Waters-Acquity-UPLC-超高效液相色譜儀

1、1.0 目的為了指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)分析員在實(shí)驗(yàn)工作中正確使用Waters Acquity UPLC超高效液相色譜儀，特制定本規(guī)程。2.0 范圍適用于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)工作中對(duì)Waters Acquity UPLC超高效液相色譜儀的操作。3.0 職責(zé)3.1 實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)工作中使用Waters Acquity UPLC超高效液相色譜儀時(shí)應(yīng)遵循本規(guī)程。3.2 部門負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)審核本規(guī)程并保證其實(shí)施。3.3 QC部門負(fù)責(zé)日常運(yùn)行的監(jiān)管。4.0 操作規(guī)程 4.1 試劑準(zhǔn)備 使用色譜純?cè)噭┡渲频牧鲃?dòng)相和清洗液.強(qiáng)洗針液用較高比例的甲醇或乙腈的水溶液(如80/20),弱洗針液用純水或含少量甲醇或乙腈的水溶液(如10/

2、90),清洗柱塞密封墊（Seal Wash）溶液應(yīng)使用純水或5%10%甲醇溶液。 4.2 液相開機(jī) 4.2.1 先打開UPLC所有模塊電源（最后打開SO（Sample Organizer）電源），打開Analyst software，點(diǎn)擊ACQUITY Console進(jìn)入液相控制界面，圖1。圖1 4.2.2 連接液相 4.2.2.1自動(dòng)啟動(dòng)液相：點(diǎn)擊system，點(diǎn)擊control，選擇start up system，彈出圖2控制界面，依次選擇需要執(zhí)行的項(xiàng)目。Prime Solvents中選擇需要進(jìn)行SM（Sample Manger）和BSM（Binary Solvent Manager）的相

3、關(guān)項(xiàng)目。依次在Opitonal和Equilibrate to Method中按實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行設(shè)置。然后點(diǎn)擊start，儀器自動(dòng)進(jìn)行清洗等準(zhǔn)備工作。如果BSM,SM,SO等顯示紅色字體，說明儀器和軟件連接失敗，分別點(diǎn)擊control，reset相關(guān)部分。圖2 4.2.2.2 連接液相各個(gè)部分（如果BSM,SM,SO等顯示紅色字體，說明儀器和軟件連接失敗，分別點(diǎn)擊control，reset）。選擇BSM，點(diǎn)擊control，選擇Prime seal wash，進(jìn)行柱塞桿的清洗。然后選擇Prime A/B Solvents，選擇A1（或A2）、B1（或B2）進(jìn)行溶劑脫氣操作，時(shí)間設(shè)定 > 5mi

4、n，Prime時(shí)流速已設(shè)定，無需改動(dòng)，脫氣時(shí)Degasser的壓力< 1psi。見圖3。圖3 選擇BSM，點(diǎn)擊control，分別選擇Prime syringes，Wash needle清洗注射器和進(jìn)樣針，見圖4。在Number of cycles中輸入要灌注的次數(shù)（進(jìn)行5次左右的灌注），點(diǎn)擊OK。圖4 4.2.3 配置SO：在SM中選擇Configure，選擇Sample Organizer，在彈出的窗口選擇SO，見圖5。在Plate setup中可以設(shè)置SO中的樣品盤類型，見圖6。 圖5圖6 在SO中選擇Configure，選擇Scan and store shelf layout，

5、SO進(jìn)行樣品盤掃描，自動(dòng)識(shí)別樣品盤類型，如果識(shí)別錯(cuò)誤，繼續(xù)執(zhí)行該步驟。勾選Disable shelf check可以禁止SO進(jìn)行再次掃描，在樣品盤類型識(shí)別并設(shè)定無誤情況下使用，見圖7。在圖7 右側(cè)的temperature中設(shè)定SO的內(nèi)部溫度。圖7 4.2.4 色譜柱信息，見圖8，在此設(shè)置柱溫箱溫度，查看色譜柱相關(guān)信息。圖8 4.3 定量環(huán)的更換 選擇所需更換的定量環(huán)，在SM右側(cè)的六通閥上更換。然后在SM中選擇Maintain中選擇Replace，點(diǎn)擊Sample syringe，點(diǎn)擊OK，見圖9。此時(shí)注射器柱塞桿下降到指定位置，擰下固定螺絲，取下注射器。安裝新的注射器，點(diǎn)擊reset。在Con

6、figure中選擇Volume Configure設(shè)置新更換的定量環(huán)和注射器體積，見圖10。然后選擇Prime syringes，進(jìn)行注射器灌注，直到注射器中沒有氣泡存在。再次選擇Maintain中選擇Leak test ，點(diǎn)擊Sample syringe，點(diǎn)擊OK，進(jìn)行檢漏測(cè)試。測(cè)試通過，定量環(huán)及注射器更換完成（waters 的不同體積定量環(huán)對(duì)應(yīng)特定體積的注射器，不能混用）。 更換新的定量環(huán)需要進(jìn)行體積校準(zhǔn)，在Maintain中選擇Characterize，點(diǎn)擊Characterize Needle and Loop Volumes，點(diǎn)擊start，見圖11。如果測(cè)試失敗，檢查loop和sy

7、pinge是否漏液，再次執(zhí)行灌注loop和sypinge，然后重新進(jìn)行體積測(cè)試。測(cè)試pass，定量環(huán)更換完成。圖9圖10圖11 4.4 液相報(bào)錯(cuò)信息，點(diǎn)擊Logs，顯示相關(guān)報(bào)錯(cuò)信息，見圖12。圖12 4.5 方法編輯器中需要注意的設(shè)置 在Analyst software中點(diǎn)擊ACQUITY Method Editor，進(jìn)入方法設(shè)置界面。在ACQ-SM中設(shè)置強(qiáng)洗和弱洗的體積，在Temperture Control中設(shè)置柱溫和樣品室的溫度，在Alam Band中設(shè)置允許范圍（如果不在此設(shè)置，而在Console中設(shè)置實(shí)驗(yàn)所需溫度，可能會(huì)導(dǎo)致儀器運(yùn)行時(shí)柱溫箱和樣品室控溫關(guān)閉，樣品實(shí)際在室溫下運(yùn)行），見

8、圖13。圖13 點(diǎn)擊右下角的Advanced，可以打開進(jìn)樣模式，選擇More info 可以查看不同體積定量環(huán)在不同進(jìn)樣模式下準(zhǔn)確的進(jìn)樣體積范圍，滿環(huán)進(jìn)樣時(shí)需要填充定量環(huán)的體積等信息，見圖14。圖14 在ACQ-BSM中設(shè)置壓力范圍。Seal Wash 的時(shí)間為樣品運(yùn)行期間多長(zhǎng)時(shí)間清洗一次柱塞密封，見圖15。圖15 4.6 液相關(guān)機(jī) 先用乙腈/水或者甲醇/水沖洗系統(tǒng)20min左右，再用純的有機(jī)試劑沖洗系統(tǒng)10min，緩慢降低流速至零，用甲醇水執(zhí)行Prime seal wash，清洗柱塞桿。然后關(guān)閉SM，BSM，SO的電源開關(guān)。 4.7 注意事項(xiàng) 在啟動(dòng)液相時(shí)先打開SM電源，再打開SO電源，然后reset SM，reset SO。如果連接失敗，重新啟動(dòng)SM和SO，再次reset。如果還是出現(xiàn)連接錯(cuò)誤，則完全關(guān)閉電腦，關(guān)閉液相系統(tǒng)，再重新啟動(dòng)電腦，液相系統(tǒng)按之前步驟進(jìn)行連接。5.0 專有名詞及定義SM：Sample managerSO：Sample OrganizerBSM： Binary Solvent ManagerSample syringe：樣品注射器6.0