shí)驗(yàn)研究顯示，針刺可抑制病理性過度骨吸收，表現(xiàn)為骨質(zhì)疏松大鼠尿鈣/肌酐、尿羥脯氨酸/肌酐值明顯下降。離體實(shí)驗(yàn)證實(shí)，骨質(zhì)疏松大鼠電針后血清可促進(jìn)破骨細(xì)胞凋亡，減少其數(shù)量，抑制其在骨片上形成的吸收陷窩的數(shù)量和面積。為了探討針刺對(duì)破骨細(xì)胞功能調(diào)節(jié)作用的血清學(xué)機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用放射免疫分析法（RIA）檢測電針后大鼠血清白介素-6含量關(guān)鍵詞針刺；骨質(zhì)疏松癥；白介素-61 材料與方法1.1主要儀器設(shè)備與試劑華佗牌SDZ-

2、型電子針療儀：蘇州醫(yī)療用品有限公司產(chǎn)品80-2型離心沉淀器：上海手術(shù)器械廠 大鼠白介素-6放射免疫測定試劑盒：美國產(chǎn)品，上海軒昊科技發(fā)展有限公司提供華佗牌不銹鋼毫針（規(guī)格0.38mm×13mm）剪毛剪刀，酒精棉球，無水酒精，干棉球，彎頭止血鉗、10ml離心管，毛細(xì)吸管，1.5ml Eppendorf管，普通冰箱。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組清潔級(jí)12月齡SD雌性大鼠(體重407.25±48.12 g):由上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。合格證號(hào)：SCXK（滬）2003-0002。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組和電針組，每組6只，其中對(duì)照組不予任何處理，電針組電針1個(gè)療程。1.3 針刺

3、方法取腎俞、脾俞、足三里（均雙側(cè)）。取穴參照人體穴位及南京中醫(yī)藥研究所華興邦等制定的大白鼠取穴標(biāo)準(zhǔn)1及實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（大白鼠）常用腧穴簡表2進(jìn)行定穴：于第11胸椎下旁開5mm處取脾俞；于第2腰椎下旁開5mm處取腎俞；于膝關(guān)節(jié)后外側(cè)腓骨小頭下5mm處取足三里穴。常規(guī)消毒皮膚，以0.38mm×13mm不銹鋼毫針進(jìn)行針刺，脾俞、腎俞。接華佗牌SDZ-型電子針療儀，疏密波，2Hz，強(qiáng)度以大鼠肌肉輕微抖動(dòng)為宜，每次電針15min，每日1次，14次為一療程，針刺1個(gè)療程。1.4血清制備及指標(biāo)檢測各組大鼠于療程結(jié)束后活體狀態(tài)下摘除雙側(cè)眼球取血，4冰箱靜置2h，離心3000rpm，20min，收

4、集血清，取0.3ml分裝于Eppendorf管中，用酶聯(lián)免疫（ELISA）法測定血清白介素-6含量，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)兩組大鼠的測量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±S）表示，兩組均數(shù)之間比較采用t檢驗(yàn)。2 結(jié)果2.1各組大鼠子宮重量情況與正常對(duì)照組相比,電針14天后電針組大鼠子宮重量增加,但兩方之間比較無顯著性差異(P>0.05) (見表1)表1 電針對(duì)大鼠子宮重量（g）的影響組別例數(shù)子宮重量對(duì)照組60491167電針組604056672.2各組大鼠血清白介素-6含量水平與正常對(duì)照組相比,電針14天

5、后電針組大鼠血清白介素-6含量增高, 但兩方之間比較無顯著性差異(P>0.05) (見表2)表2 電針對(duì)大鼠血清IL-6（pg/ml，±S)含量的影響組別例數(shù)IL-6對(duì)照組691.68±15.49電針組694.01±30.773 討論3.1 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的中醫(yī)病因病機(jī)及針刺選穴處方原則絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥臨床主要表現(xiàn)為疼痛、身長縮短、駝背、骨折，根據(jù)其臨床癥狀和體征，多數(shù)學(xué)者將其歸于中醫(yī)學(xué)中的“骨痿”、“骨枯”、“骨痹”范疇。 中醫(yī)學(xué)關(guān)于腎與骨的關(guān)系早有論述，如素問·六節(jié)藏象論記載：“腎者，主蟄，封藏之本，精之處也，其充在骨?！贬t(yī)精經(jīng)義曰：“腎藏精

6、，精生髓，髓養(yǎng)骨，故骨者，腎之所合也；髓者，腎精所生，精足則髓足，髓在骨內(nèi)，髓足者則骨強(qiáng)。”故有“腎主骨，生髓”之說。腎為先天之本，脾為后天之本，腎中精氣需賴后天脾胃運(yùn)化之水谷精微的化生充養(yǎng)，脾虛可導(dǎo)致腎虛及骨髓空虛乏力。另外，本病的發(fā)生也與督脈有關(guān)。督脈循行于脊里，入絡(luò)于腦，腦為髓之海；督脈的第二、三分支又分別屬于腎或聯(lián)絡(luò)于腎。根據(jù)上述病因病機(jī)，本實(shí)驗(yàn)以補(bǔ)腎健脾，活血通絡(luò)為治療原則，取足太陽膀胱經(jīng)上腎與脾的背俞穴腎俞、脾俞，配以具有健脾和胃功能的足三里。3.2 針刺方法及電針參數(shù)的選擇 已有臨床3與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)4研究資料表明，電針治療骨質(zhì)疏松癥療效肯定，同時(shí)電針較手針便于控制刺激因素，故在實(shí)驗(yàn)研

7、究中廣泛采用。 電針刺激參數(shù)是影響針刺療效和改變針效機(jī)制的重要因素，電針的不同刺激參數(shù)所包含的刺激因素引起的反應(yīng)及其反應(yīng)機(jī)制可能有所不同，各種參數(shù)之間不同的組合也可能影響到針刺的效應(yīng)。因此應(yīng)用電針治療，刺激參數(shù)的選擇是關(guān)鍵。電針刺激參數(shù)的選擇有兩種方法，一是選擇電針刺激波形（連續(xù)波、間斷波、疏密波）、電流強(qiáng)度（mA）頻率（Hz，根據(jù)波形而定）一至二或三個(gè)參數(shù)進(jìn)行組合，二是以受試動(dòng)物的肢體受電針刺激后引起的被動(dòng)活動(dòng)程度為指標(biāo)，有些文獻(xiàn)兼用這兩種指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道5，選擇疏密波，2Hz，強(qiáng)度以大鼠肌肉輕微抖動(dòng)為宜。3.3白介素-6與骨代謝的關(guān)系大量體內(nèi)外研究結(jié)果表明，白介素-6（IL-6

8、）對(duì)骨代謝有很重要的調(diào)節(jié)作用，是體內(nèi)復(fù)雜的細(xì)胞因子的關(guān)鍵成分之一。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥婦女血清中IL-6水平不僅明顯高于正常對(duì)照組，而且與骨密度呈負(fù)相關(guān)，從臨床上證實(shí)IL-6參與了絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制6。雌二醇通過抑制IL-6的基因轉(zhuǎn)錄，從而抑制IL-6的合成和分泌，故婦女絕經(jīng)后雌激素水平下降，對(duì)IL-6的監(jiān)控失調(diào)，IL-6水平升高，活性增強(qiáng)，進(jìn)而刺激破骨細(xì)胞前體細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒斓钠乒羌?xì)胞，使成熟的破骨細(xì)胞數(shù)量顯著增加，并增加其活性，從而明顯地刺激骨吸收，最終導(dǎo)致骨質(zhì)疏松7。3.4 電針對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠血清IL-6含量的影響羅小光等8、劉國中等9于取6月齡未生育Wistar大鼠手術(shù)去除雙側(cè)卵巢制

9、備骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型，造模1周后開始用耳針與補(bǔ)腎食療方治療，耳針取腎、脾兩穴，皮內(nèi)針埋入（每日檢查，發(fā)現(xiàn)脫落立即補(bǔ)上），隔3日左右兩耳互換；補(bǔ)腎食療方為淫羊藿、骨碎補(bǔ)與六味地黃湯等十幾種中藥混合加工濃縮而成，20%普通飼料加80%補(bǔ)腎食療方，或按成人用量的10倍加入每日飼料中喂飼動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取血清檢測IL-6。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠血清IL-6升高，耳針與六味地黃丸加味組大鼠血清IL-6接近假手術(shù)組，與模型組比較有明顯差異（P0.01）。 本實(shí)驗(yàn)采用12月齡雌性SD大鼠，原設(shè)計(jì)去除雙側(cè)卵巢制備骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，分為假手術(shù)組、模型組和針刺組，3天后開始針刺，3個(gè)療程（3個(gè)月）后取血檢測指標(biāo)

10、。具體實(shí)驗(yàn)時(shí)動(dòng)物訂購數(shù)量不足，加上經(jīng)費(fèi)及時(shí)間有限，因此僅分為對(duì)照組與針刺組，連續(xù)針刺14天后取血收集血清檢測IL-6含量。結(jié)果顯示，針刺組與對(duì)照組比較無顯著性差異。導(dǎo)師課題組以往實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，針刺對(duì)12月齡未去除卵巢大鼠血清雌二醇含量也無明顯影響。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：一、12月齡雌性大鼠作為自然骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型不穩(wěn)定；二、中醫(yī)臨床注重辨證施治，某些療法（針刺、中藥等）可能在某一證候存在的前提下（即某種特定的機(jī)體狀態(tài)下）才體現(xiàn)出療效作用。至于針刺對(duì)去除雙側(cè)卵巢造成的實(shí)驗(yàn)性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型血清IL-6含量有何影響，有待今后的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步探討。參考文獻(xiàn)1. 鄧春雷，殷克敬實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)北京：人民

11、衛(wèi)生出版社，1998,1472. 華興邦大鼠穴位圖譜的研制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，1991,11 3. 金肖青，文曉林，于澎，等電針治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥臨床32例分析中醫(yī)藥學(xué)刊，2003,21(4)5164. 王艷君，胡朝陽，李愛英，等電針不同穴位對(duì)去卵巢大鼠骨代謝的影響中國臨床康復(fù)，2002,6(23)35425. 蒯樂，楊華元電針參數(shù)定量化的實(shí)驗(yàn)與臨床研究進(jìn)展中國臨床康復(fù)，2002,6(15)22246. 陳紅英，萬天真絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥與血清IL-6、雌激素濃度關(guān)系的臨床研究河南大學(xué)學(xué)報(bào)，2001,20(3)247. Ledger GA, Burritt MF, Kao PC, et al. Abnormalities of parathyroid hormone secretion in elderly wemen that are reversible by short term therapy with 1,25-dihydr