參茸龜芪口服液的安全性及免疫、抗疲勞作用

1、參茸龜芪口服液的安全性及免疫、抗疲勞作用 崔貞玉 隋自潔 宋昕恬 2005-1-18 16:35:53 中華醫(yī)藥雜志 2004年12月第4卷 第12期關鍵詞：參茸龜芪參茸龜芪口服液，是以人參、馬鹿茸、龜甲、黃芪等為主要原料的保健食品，本實驗室對其進行了安全性試驗、增強免疫力和緩解疲勞的功能試驗。 1 材料與方法1.1 藥品與試劑 敖東牌參茸龜芪口服液，棕色液體，人體日攝入量為0.033ml/（kg·bw）。血乳酸測試酶膜，尿素測定試劑盒，肝糖原試劑盒;綿羊紅細胞、Hank's液、RPMI1640培養(yǎng)液、PBS緩沖液、補體、SA緩沖液、瓊脂糖、都氏試劑印度墨汁等。1.2 實驗動

2、物 選用中國醫(yī)科大學實驗動物部提供的昆明種小鼠（許可證號SCXK（遼）2003-0009）。1.3 儀器 722分光光度計、勻漿機、離心機、生化培養(yǎng)箱、游泳箱、全自動生化分析儀、生物傳感分析儀、天平、潔凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、酶標儀等。1.4 方法 安全性試驗按食品安全性評價程序和方法進行;功能試驗按保健食品功能試驗評價程序和檢驗方法規(guī)范進行。1.4.1 小鼠急性毒性試驗 采用霍恩法進行試驗。小鼠體重為18.021.7g，每個性別小鼠隨機分成4個劑量組21.50、10.00、4.64、2.15g/（kg·bw）。小鼠灌胃后連續(xù)觀察14天。1.4.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞

3、微核試驗 采用間隔24h經口灌胃法進行試驗，用體重25.128.7g小白鼠，按體重隨機分組。受試物劑量為0.94、1.88、3.75、7.50g/（kg·bw），以40mg/（kg·bw）劑量的環(huán)磷酰胺（CP）為陽性對照，蒸餾水為陰性對照組。每只動物計數1000個嗜多染紅細胞（PCE）的微核發(fā)生率。1.4.3 小鼠精子畸形試驗 用體重30.035.0g的性成熟雄性小鼠，按體重隨機分組。受試物劑量1.88、3.75、7.50g/（kg·bw）。以40mg/（kg·bw）環(huán)磷酰胺（CP）為陽性對照組，蒸餾水為陰性對照組。每組計數5只動物，每只動物計數1000

4、個結構完整的精子，計算畸變精子發(fā)生率。1.4.4 Ames試驗 采用經鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四個試驗菌株進行試驗。采用多氯聯苯（PCB）誘導的大鼠肝勻漿作為體外代謝活化系統(tǒng)。試驗設0.313、0.625、1.250、2.500、5.000mg/皿5個劑量，各劑量組以蒸餾水稀釋，同時設空白對照、陰性對照（蒸餾水）和陽性對照（非活化系統(tǒng)TA97、TA98、TA102為敵克松50.0g/皿，TA100為疊氮鈉1.5g/皿?；罨到y(tǒng)采用二氨基芴10.0g/皿）。每個劑量做3個平行。整套試驗在相同條件下重復做2次并分別統(tǒng)計。受試物的回變菌落數是

5、自發(fā)回變菌落數2倍以上，并具有劑量反應關系者則定為陽性。1.4.5 抗疲勞試驗 負重游泳試驗、血清尿素測定、肝糖原測定、乳酸測定，各選健康雄性小鼠40只，體重1822g，分為4組，每組10只。以廠家最低日推薦成人攝入量的1、10和30倍設置灌胃劑量，即0.33、3.33、10ml/（kg·bw·d），各劑量組以蒸餾水稀釋，蒸餾水作空白對照組，各組小鼠灌胃量為0.2ml/（10g·bw·d），連續(xù)灌胃30天。1.4.6 免疫試驗 免疫一組，進行臟器/體重比值測定、遲發(fā)型變態(tài)反應、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗、半數溶血值（HC50）的測定和抗體生成細胞檢

6、測;免疫二組，進行碳廓清實驗;免疫三組，進行ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗和NK細胞活性測定。三組各選用昆明種健康雄性小鼠48只，體重1822g，分為4組，每組12只。劑量設計及各給藥方法同抗疲勞試驗。1.5 實驗數據統(tǒng)計 實驗數據統(tǒng)計均采用SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析。 2 結果2.1 小鼠急性毒性試驗 灌胃后，各劑量組未出現中毒癥狀，根據結果判斷，該受試物小鼠急性毒性LD 50 >15g/（kg·bw），為無毒級。2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗 經卡方檢驗，各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無顯著性（P>0.05），陽性對照組與陰性對照組比較差異有非常顯著性

7、（P<0.01）。該受試物小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗為陰性。2.3 小鼠精子畸形試驗 經Wilconson秩和檢驗，各劑量組精子畸形率與陰性對照組比較差異無顯著性（P>0.05），陽性對照組與陰性對照組比較差異有非常顯著性（P<0.01）。小鼠精子畸形試驗為陰性。2.4 Ames試驗 各劑量組回變菌落數均未超過陰性對照組回變菌落數的2倍，亦無劑量反應關系。說明該受試物對鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四菌株，加與不加S9，均未呈現遺傳毒性。2.5 抗疲勞試驗 經口給予小鼠敖東牌參茸龜芪口服液0.33、3.33、10ml/（kg·

8、bw·d），連續(xù)灌胃30天，能延長小鼠負重游泳時間（高劑量組），減少小鼠游泳時血清尿素的產生（高、中劑量組），減少游泳時血乳酸的產生（高劑量組），增加肝糖原儲備（高、中劑量組），由此判定敖東牌參茸龜芪口服液具有緩解體力疲勞作用。2.6 免疫試驗 經口給予小鼠不同劑量的敖東牌參茸龜芪口服液30天，能提高小鼠的半數溶血值（高劑量組）、小鼠抗體生成細胞數（高劑量組）、能增強小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應（中、高劑量組）;對小鼠的體重增長、臟器/體重比值、小鼠單核-巨噬細胞碳廓清的能力、ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化能力、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力、NK細胞活性無影響。由此判定，敖東牌參茸龜芪口服液具有增強免疫力功能作用。表1 敖東牌參茸龜芪口服液對小鼠半數溶血值HC50、抗體生成細胞數、遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）的影響略3 討論資料表明，人參提取物可以增強免疫活性細胞的功能，促進抗體和補體的生成 1 ;人參乙醇提取物具有較強的緩解疲勞作用，可明顯延長小鼠游泳時間 2 。鹿茸、龜甲、黃芪有增強免疫、緩解人體疲勞的作用 2，3 。本試驗結果表明，以人參、馬鹿茸、龜甲、黃芪等為主要原料的參茸龜芪口服液安全無毒，有增強免疫力功能，緩解體力疲勞作用。參考文獻1 陳可冀.抗衰老中藥學，北京:中醫(yī)古籍