第五章-植物組織培養(yǎng)技術實驗方案.

1、第五章植物組織培養(yǎng)技術一、植物組織培養(yǎng)中的基本概念(1) 植物組織培養(yǎng)技術 :在無菌培養(yǎng)的條件下，將離體的植物器官（根，莖，葉，花，果實等）、組織（形成層，花藥組織等）、細胞（體細胞，生殖細胞等）以及原生質體等培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，并給予適當?shù)呐囵B(yǎng)條件，使其長成完整植株的過程。(2) 理論依據(jù)：植物細胞的全能性， 即指植物機體的每個細胞都含有該物種全套的基因組， 具有發(fā)育成完整個體的潛力。(3) 外植體：從活體植株上切下的，用于組織培養(yǎng)的細胞、組織和器官。一般包括莖尖、根、莖、葉、花、種子等器官以及他們形成的體細胞胚等材料。(4) 分化：在個體發(fā)育過程中， 由一種相同的細胞類型經細胞分裂后

2、逐漸在形態(tài)、 結構和功能上形成穩(wěn)定性差異，產生不同的細胞類群的過程稱為細胞分化。(5) 脫分化：已經高度分化的植物器官、組織或細胞，在切割損傷和培養(yǎng)物內外因素的共同作用下，逐漸喪失原來的分化結構和功能，最后形成無組織的細胞團或愈傷組織的過程。(6)愈傷組織：在人工培養(yǎng)基上由外植體脫分化形成的一團無序生長的薄壁細胞。（具有細胞分裂能力） 。(7)再分化：已經脫分化的細胞在一定條件下，又可經過愈傷組織或胚狀體，再分化出根和芽， 形成完整植株，這一過程叫作再分化。(8) 不定芽：在高等植物正常的個體發(fā)育中，芽一般是只從莖尖或葉腋等的一定位置生出。所以這種象頂芽、腋芽、副芽等均在一定部位生出的芽，稱為

3、定芽。與此相反，凡從葉、根、或莖節(jié)間等通常不形成芽的部位生出的芽，則統(tǒng)稱為不定芽。(9) 胚狀體：在離體植物細胞、組織或器官培養(yǎng)過程中，由一個或一些體細胞，經過胚胎發(fā)生和發(fā)育過程，形成的與合子胚相類似的結構。二、植物組織培養(yǎng)過程（菊花為例）1、培養(yǎng)基的配制:方法：培養(yǎng)基干粉配制法稱取培養(yǎng)基干粉42g 加水加熱煮沸溶解后定溶至1L，按照需要的濃度分別加入激素。（其中生根用的植物激素NAA為 0.2mg/1000ml ）用1mol/L NaOH和1mol/L HCl調節(jié)pH 至5.8。將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至150ml組培瓶中，擰上蓋子，放入滅菌鍋121，滅菌20min。2、菊花接種與培養(yǎng)：（ 1

4、）取材：取菊花生長旺盛的嫩枝。（ 2）消毒： (省略 )流水沖洗后，加少許洗衣粉刷洗，流水沖放入 70 75%酒精中搖動23 次，持續(xù)在 2 10% 的次氯酸鈉溶液中消毒81020 分鐘；30 秒，無菌水沖洗分鐘，無菌水沖洗23 次，用無菌吸水紙吸干23 次，無菌吸水紙吸干。;接種：減去嫩枝3-4厘米（帶有3-4片嫩葉）接到培養(yǎng)基中（注意：不能將一片葉子接入進去并務必要提前做好殺菌、消毒、滅菌措施）培養(yǎng)：將無菌苗培養(yǎng)到光照培養(yǎng)箱中，條件溫度：25 度、光照：12 小時，每隔一周觀察幼苗生長情況（ 3）愈傷組織與不定芽的誘導培養(yǎng)選用合適的培養(yǎng)基分別對植物材料進行愈傷組織和不定芽的誘導。（ 4）繼

5、代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴繁培養(yǎng)過程，目的在于繁殖出相當數(shù)量的無菌苗。（ 5）生根培養(yǎng)當無菌苗長到2 3cm 時，選用生根培養(yǎng)基剪取無菌苗轉接至生根培養(yǎng)基中進行生根誘導培養(yǎng)。（ 6）煉苗、移栽煉苗：當無菌苗根系長出約3cm，把無菌苗進行煉苗適應外界環(huán)境。先在外界環(huán)境閉瓶鍛煉3 天，再開瓶鍛煉3 天（以培養(yǎng)基上開始長出菌為宜）。移栽：去凈培養(yǎng)基，可先在滅過菌的珍珠巖或蛭石上培養(yǎng)使根系發(fā)達再轉移到土壤中?！咀⒁馐马棥?、實驗所使用的器材要嚴格滅菌，注意無菌操作，避免因染菌導致實驗失??；2、pH 值對培養(yǎng)基的硬度有影響， pH 過高培養(yǎng)基變硬， pH 過低培養(yǎng)基不能凝固，所以要調整好培養(yǎng)基的 pH 值；操作不當引起的雜菌污染實驗結果，被雜菌污染培養(yǎng)基3 不要將一片葉子接入到培養(yǎng)基中拓展實驗：選取不同外植體誘導愈傷組織和不定芽不同外植體的培養(yǎng)基激素配比如下：葉片：6BA :2mg/LNAA:0.5mg/L將葉片切成0.5cm*0.5cm 小塊莖段： 6 BA :3 mg/LNAA:0.2mg/L將嫩枝切成1cm莖段腋芽：6BA:3 mg/LNAA:0.2 mg/L將嫩枝切成1 2cm 帶腋芽的莖段最后調節(jié)（ 1）20PH 值至 6.0天后，菊花不同外植體培養(yǎng)情況，見圖5：圖 520 天后菊花不同外植體形態(tài)（從