電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素的影響

1、電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素的影響    功能性消化不良（functional dyspepsia，論文代發(fā)FD）是慢性持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的上腹痛或不適、腹脹、噯氣、早飽、厭食、惡心、嘔吐、燒心、胸骨后隱痛或反胃等，病程超過12周以上，經(jīng)各項(xiàng)檢查排除器質(zhì)性疾病的一組消化內(nèi)科的臨床癥候群1?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用促動(dòng)力藥、質(zhì)子泵抑制劑、粘膜保護(hù)劑和抗抑郁劑等藥物治療2，中醫(yī)藥多施以針灸和調(diào)理脾胃的方藥，如調(diào)和脾胃之代表方劑半夏瀉心湯。本研究觀察了電針和半夏瀉心湯單用及合用對(duì)FD模型大鼠血漿、胃竇及下丘腦組織中胃動(dòng)素（motilin，MTL）含量的影響，現(xiàn)

2、報(bào)道如下。 1 材料與方法 1.1 動(dòng)物與分組 健康成年SD大鼠，共60只，體質(zhì)量為180250g，雌雄不拘，由安徽省全椒安立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（蘇）2002-0002。大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，即正常對(duì)照組（常規(guī)飼養(yǎng)，未作任何處理）、模型組（夾尾刺激處理造模）、西藥組（造模后給予2.82g·kg-1· d-1枸櫞酸莫沙必利水溶液灌胃治療，連續(xù)7 d）、電針組（造模后給予電針治療）、中藥組（造模后給予中藥灌胃治療）、電針加中藥組（造模后給予電針及中藥灌胃治療）。 1.2 藥品與儀器 氨基甲酸乙酯（烏拉坦），批號(hào)960101，由上?；瘜W(xué)試劑

3、采購(gòu)供應(yīng)站提供；PCE程控電針治療儀，由安徽中醫(yī)學(xué)院針灸經(jīng)絡(luò)研究所研制；MTL放免藥盒，由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所（原北京東亞免疫技術(shù)研究所）提供。 1.3 FD模型復(fù)制 參照文獻(xiàn)3介紹的方法，采用夾尾刺激引發(fā)大鼠打斗。結(jié)果大鼠出現(xiàn)緊張、焦慮反應(yīng)，進(jìn)食量明顯減少，毛色變暗、枯黃、不順，與上述文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，說明造模成功。 1.4 中藥制備 半夏瀉心湯水煎劑所用中藥購(gòu)自安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥房，經(jīng)安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥教研室鑒定，均為正品。生藥劑量比例按原方根據(jù)文獻(xiàn)4方法換算，取人用劑量（3.3g/kg）的10倍。藥物以蒸餾水煎煮30min，提取2次，合并煎液并過濾，水浴加熱蒸發(fā)濃

4、縮為1g/mL，貯于冰箱中備用。造模后以33g·kg-1·d-1劑量開始給藥，每日1次灌胃，連續(xù)7 d。 1.5 電針處理 造模后，將大鼠放置于特制的固定器內(nèi)，動(dòng)物保持清醒安靜狀態(tài)，根據(jù)"大鼠穴位圖譜"（江蘇省中醫(yī)藥研究所華興幫研究員等用模擬骨度法繪制而成），選取大鼠雙側(cè)"足三里"穴（ST36）為針刺穴位。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)將大鼠左右后肢膝關(guān)節(jié)外下方（即腓骨小頭下方）體毛除去，確定穴位（腓骨小頭下方5mm處）后用苦味酸作標(biāo)記，1寸毫針刺入。以電針儀給予電刺激，頻率為20100 Hz的疏密波混頻刺激，輸出電壓46 V，以大鼠下肢輕微顫抖為度，持

5、續(xù)電針20min，每日1次，連續(xù)7 d。 1.6 取材 禁食24 h，取材前用氨基甲酸乙酯（烏拉坦）1.0g·kg-1腹腔注射麻醉大鼠后，進(jìn)行標(biāo)本采集。 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2007年第24卷第5期方正清，等.電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素的影響1.6.1 血液采集 打開腹腔，由腹主動(dòng)脈采血；取血1.5 mL置于含100g/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）30L和抑肽酶30L試管中混勻，室溫放置20min，4、3 500r/min離心20min，取血漿-20保存，用于測(cè)定血漿MTL的含量。 1.6.2 胃、腸組織采集 取近幽門部胃竇組織，用電子天平迅速稱質(zhì)量后以m胃組

6、織：V生理鹽水=15的比例放入煮沸的生理鹽水中繼續(xù)煮沸3min，加入1mol/L冰醋酸0.5mL于勻漿器中制成勻漿，放置12h，再用相應(yīng)體積的1mol/L NaHCO3中和，4、3 000r/min離心30min，取上清液，-20保存，用于測(cè)定胃竇組織中MTL的含量。取空腸起始段近端腸組織，迅速稱質(zhì)量后制成勻漿（方法同胃竇組織），4、3 000r/min離心30min，取上清液，-20保存，用于測(cè)定腸組織中MTL的含量。 1.6.3 腦組織采集 快速剝離大鼠腦組織，按照文獻(xiàn)5所標(biāo)記的相應(yīng)位置，在冰盤上切取大鼠下丘腦，迅速稱質(zhì)量后制成勻漿（方法同胃竇組織），于4、3 000r/min離心30mi

7、n，取上清液，-20保存，用于測(cè)定下丘腦組織中MTL含量。 1.7 檢測(cè)方法 采用放射免疫法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書方法進(jìn)行。 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS for Windows 11.0軟件分析。 2 結(jié)果 表1結(jié)果顯示，模型組血漿、胃竇組織、空腸組織、下丘腦組織中的MTL含量下降，與正常對(duì)照組比較，差異有顯著性意義（P0.05或P0.01）；各治療組與模型組比較，血漿、胃竇組織、空腸組織及下丘腦組織MTL含量均顯著性升高（P0.01）；電針組胃竇組織MTL含量及電針組、中藥組下丘腦組織MTL含量與電針加中藥組比較，差異均有顯著性意義（P0.01）。 3 討論  

8、  FD發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，可能與胃動(dòng)力障礙、胃感覺異常、胃腸電節(jié)律紊亂和社會(huì)心理功能障礙等胃源性因素關(guān)系密切，其發(fā)病機(jī)制的研究焦點(diǎn)是胃腸動(dòng)力學(xué)。盡管FD可能為一組異常情況下的癥狀表現(xiàn)，但動(dòng)力紊亂在其病理生理中具有重要的意義。表1 各組FD大鼠血漿和胃竇、空腸及下丘腦組織中MTL含量的比較FD患者中約50伴有胃腸動(dòng)力紊亂，有餐后胃排空遲緩和胃動(dòng)力低下，或下食管括約?。↙ES）壓力減低，胃肌電異常（節(jié)律障礙），幽門機(jī)能不協(xié)調(diào)，并有腸道運(yùn)動(dòng)或膽道運(yùn)動(dòng)障礙等。胃腸運(yùn)動(dòng)障礙在FD中的發(fā)病作用已得到肯定。研究發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)哺乳動(dòng)物的胃腸道壁粘膜內(nèi)分泌細(xì)胞及中樞、外周和胃腸道壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)中存

9、在MTL。MTL是由22個(gè)氨基酸組成的多肽，其生理功能是促進(jìn)消化道運(yùn)動(dòng)，加速胃排空，對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)尤其對(duì)消化間期移行復(fù)合運(yùn)動(dòng)（interdigestive migrating motor complex，MMC）有重要調(diào)節(jié)作用，MTL常在MMC相達(dá)到高峰，參與MMC相收縮，被認(rèn)為是一種消化間期激素6-8。 中醫(yī)學(xué)將FD歸入"痞滿"、"胃痛"、"嘈雜"、"胃緩"等范疇。臨床上以肝胃不和多見，故本實(shí)驗(yàn)選擇此類模型。董建華教授9認(rèn)為FD應(yīng)從肝脾胃論治，脾虛是發(fā)病的基礎(chǔ)，肝郁是發(fā)病的條件，胃氣不降是引發(fā)諸癥的原因。健脾、疏肝、

10、降胃為基本治則。半夏瀉心湯是傷寒論中重要的和解方之一，由七味藥物組成，其中"半夏、干姜辛開而溫，以散脾氣之寒；黃芩、黃連苦瀉而寒，以降胃氣之熱；人參、甘草、大棗甘溫調(diào)補(bǔ)，和脾胃，補(bǔ)中氣，以復(fù)中焦升降功能，此即辛開苦降甘補(bǔ)之法"，具有和胃降逆、開結(jié)除痞的功能，廣泛用于胃腸道疾病的治療10。 李蕙等11在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，肝胃不和型FD大鼠不僅存在獨(dú)立的胃腸動(dòng)力障礙，胃竇、十二指腸協(xié)調(diào)收縮次數(shù)也顯著降低，與胃竇、十二指腸收縮變化不一致有關(guān)，是肝胃不和型FD一個(gè)重要的影響因素，并推測(cè)胃腸MMC相異常、胃腸協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)障礙可能是肝胃不和型FD的發(fā)病機(jī)制之一。本研究結(jié)果表明，模型組大鼠血漿和下

11、丘腦及胃腸組織內(nèi)MTL含量較正常對(duì)照組顯著性降低（P0.05或P0.01），提示模型組大鼠胃動(dòng)力障礙，胃節(jié)律紊亂，胃動(dòng)力低下；由于結(jié)腸功能紊亂，動(dòng)力障礙，可表現(xiàn)腹瀉或便秘樣結(jié)腸動(dòng)力傳輸改變12，與李惠等的結(jié)論基本一致。電針刺激足三里穴、中藥復(fù)方半夏瀉心湯灌胃可改善FD大鼠胃腸電節(jié)律，增強(qiáng)FD大鼠的胃電活動(dòng)，有效地改善胃、結(jié)腸動(dòng)力，協(xié)調(diào)胃、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)12。而電針加中藥聯(lián)合干預(yù)組下丘腦組織MTL含量顯著性高于中藥和電針單因素干預(yù)組，提示電針和中藥對(duì)FD大鼠下丘腦組織MTL的調(diào)節(jié)有協(xié)同作用。各組FD大鼠血漿和下丘腦及胃腸組織內(nèi)MTL含量的變化，提示電針和半夏瀉心湯對(duì)FD大鼠胃腸電的調(diào)整作用可能是通過刺

12、激中樞和（或）外周釋放MTL，而MTL作為調(diào)節(jié)因子可傳遞信息。針刺足三里穴后，針感傳入到下丘腦特定結(jié)構(gòu)中的胃動(dòng)素能神經(jīng)元以及相關(guān)肽能神經(jīng)和神經(jīng)遞質(zhì)，再激活外周腸神經(jīng)系統(tǒng)胃動(dòng)素能神經(jīng)元，啟動(dòng)胃腸運(yùn)動(dòng)，改善協(xié)調(diào)胃腸運(yùn)動(dòng)。電針足三里穴和中藥復(fù)方半夏瀉心湯可調(diào)整血漿、胃腸及下丘腦組織中MTL水平，改善胃運(yùn)動(dòng)功能，其確切機(jī)制有待進(jìn)一步探討。 1Gschossmann J M，Hanag S，Holtmann G.Epidemiological trends of functional gastrointestinal disorders J.Dig Dis Sci，2001，19（3）：189. 2中華

13、醫(yī)學(xué)會(huì)消化病分會(huì)胃腸動(dòng)力學(xué)組.我國(guó)消化不良的診治流程和指南J.中華消化雜志，2000，20（4）：264. 3郭海軍，林潔，李國(guó)成，等.功能性消化不良的動(dòng)物模型研究J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2001，9（3）：141. 4徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：1136. 5包新民，舒斯云.大鼠腦立體定位圖譜M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：83. 6Malagelada J R.Functional dyspepsia.Insights on mechanisms and management strategies J.Gastroenterol Clin No

14、rth Am，1996，25（1）：103. 7Berstad A，Hausken T，Gilja O H，et al.Ultrasonography of the human stomachJ.Scand J Gastrointerol，1996，220(Suppl)：75. 8周呂，柯美云.胃腸動(dòng)力學(xué)M.北京：科學(xué)出版社，1999：51. 9王長(zhǎng)洪.著名中醫(yī)學(xué)家董建華教授學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)系列之一：功能性消化不良的論治經(jīng)驗(yàn)J.遼寧中醫(yī)雜志，1999，26（7）：289. 10劉渡舟.傷寒論詮解M.天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1983：96. 11李蕙，李國(guó)成.肝胃不和型功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素和p物質(zhì)

15、的表達(dá)及中藥情志舒的干預(yù)作用J.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2003，11（1）：12. 12方正清，申國(guó)明，徐穎，等.電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃腸電圖的影響J.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24（1）：14.    功能性消化不良（functional dyspepsia，F(xiàn)D）是慢性持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的上腹痛或不適、腹脹、噯氣、早飽、厭食、惡心、嘔吐、燒心、胸骨后隱痛或反胃等，病程超過12周以上，經(jīng)各項(xiàng)檢查排除器質(zhì)性疾病的一組消化內(nèi)科的臨床癥候群1?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用促動(dòng)力藥、質(zhì)子泵抑制劑、粘膜保護(hù)劑和抗抑郁劑等藥物治療2，中醫(yī)藥多施以針灸和調(diào)理脾胃的

16、方藥，如調(diào)和脾胃之代表方劑半夏瀉心湯。本研究觀察了電針和半夏瀉心湯單用及合用對(duì)FD模型大鼠血漿、胃竇及下丘腦組織中胃動(dòng)素（motilin，MTL）含量的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。 1 材料與方法 1.1 動(dòng)物與分組 健康成年SD大鼠，共60只，體質(zhì)量為180250g，雌雄不拘，由安徽省全椒安立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（蘇）2002-0002。大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，即正常對(duì)照組（常規(guī)飼養(yǎng)，未作任何處理）、模型組（夾尾刺激處理造模）、西藥組（造模后給予2.82g·kg-1· d-1枸櫞酸莫沙必利水溶液灌胃治療，連續(xù)7 d）、電針組（造模后給予電針治療）

17、、中藥組（造模后給予中藥灌胃治療）、電針加中藥組（造模后給予電針及中藥灌胃治療）。 1.2 藥品與儀器 氨基甲酸乙酯（烏拉坦），批號(hào)960101，由上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站提供；PCE程控電針治療儀，由安徽中醫(yī)學(xué)院針灸經(jīng)絡(luò)研究所研制；MTL放免藥盒，由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所（原北京東亞免疫技術(shù)研究所）提供。 1.3 FD模型復(fù)制 參照文獻(xiàn)3介紹的方法，采用夾尾刺激引發(fā)大鼠打斗。結(jié)果大鼠出現(xiàn)緊張、焦慮反應(yīng)，進(jìn)食量明顯減少，毛色變暗、枯黃、不順，與上述文獻(xiàn)報(bào)道基本一致，說明造模成功。 1.4 中藥制備 半夏瀉心湯水煎劑所用中藥購(gòu)自安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥房，經(jīng)安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥教研室

18、鑒定，均為正品。生藥劑量比例按原方根據(jù)文獻(xiàn)4方法換算，取人用劑量（3.3g/kg）的10倍。藥物以蒸餾水煎煮30min，提取2次，合并煎液并過濾，水浴加熱蒸發(fā)濃縮為1g/mL，貯于冰箱中備用。造模后以33g·kg-1·d-1劑量開始給藥，每日1次灌胃，連續(xù)7 d。 1.5 電針處理 造模后，將大鼠放置于特制的固定器內(nèi)，動(dòng)物保持清醒安靜狀態(tài)，根據(jù)"大鼠穴位圖譜"（江蘇省中醫(yī)藥研究所華興幫研究員等用模擬骨度法繪制而成），選取大鼠雙側(cè)"足三里"穴（ST36）為針刺穴位。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)將大鼠左右后肢膝關(guān)節(jié)外下方（即腓骨小頭下方）體毛除去，確定穴位

19、（腓骨小頭下方5mm處）后用苦味酸作標(biāo)記，1寸毫針刺入。以電針儀給予電刺激，頻率為20100 Hz的疏密波混頻刺激，輸出電壓46 V，以大鼠下肢輕微顫抖為度，持續(xù)電針20min，每日1次，連續(xù)7 d。 1.6 取材 禁食24 h，取材前用氨基甲酸乙酯（烏拉坦）1.0g·kg-1腹腔注射麻醉大鼠后，進(jìn)行標(biāo)本采集。 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2007年第24卷第5期方正清，等.電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素的影響1.6.1 血液采集 打開腹腔，由腹主動(dòng)脈采血；取血1.5 mL置于含100g/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）30L和抑肽酶30L試管中混勻，室溫放置20min，4、

20、3 500r/min離心20min，取血漿-20保存，用于測(cè)定血漿MTL的含量。 1.6.2 胃、腸組織采集 取近幽門部胃竇組織，用電子天平迅速稱質(zhì)量后以m胃組織：V生理鹽水=15的比例放入煮沸的生理鹽水中繼續(xù)煮沸3min，加入1mol/L冰醋酸0.5mL于勻漿器中制成勻漿，放置12h，再用相應(yīng)體積的1mol/L NaHCO3中和，4、3 000r/min離心30min，取上清液，-20保存，用于測(cè)定胃竇組織中MTL的含量。取空腸起始段近端腸組織，迅速稱質(zhì)量后制成勻漿（方法同胃竇組織），4、3 000r/min離心30min，取上清液，-20保存，用于測(cè)定腸組織中MTL的含量。 1.6.3 腦

21、組織采集 快速剝離大鼠腦組織，按照文獻(xiàn)5所標(biāo)記的相應(yīng)位置，在冰盤上切取大鼠下丘腦，迅速稱質(zhì)量后制成勻漿（方法同胃竇組織），于4、3 000r/min離心30min，取上清液，-20保存，用于測(cè)定下丘腦組織中MTL含量。 1.7 檢測(cè)方法 采用放射免疫法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書方法進(jìn)行。 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS for Windows 11.0軟件分析。 2 結(jié)果 表1結(jié)果顯示，模型組血漿、胃竇組織、空腸組織、下丘腦組織中的MTL含量下降，與正常對(duì)照組比較，差異有顯著性意義（P0.05或P0.01）；各治療組與模型組比較，血漿、胃竇組織、空腸組織及下丘腦組織MTL含量均顯著性升高（P

22、0.01）；電針組胃竇組織MTL含量及電針組、中藥組下丘腦組織MTL含量與電針加中藥組比較，差異均有顯著性意義（P0.01）。 3 討論 FD發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，可能與胃動(dòng)力障礙、胃感覺異常、胃腸電節(jié)律紊亂和社會(huì)心理功能障礙等胃源性因素關(guān)系密切，其發(fā)病機(jī)制的研究焦點(diǎn)是胃腸動(dòng)力學(xué)。盡管FD可能為一組異常情況下的癥狀表現(xiàn)，但動(dòng)力紊亂在其病理生理中具有重要的意義。表1 各組FD大鼠血漿和胃竇、空腸及下丘腦組織中MTL含量的比較FD患者中約50伴有胃腸動(dòng)力紊亂，有餐后胃排空遲緩和胃動(dòng)力低下，或下食管括約肌（LES）壓力減低，胃肌電異常（節(jié)律障礙），幽門機(jī)能不協(xié)調(diào)，并有腸道運(yùn)動(dòng)或膽道運(yùn)動(dòng)障礙等。胃腸運(yùn)動(dòng)障礙

23、在FD中的發(fā)病作用已得到肯定。研究發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)哺乳動(dòng)物的胃腸道壁粘膜內(nèi)分泌細(xì)胞及中樞、外周和胃腸道壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)中存在MTL。MTL是由22個(gè)氨基酸組成的多肽，其生理功能是促進(jìn)消化道運(yùn)動(dòng)，加速胃排空，對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)尤其對(duì)消化間期移行復(fù)合運(yùn)動(dòng)（interdigestive migrating motor complex，MMC）有重要調(diào)節(jié)作用，MTL常在MMC相達(dá)到高峰，參與MMC相收縮，被認(rèn)為是一種消化間期激素6-8。 中醫(yī)學(xué)將FD歸入"痞滿"、"胃痛"、"嘈雜"、"胃緩"等范疇。臨床上以肝胃不和多見，故本實(shí)驗(yàn)選擇此類模型。董建華教授9認(rèn)為FD應(yīng)從肝脾胃論治，脾虛是發(fā)病的基礎(chǔ)，肝郁是發(fā)病的條件，胃氣不降是引發(fā)諸癥的原因。