液相色譜的應(yīng)用以及方法開(kāi)發(fā)

1、碳水化合物類(lèi)脂化合物、甘油三酸酯、膽固醇脂肪酸和有機(jī)酸蛋白、肽、氨基酸酸味劑、甜味劑、香精、乳化劑抗氧化劑、防腐劑顏料和染料（色素維生素霉菌（黃曲霉毒素農(nóng)藥殘留和獸藥殘留多環(huán)芳烴（PAHS和亞硝酸v 在無(wú)機(jī)離子分析中應(yīng)用在無(wú)機(jī)離子分析中應(yīng)用飲用水、酸雨、土壤中陰離子和陽(yáng)離子分析飲用水、酸雨、土壤中陰離子和陽(yáng)離子分析 Adapted from: Snyder, L.R.; Kirkland, J.J.; Glajch, J.L; Practical HPLC Method Development 2nd Ed., Wiley-Interscience, New York, 1997, p. 26

2、:1NS通用檢測(cè)器通用檢測(cè)器 RI ELSDMS靈敏度ugngpg線(xiàn)性范圍104否103流速敏感是否是溫度敏感是否否破壞性否是是選擇性檢測(cè)器選擇性檢測(cè)器 ABSFLEC Cond MS靈敏度ngpgfgpgpg線(xiàn)性范圍105103106105103流速敏感否否是是是溫度敏感否否是是是破壞性否否是否是v 大多數(shù)有機(jī)化合物有一定程度的吸光度，可大多數(shù)有機(jī)化合物有一定程度的吸光度，可以測(cè)定大多數(shù)的化合物，是目前實(shí)驗(yàn)室中使用最以測(cè)定大多數(shù)的化合物，是目前實(shí)驗(yàn)室中使用最多的檢測(cè)器多的檢測(cè)器 -多數(shù)公司售出的檢測(cè)器中多數(shù)公司售出的檢測(cè)器中75%以上是吸以上是吸光度檢測(cè)器（其中光度檢測(cè)器（其中50%以上是紫

3、外以上是紫外/可見(jiàn)檢可見(jiàn)檢測(cè)器，測(cè)器，25%是是PDA）實(shí)際濃度濃度理想10吸光度吸光度210光電二極管矩陣檢測(cè)器光電二極管矩陣檢測(cè)器（ PDA ）的特點(diǎn)和用途）的特點(diǎn)和用途v 一種一種三維水平的吸光度檢測(cè)器三維水平的吸光度檢測(cè)器-采集三維譜圖采集三維譜圖v 兼顧紫外檢測(cè)器及可見(jiàn)分光光度計(jì)的信息兼顧紫外檢測(cè)器及可見(jiàn)分光光度計(jì)的信息 在收集色譜圖的同時(shí)，得到光譜圖在收集色譜圖的同時(shí)，得到光譜圖v 提供許多有用的功能提供許多有用的功能 - -色譜峰的純度鑒定，色譜峰的確認(rèn)色譜峰的純度鑒定，色譜峰的確認(rèn) - -可以發(fā)現(xiàn)單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)未測(cè)到的峰可以發(fā)現(xiàn)單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)未測(cè)到的峰 - -任意波長(zhǎng)的色譜再處理任

4、意波長(zhǎng)的色譜再處理 - -光譜信息光譜信息- -光譜庫(kù)的建立檢索和擬合光譜庫(kù)的建立檢索和擬合 氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑OOOOOOCH3黃曲霉毒素多環(huán)芳烴（PAH）OHCH3CH3CH3CH3CH3維生素OOONHCH3CH3CH3返回 通過(guò)改變流動(dòng)相的pH值，使樣品成中性 加入“對(duì)離子”，使樣品呈中性請(qǐng)記住請(qǐng)記住 每次改變一個(gè)參數(shù) 每次改變一個(gè)參數(shù) 色譜柱：C18，4.6mm15mm 流動(dòng)相：乙腈/水，乙腈從100%逐漸降低（或走梯度） 舉例中用不同的溶劑強(qiáng)度，60/40、50/50、40/60，由強(qiáng)漸弱 流速：1ml/min 對(duì)羥基苯甲酸甲酯(Methyl Paraben) 對(duì)羥基苯甲酸丙酯(P

5、ropyl Paraben) 對(duì)羥基苯甲酸丁酯(Butyl Paraben)60/4050/5040/60譜圖62:38 / 42:58 / 72:28 / 2322OHCNCHOHMeOHOHTHFCHOOHOCH3COONaCHOCOOHOCH31234烷基長(zhǎng)度不同，形成對(duì)離子的能力不同長(zhǎng)度內(nèi)徑，進(jìn)樣量初始初始現(xiàn)在現(xiàn)在初始LDLDLDLoadLoad22)()()(內(nèi)徑流速初始現(xiàn)在初始DDDFF22)()()(溶劑 A溶劑 B泵 A泵 B混合器A 高壓梯度溶劑 A泵溶劑 B比例閥（溶劑混合點(diǎn)）混合器B 低壓梯度（溶劑混合點(diǎn)）死體積/譜帶展寬體積(無(wú)色譜柱時(shí))滯后(系統(tǒng))體積滯后(系統(tǒng))體積

6、溶劑輸送系統(tǒng)(泵)檢測(cè)器進(jìn)樣器色譜柱色譜柱梯度混合器溶劑輸送系統(tǒng)(泵)高壓梯度注意注意 滯后體積包括進(jìn)樣器、阻尼滯后體積包括進(jìn)樣器、阻尼 器、混合器及其管路器、混合器及其管路比例閥檢測(cè)器進(jìn)樣器ABCD色譜柱色譜柱溶劑輸送系統(tǒng)(泵)低壓梯度 阻尼器 混合器實(shí)際梯度會(huì)比設(shè)置值晚 2 分鐘響應(yīng)，沒(méi)有問(wèn)題實(shí)際梯度會(huì)比設(shè)置值晚20 分鐘響應(yīng)，不能接受梯度百分比保留時(shí)間梯度曲線(xiàn)好的梯度滯后曲線(xiàn)保留時(shí)間梯度百分比不好的梯度滯后曲線(xiàn)固定滯后體積，改善了梯度性能普通的低壓梯度系統(tǒng)P680A LPG without pulse damperBack-pressure:60 bar, 85 bar and 105

7、barVariation: 2%Acclaim 120, C18, 5 m, 4.6 x 100 mm; 0.5 mL/min; 25C; 5 L injection volume; UV detection at 256 nm; Eluent (A) Water and (B) Acetonitril; Gradient: 30 % b to 100 % B in 10 min; Methyl-, Ethyl-, Propyl- and Butylparabene, 10 mg/L eachn早流出峰的分離度差.n遲流出峰的峰寬增加而峰高降低.n由于k范圍寬，所以分析時(shí)間長(zhǎng).n強(qiáng)保留組分造成

8、柱污染.等梯度洗脫等梯度洗脫 - 在洗脫樣品的整個(gè)過(guò)程中，流動(dòng)相的組成保持不變.優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 改善分離度 提高檢測(cè)性能 能夠分離復(fù)雜樣品 縮短分析時(shí)間 降低由于強(qiáng)保留組分而使色譜 柱性能變差的可能性其他應(yīng)用其他應(yīng)用 柱清洗 方法開(kāi)發(fā)中的嘗試運(yùn)行 梯度洗脫梯度洗脫 - 在分離過(guò)程中改變流動(dòng)相組成.10分鐘的梯度，6分鐘的平衡時(shí)間色譜圖不重復(fù)平衡時(shí)間6分鐘平衡時(shí)間7分鐘平衡時(shí)間8分鐘平衡時(shí)間9分鐘 平衡時(shí)間從6到7分鐘，第一個(gè)峰的保留時(shí)間有明顯的變化，說(shuō)明6到7分鐘的平衡時(shí)間不足，而8到9分鐘變化不大因而大于這個(gè)時(shí)間時(shí)，平衡充足。02468101214Time (min)5%/min1 ml/min- 5%/ml5%/min2.5 ml/min- 2%/mlnSolvents must be pure or ghost peaks will occur.nMake certain the buffer is soluble at final gradient mobile phase composition.nAllow time for column reconditioning between runs.Ghost