大黃靈仙膠囊對慢性肝損傷后膽結(jié)石形成的干預(yù)作用研究

1、大黃靈仙膠囊對慢性肝損傷后膽結(jié)石形成的干預(yù)作大黃靈仙膠囊對慢性肝損傷后膽結(jié)石形成的干預(yù)作用研究用研究作者：唐乾利，俞淵，黃名威，關(guān)中正，高善輝【摘要】【摘要】目的探討大黃靈仙膠囊對慢性肝損傷家兔膽結(jié)石形成的干預(yù)作用及其作用機(jī)制。方法將 46 只家兔隨機(jī)分為正常組、慢性肝損傷組、肝硬化組、大黃靈仙膠囊大劑量組、大黃靈仙膠囊小劑量組。采用皮下注射 CCl4 方法進(jìn)行慢性肝損傷造模,各組同時進(jìn)行不同處理。最后觀察各組膽囊成石率，肝臟功能生化指標(biāo)，肝組織病理改變、超微結(jié)構(gòu)改變，膽汁成分改變。結(jié)果慢性肝損傷組、肝硬化組膽石形成陽性檢出率較正常對照組顯著增加（P0.05 或 P0.01）。大黃靈仙膠囊大劑

2、量組、大黃靈仙膠囊小劑量組膽石陽性檢出率較肝硬化組有顯著降低(P0.01 或 P0.05)。各模型組中肝臟超微結(jié)構(gòu)均發(fā)生不同程度異常改變，大黃靈仙膠囊大、小劑量治療組肝臟病理改變、肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變較模型組比較均有改善，大劑量組尤為明顯。第一論文范文網(wǎng) 編輯。大黃靈仙膠囊大、小劑量組血清 AST，ALT，-GT，非結(jié)合膽紅素均明顯低于肝硬化組（P0.05 或 P0.01）；總膽紅素、間接膽紅素、鈣離子大黃靈仙膠囊大、小劑量組較肝硬化組明顯降低（P0.01），大劑量組較小劑量組明顯降低（P0.01）。結(jié)論大黃靈仙膠囊對慢性肝損傷后膽結(jié)石形成具有明顯的預(yù)防效果，其作用機(jī)制主要與抑制 CCl4 所致

3、肝臟損傷的作用有關(guān)，同時與大黃靈仙膠囊在多層次、多途徑調(diào)節(jié)參與結(jié)石形成各因素關(guān)系密切?！娟P(guān)鍵詞】【關(guān)鍵詞】慢性肝損傷； 肝硬化； 大黃靈仙膠囊； 膽結(jié)石； 肝臟超微結(jié)構(gòu)Abstract：ObjectiveTo study the interference effect and itsmechanism of Dahuanglinxian Capsules on gallstone formation afterchronic liver injury of rabbits. Methods46 rabbits were randomlydivided into 5 groups, respec

4、tively named by group A (normal controlgroup), group B (chronic liver injury group), group C (livercirrhosis group), group D (group fed with large dose Dahuanglinxiancapsule) and group E (group fed with large dose Dahuanglinxiancapsule). The chronic liver injured rabbits were induced bysubcutaneous

5、injection with CCl4 and each group was treated bydifferent factors at the same time. The gallstone formation rate,liver function biochemical index, pathological changes in livertissues, ultrastructural changes, and biliary component change wereobserved by the methods of biochemical and pathological

6、technology.ResultsThe gallstone formation rate of group B and C were obviouslyhigher than group A (P0.05 or P0.01). The gallstone formationrate of D and E were obviously lower than group C (P0.05 or P0.01). There were abnormal ultrastructural changes to certainextent in models B and C. Compared with

7、 the model groups, the D and Egroups improved the ultrastructural changes and pathological changes in liver tissues,especially D group. The level of AST，ALT，r-GT and indirectbilirubin in serum of groups D and E were obviously lower than groupC (P0.05 or P0.01). At the same time, the content of total

8、bilirubin, indirect bilirubin, Ca2+ of groups D and E were obviouslylower than group C (P0.01), the same of group D was lower than groupE (P0.01). ConclusionThe Dahuanglinxian capsules have significanteffect of preventing gallstone formation due to its protective effectto liver injury which is induc

9、ed by CCl4, and its association withregulations to many factors participating in the gallstone formationon multiple levels and ways.Key words： Chronic liver injury；Cirrhosis ofliver；Dahuanglinxian Capsule；Gallstones；Ultrastructure本實(shí)驗(yàn)利用 CCl4 皮下注射誘發(fā)家兔慢性肝損傷，在此基礎(chǔ)上觀察膽囊結(jié)石形成率，并用大黃靈仙膠囊組方煎劑進(jìn)行灌胃，通過觀察結(jié)石形成率，肝臟細(xì)

10、胞超微結(jié)構(gòu)的病理學(xué)改變，測定實(shí)驗(yàn)動物肝功能及膽汁成分并進(jìn)行膽汁培養(yǎng)，以探討大黃靈仙膠囊對家兔慢性肝損傷膽結(jié)石模型的干預(yù)治療作用。第一論文范文網(wǎng) WWW.11665.COM 整理。1 1材料與儀器材料與儀器1.1材料、儀器健康家兔，體質(zhì)量 2.53.0 kg，雌雄不拘，普通級，廣西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號 20060820。各生化試劑盒分別購于上海申能德賽診斷技術(shù)有限公司和伊利康生物技術(shù)有限公司。奧地利Biocell2010 酶標(biāo)儀、日立 H-500 透射電鏡、BX-50-32001 奧林巴斯光學(xué)顯微鏡、HPIAS-1000P 病理圖文分析系統(tǒng)等分別由廣西醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室、廣西中醫(yī)學(xué)

11、院一附院病理實(shí)驗(yàn)室提供。1.2藥品造模用藥：CCl4 分析純（將 CCl4 與花生油以 12.5 比例混合，37加熱使充分溶解，制成 40CCl4 溶液，）、膽固醇分析純，均為上海國藥集團(tuán)產(chǎn)品。受試用藥：大黃靈仙膠囊1 (生大黃 150 g，威靈仙 300g，芒硝 100 g，金錢草 300 g，枳殼 120 g，雞內(nèi)金 100 g，澤蘭 150 g，柴胡120 g，郁金 120 g，磁石 120 g，黃芪 300 g，甘草 50 g)，以上共計(jì) 1 930 g生藥，由廣西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑室提取 965 ml 濃縮藥液，并無菌密封瓶裝（生藥量為 2 g /ml）。2 2方法方法2.1動

12、物分組及處理方法健康家兔 46 只，體質(zhì)量 2.53.0 kg，雌雄不拘，適應(yīng)性喂養(yǎng) 1 周后隨機(jī)分為 5 組，即正常對照組 10 只、慢性肝損傷組 8只、肝硬化組 8 只、大黃靈仙膠囊大劑量組 10 只（用藥量相當(dāng)于成人用量的 3倍）、大黃靈仙膠囊小劑量組 10 只（用藥量相當(dāng)于成人用量）。正常對照組普食喂養(yǎng)，每日灌服生理鹽水 4 ml/kg；慢性肝損傷組采用“慢性肝損傷兔動物模型”的建立2，普食喂養(yǎng) 10 周后，每日灌服生理鹽水 4 ml/kg；肝硬化模型組造模方法2：家兔稱重后以 2 ml/kg 體質(zhì)量，將 40CCl4 溶液頸后皮下注射，每 4 天 1 次，以形成皮下丘狀突起為宜3。造

13、模后第 10 周開始每日灌服生理鹽水 8 ml/kg；大黃靈仙膠囊大、小劑量組第 10 周起每日灌服膽通膠囊提取液 8 ml/kg，4 ml/kg。普食喂養(yǎng)。2.2檢測指標(biāo)及方法2.2.1膽囊結(jié)石成石觀察結(jié)石判定標(biāo)準(zhǔn)為正常膽囊膽汁內(nèi)無有形成分。肉眼觀察膽汁內(nèi)有無棕黑色成型顆?；蚰嗌硺映恋恚荤R下觀察有無結(jié)石微?；蚪Y(jié)晶。2.2.2生化指標(biāo)檢測天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(-GT)采用速率法檢測；血清中總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、血清總膽固醇、總膽汁酸、膽汁總膽汁酸、總膽固醇采用化學(xué)比色法檢測；鈣離子含量采用乙二胺四乙酸二鈉法檢測；磷脂含量酶顯色法

14、檢測。2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用 SPSS14.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以s 表示，兩組間均數(shù)比較用 t 檢驗(yàn)；兩組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)；P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3 3結(jié)果結(jié)果3.1家兔膽囊結(jié)石發(fā)生情況結(jié)果見表 1。表 1膽石發(fā)生情況（略）3.2家兔肝臟病理改變光鏡下觀察，慢性肝損傷組（見圖 1，2）：纖維組織增生，肝細(xì)胞水腫，局部氣球樣變，膽管增生，少許淋巴細(xì)胞浸潤，匯管纖維間隔稍增寬。第一論文范文網(wǎng) 整理。肝硬化組（見圖 34）：見假小葉形成，小葉內(nèi)中央靜脈缺如，細(xì)胞排列紊亂，多數(shù)細(xì)胞水腫，局部氣球樣變，小膽管增生、伴有淋巴細(xì)胞浸潤。大黃靈仙大劑量組（見圖 56）：細(xì)胞排列規(guī)

15、則，少數(shù)肝細(xì)胞水腫，小葉結(jié)構(gòu)清晰，匯管區(qū)結(jié)構(gòu)正常，無炎性細(xì)胞浸潤，未見小膽管增生。大黃靈仙小劑量組（見圖 78）：肝細(xì)胞排列規(guī)則，中度水腫，局部氣球樣變，匯管區(qū)纖維增寬，膽管增生，少量淋巴細(xì)胞浸潤。3.3家兔電鏡肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變電鏡觀察：大黃靈仙小劑量治療組圖（見圖 912）：正常結(jié)構(gòu)可見，大量滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、大量膠原纖維。線粒體固縮，嵴可見。大黃靈仙大劑量治療組(見圖 1316)：正常結(jié)構(gòu)可見，糖原多，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)少，大量膠原纖維。核模較完整，線粒體多正常。3.4家兔血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(r-GT)含量分析結(jié)果見表 2。表

16、 2血清 AST，ALT，-GT 含量比較（略）3.5血清總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、間接膽紅素（IBIL）含量分析結(jié)果見表 3。表 3血清 TBIL，LDBI，LIBIL 含量比較（略）3.6家兔血清總膽固醇（TC）、總膽汁酸（TBA）、磷脂（PL）含量分析結(jié)果見表 4。表 4血清 TC、TBA、PL 含量比較（略）3.7家兔膽汁總膽固醇（TC）、磷脂（PL）、鈣離子(Ca2+)含量分析結(jié)果見表 5。表 5膽汁 TC、PL、Ca2+含量比較（略）3.8家兔膽汁總膽汁酸（TBA）、總膽紅素（TBIL）、間接膽紅素（IBIL）的含量分析結(jié)果見表 6。表 6膽汁 TBA、TBIL

17、 、IBIL 含量比較（略）4 4討論討論膽結(jié)石的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明，既往研究表明，膽結(jié)石的形成是多種因素綜合作用的結(jié)果。因此研究慢性肝損傷與膽石癥發(fā)生之間的關(guān)系有重要意義。膽結(jié)石伴有肝臟的組織學(xué)改變，尤其是膽管結(jié)石?？赡艿闹饕獧C(jī)制是膽道內(nèi)壓力升高，通過膽道炎癥、膽道梗阻等原因，使膽囊內(nèi)壓力升高，繼發(fā)膽道壓力升高，從而造成肝內(nèi)膽汁淤滯，導(dǎo)致肝細(xì)胞損害4,5。有學(xué)者認(rèn)為膽囊結(jié)石病伴隨的肝臟損害，很可能是膽囊結(jié)石的成因，它可能先于膽囊結(jié)石而存在，而膽囊結(jié)石病的反復(fù)發(fā)作可能反過來加重原發(fā)性肝損害， Chignard N6進(jìn)一步提出肝細(xì)胞合成分泌膽汁機(jī)制受損有可能是膽囊結(jié)石患者所存在的一系列肝膽

18、道病理狀態(tài)的啟動扳機(jī)。而肝臟的損害首先就表現(xiàn)在肝細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的改變上，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的減少和代償性增生表明催化膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸的 7羥化酶數(shù)量和活力有可能受到影響，以致于膽汁酸合成減少，從而造成膽汁中膽固醇與膽汁酸比例增高，增加了成石的機(jī)率7。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各模型組家兔的肝臟超微結(jié)構(gòu)均伴有不同程度的改變，存在有不同程度的膜破裂，質(zhì)漿中的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體水腫、變性，線粒體壞死，雙層模結(jié)構(gòu)消失，部分甚至有空泡樣變，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)部分?jǐn)嗔?，顆粒減少，溶酶體增加，肝細(xì)胞邊界模糊不清，細(xì)胞質(zhì)電子密度減少等各種相應(yīng)結(jié)構(gòu)改變。肝硬化組表現(xiàn)尤其明顯，AST 較慢性肝損傷組有著性差異（P0.0

19、1）；-GT 較慢性肝損傷組有明顯差異（P0.05）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肝硬化家兔膽囊結(jié)石發(fā)生率為 83.3，慢性肝損傷組膽囊結(jié)石發(fā)生率為 63，而正常對照組為 0。前兩者與正常對照組比較均有顯著差異（P0.05，P0.01）。肝硬化組與慢性肝損組比較，膽囊結(jié)石陽性檢出率沒有明顯差異，但肝硬化組膽囊膽汁可見有形成分較慢性肝損組明顯居多，且后者膽汁中以膽泥為主。目前已有實(shí)驗(yàn)證明膽泥形成是膽石形成的必經(jīng)階段8，肝硬化的病程越長，合并膽囊結(jié)石的危險(xiǎn)性越大，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果更進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)論。本實(shí)驗(yàn)光鏡、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)：慢性肝損傷組與肝硬化組動物中形成的結(jié)石為棕綠色和黃褐色，膽石中存在較多的是膽色素顆粒而

20、僅有少量膽固醇結(jié)晶，不同于高膽固醇膳食組，這一結(jié)論提示：在慢性肝損傷狀態(tài)下膽石的成因機(jī)制中，膽色素類結(jié)石是其形成機(jī)制之一。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)慢性肝損傷組家兔膽囊?guī)缀蹙鶠獒樇鈽幽懮?，而隨著造模時間的延長，肝硬化組家兔膽囊中出現(xiàn) 1 mm 左右大小的結(jié)石，光鏡觀察不同于高膽固醇膳食組的膽固醇結(jié)晶。第一論文范文網(wǎng) 編輯。結(jié)合對其膽汁成分的分析，我們發(fā)現(xiàn)膽固醇組膽汁中的膽固醇含量顯著高于正常對照組（P0.05），慢性肝損傷組與肝損傷膽固醇組與正常組沒有明顯差異，而肝硬化組膽固醇含量低于正常組。肝硬化組膽汁膽紅素高于其他各組（P0.05）。此結(jié)果提示：飲食中的膽固醇過量，可導(dǎo)致膽汁中形成膽固醇過飽和，隨后膽固醇

21、結(jié)晶，結(jié)晶析出逐漸形成結(jié)石。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為肝膽互為表里，肝主疏泄，膽汁的排泄有賴于肝的疏泄功能，肝的疏泄功能直接控制和調(diào)節(jié)膽汁的排泄。肝失疏泄主要表現(xiàn)為氣機(jī)不暢、氣機(jī)郁結(jié)之病理變化，也稱“肝氣郁結(jié)”。情志不暢，飲食不潔、蟲積或痰濁瘀血內(nèi)結(jié)于肝膽等原因均可引起肝膽疏泄失常，導(dǎo)致肝膽氣郁，郁久化熱，濕濁內(nèi)生，濕熱內(nèi)盛，蘊(yùn)結(jié)肝膽，濕熱熏蒸，煎熬膽汁而導(dǎo)致膽石。此病機(jī)正同西醫(yī)認(rèn)為的“肝臟功能障礙，特別是肝細(xì)胞功能障礙而致病理性膽汁分泌和排膽功能障礙是膽結(jié)石形成的基礎(chǔ)” 之理論相一致。同時中醫(yī)認(rèn)為膽汁排泄不暢，亦會影響肝之疏泄，即所謂的“膽病及肝”，這與西醫(yī)的“肝細(xì)胞功能損害與膽結(jié)石可能是互為因果”理論相一致。大黃靈仙膠囊為治療膽石病的有效中藥制劑，方中大黃、芒硝攻下導(dǎo)滯、利膽排石；金錢草、郁金、柴胡、枳殼、澤蘭相伍，既有清熱利濕之功，又有理氣祛痰之效；雞內(nèi)金、金錢草、威靈仙為排石佳品；威靈仙、磁