亞低溫缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護(hù)作用(一)

1、亞低溫缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護(hù)作用(一)    作者：高卉，白育庭，周水生，周燕紅，羅德生，查文良，阮明鳳【摘要】 目的 探討亞低溫下缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護(hù)作用。方法 選用健康Wistar大鼠24只，隨機(jī)分成3組（每組8只）：假手術(shù)對(duì)照組（sham組）、缺血再灌注組（I/R組）、亞低溫預(yù)處理組（MHIP組）。夾閉大鼠腸系膜上動(dòng)脈（SMA）60min造成缺血，再灌注2h后取出腎組織制成勻漿，測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSHPX）、Ca2+Mg2+ATPase的活性及丙二醛（MDA）含量，觀察腎組織形態(tài)

2、細(xì)胞學(xué)變化。結(jié)果 MHIP組腎組織MDA含量明顯低于I/R組（P0.01），SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase的活性均明顯高于I/R組（P0.01），腎細(xì)胞形態(tài)學(xué)異常變化明顯減輕。結(jié)論 亞低溫缺血預(yù)處理能減少大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化，改善ATPase功能，減輕大鼠腸缺血再灌注所致腎損傷。 【關(guān)鍵詞】 亞低溫；缺血預(yù)處理；缺血再灌注損傷；小腸；腎臟；大鼠ABSTRACT：Objective To explore the protective effects of mild hypothermia ischemicpreconditioning on renal injury after gu

3、t ischemiareperfusion in rats.Methods The rats were divided randomly into ghree groups:sham operated group,ischemiareperfution(I/R) group,mild hypothermia ischemicpreconditioning(MHIP) group.Superior mesenteric artery was clipped for 60 min to cause ischimia,and then unclipped to make reperfusion.2

4、hours after reperfusion,the renal tissues were gathered and homogenized,and the contents of SOD,GSHPX,MDA and Ca2+Mg2+ATPase,and morphological changes of renal were assayed.Results The content of MDA in renal in MHIP group was less than that in I/R group（P0.01）,the contents of SOD,GSHPX and Ca2+Mg2+

5、ATPase in MHIP group was higher than those in I/R group（P0.01）,and the abnormal morphological changes of renal were alleviated remarkably.Conclusion Mild hypothermia ischemicpreconditioning can reduce lipid peroxidation,improve ATPase activity and decrease renal injury in rats after guts I/R injury.

6、KEY WORDS：Mild hypothermia;Ischemicpreconditioning;Ischemiareperfusion injury;Gut;Renal；Rat腸缺血再灌注（ischemiareperfusion，I/R）是機(jī)體遭受?chē)?yán)重創(chuàng)傷、大手術(shù)、燒傷、感染等刺激后發(fā)生較早的病理過(guò)程之一。研究表明，小腸缺血再灌注后除對(duì)小腸組織本身造成損害外，還會(huì)對(duì)其他遠(yuǎn)隔器官造成次級(jí)損傷，而這種損傷在組織器官移植的生理病理發(fā)生發(fā)展、手術(shù)創(chuàng)傷后其他重要器官的功能改變及恢復(fù)過(guò)程中均有十分重要的意義1，2。目前認(rèn)為，缺血再灌注損傷產(chǎn)生的主要機(jī)制與氧自由基大量生成導(dǎo)致組織器官脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)3。

7、本文采用大鼠腸缺血再灌注模型，探討亞低溫缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護(hù)作用。1 材料與方法1.1 材料選用健康雄性Wistar大鼠24只，體質(zhì)量250g左右，由咸寧學(xué)院動(dòng)物室提供。SOD、GSHPX、MDA、Ca2+Mg2+ATPase試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。1.2 方法10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉后，大鼠仰臥固定，取腹部正中切口，暴露腸系膜上動(dòng)脈（SMA），用無(wú)損傷動(dòng)脈夾夾閉其根部導(dǎo)致缺血，松夾即為再灌注，在各設(shè)定時(shí)相點(diǎn)經(jīng)髂動(dòng)脈取血并迅速放血致死，取腎組織勻漿，同時(shí)取少許腎組織行光、電鏡觀察。將24只大鼠隨機(jī)分為3組，每組8只。假手術(shù)對(duì)照組（sh

8、am組）：僅暴露SMA而不夾閉，共3h結(jié)束實(shí)驗(yàn)后取材；缺血再灌注組（I/R組）：夾閉SMA 60min后松夾2h再取材；亞低溫預(yù)處理組（MHIP組）：在小腸周?chē)涮钏楸斐尚∧c亞低溫（3335），夾閉SMA 5min和松夾5min作為預(yù)處理，余同I/R組。1.3 指標(biāo)測(cè)定SOD活性用鄰苯三酚自氧化法檢測(cè)，MDA含量測(cè)定用改良硫代巴比妥酸（TBA）比色法測(cè)定，5.5,二硫?qū)Χ趸郊姿幔―TNB）比色法測(cè)定GSHPX，定磷法測(cè)定Ca2+Mg2+ATPase。光鏡檢查：取腎組織經(jīng)10%甲醛固定，石臘包埋切片，HE染色，觀察切片。電鏡檢查：腎組織用生理鹽水漂洗后2.5%戊二醛固定，送電鏡室，經(jīng)四氧化

9、鋨雙固定、脫水、包埋、切片等操作后，在日立H600透視電鏡下觀察。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)均以±s表示，組與組之間比較采用t檢驗(yàn)。P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié) 果2.1 腎形態(tài)學(xué)改變光鏡下sham組腎組織未見(jiàn)充血，上皮細(xì)胞正常，未見(jiàn)蛋白管型；I/R組腎組織明顯充血，上皮細(xì)胞變性，少量蛋白管型；MHIP組腎組織充血，上皮細(xì)胞變性明顯減輕，未見(jiàn)蛋白管型。2.2 腎組織中SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性及MDA含量的變化大鼠腸缺血再灌注后腎組織SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性下降，而MDA含量明顯上升，與sham組比較均有顯著性差異（P均0.0

10、1）。MHIP組腎組織中MDA含量明顯低于I/R組（P0.01），SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性均明顯高于I/R組（P均0.01）。見(jiàn)表1。表1 各組大鼠腎組織SOD、GSHPX、MDA、Ca2+Mg2+ATPase測(cè)定結(jié)果比較與I/R組比較，*P0.01；與sham組比較，P0.013 討 論腸缺血再灌注致腎損傷的機(jī)制尚不完全清楚，目前認(rèn)為與內(nèi)毒素、血小板激活因子、腫瘤壞死因子、前列腺素、補(bǔ)體、氧自由基、白三烯、粒細(xì)胞介導(dǎo)、鈣超載和基因異常表達(dá)有關(guān)。自由基損傷是器官組織損傷尤其是腸缺血再灌注損傷的主要機(jī)制之一，因此拮抗自由基損傷對(duì)防治腸缺血再灌注致多器官損傷具有重要意義

11、。研究表明，低溫及預(yù)處理可以從多途徑、多環(huán)節(jié)抑制氧自由基的產(chǎn)生及其引發(fā)的連鎖反應(yīng)35。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠腸缺血再灌注后腎組織SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性下降，而MDA含量明顯上升，說(shuō)明缺血再灌注損傷大鼠體內(nèi)有大量氧自由基產(chǎn)生，造成腎組織的損傷。MHIP組腎組織中MDA含量明顯低于I/R組，SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase的活性均明顯高于I/R組，提示亞低溫缺血預(yù)處理能抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，提高ATP酶活性，穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境，減少鈣超載，這可能是亞低溫缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腸缺血再灌注后腎損傷保護(hù)作用的主要機(jī)制。關(guān)于亞低溫缺血預(yù)處理對(duì)防治腸缺血再灌注后腎損傷的具體機(jī)理

12、尚有待深入研究。【參考文獻(xiàn)】1Lee MA,McCauley RD,Kong SE,et al.Pretreatment with glycine reduces the severity of warm intestinal ischemicreperfusion injury in the ratJ.Ann Plast Surg，2004，46:3202Mitsuoka H,Unno N,Sakurai T.Pathophysiological role of endothelins in pulmonary microcirculatory disorders due to intestinal ischemia and reperfusionJ.J Surg Res，1999，87(2):