BCA法測定蛋白質(zhì)濃度ppt課件

1、12 一一 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?二二 實驗原理實驗原理 三三 實驗材料與儀器實驗材料與儀器 四四 實驗步驟實驗步驟 五五 注意事項注意事項 六六 思考題思考題3 一 實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)BCA法測定蛋白質(zhì)濃度的基本 原理 掌握BCA法測定蛋白質(zhì)的技術(shù)4二 實驗原理BCA (bicinchoninic acid，二辛可酸)法測定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應(yīng),使其由原來的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍色復(fù)合物，在562 nm有強烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測定。5其反應(yīng)式為: 蛋白質(zhì)+BCA試劑+Cu2

2、+ 復(fù)合物 混合物由蘋果綠變?yōu)樽咸m色復(fù)合物BCA測定蛋白質(zhì)的范圍是20g/ml200g/ml，微量BCA測定范圍在0.5g/ml 10g/ml。 此方法被科研工作者廣泛選用6 三 實驗器材與試劑1器材: 分光光度計；恒溫水浴箱；槍式移液管；試管13支；吸管2ml 1支、0.1ml 3支試劑: 試劑A；試劑B；蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液；待測樣品7 四 實驗步驟1. 取試管13支，編號（除空白管只做1管外，其它各號測定管均重復(fù)做兩管），按下表操作并記錄：8管號試劑(l)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管21222324252蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液(1.5mg/ml)20406080100蒸餾水(ml)100604020待測樣品(ml)

3、100BCA工作液(ml)2.02.02.02.02.02.02.0 混勻后，在攝氏度下保溫 分鐘，比色測定BCA法測定蛋白質(zhì)含量92以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線3用測定管平均光吸收值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量，計算求出該待測血清蛋白質(zhì)的含量(g/L)。4從標(biāo)準(zhǔn)管中選擇一管與測定管光吸收值相接近者，按比色法計算公式計算求出該待測血清的蛋白質(zhì)濃度(g/L)。10 試比較法、雙縮脲法、Lowery法的異同.為什么法常用與科研？與其他方法相比它有什么特點和優(yōu)勢？11 特點：1.操作簡便快速，比經(jīng)典的lowry法快4倍2.靈敏度高，最低檢測量可達0.5ug3.準(zhǔn)確，試劑穩(wěn)定性好，在20ug/ml2000ug /ml 濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系4.經(jīng)濟實用，可在微孔板中進行，待測樣品體積為1ul2