亞低溫缺血預處理對大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護作用(一)

1、亞低溫缺血預處理對大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護作用(一)    作者：高卉，白育庭，周水生，周燕紅，羅德生，查文良，阮明鳳【摘要】 目的 探討亞低溫下缺血預處理對大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護作用。方法 選用健康Wistar大鼠24只，隨機分成3組（每組8只）：假手術(shù)對照組（sham組）、缺血再灌注組（I/R組）、亞低溫預處理組（MHIP組）。夾閉大鼠腸系膜上動脈（SMA）60min造成缺血，再灌注2h后取出腎組織制成勻漿，測定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化酶（GSHPX）、Ca2+Mg2+ATPase的活性及丙二醛（MDA）含量，觀察腎組織形態(tài)

2、細胞學變化。結(jié)果 MHIP組腎組織MDA含量明顯低于I/R組（P0.01），SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase的活性均明顯高于I/R組（P0.01），腎細胞形態(tài)學異常變化明顯減輕。結(jié)論 亞低溫缺血預處理能減少大鼠脂質(zhì)過氧化，改善ATPase功能，減輕大鼠腸缺血再灌注所致腎損傷。 【關(guān)鍵詞】 亞低溫；缺血預處理；缺血再灌注損傷；小腸；腎臟；大鼠ABSTRACT：Objective To explore the protective effects of mild hypothermia ischemicpreconditioning on renal injury after gu

3、t ischemiareperfusion in rats.Methods The rats were divided randomly into ghree groups:sham operated group,ischemiareperfution(I/R) group,mild hypothermia ischemicpreconditioning(MHIP) group.Superior mesenteric artery was clipped for 60 min to cause ischimia,and then unclipped to make reperfusion.2

4、hours after reperfusion,the renal tissues were gathered and homogenized,and the contents of SOD,GSHPX,MDA and Ca2+Mg2+ATPase,and morphological changes of renal were assayed.Results The content of MDA in renal in MHIP group was less than that in I/R group（P0.01）,the contents of SOD,GSHPX and Ca2+Mg2+

5、ATPase in MHIP group was higher than those in I/R group（P0.01）,and the abnormal morphological changes of renal were alleviated remarkably.Conclusion Mild hypothermia ischemicpreconditioning can reduce lipid peroxidation,improve ATPase activity and decrease renal injury in rats after guts I/R injury.

6、KEY WORDS：Mild hypothermia;Ischemicpreconditioning;Ischemiareperfusion injury;Gut;Renal；Rat腸缺血再灌注（ischemiareperfusion，I/R）是機體遭受嚴重創(chuàng)傷、大手術(shù)、燒傷、感染等刺激后發(fā)生較早的病理過程之一。研究表明，小腸缺血再灌注后除對小腸組織本身造成損害外，還會對其他遠隔器官造成次級損傷，而這種損傷在組織器官移植的生理病理發(fā)生發(fā)展、手術(shù)創(chuàng)傷后其他重要器官的功能改變及恢復過程中均有十分重要的意義1，2。目前認為，缺血再灌注損傷產(chǎn)生的主要機制與氧自由基大量生成導致組織器官脂質(zhì)過氧化有關(guān)3。

7、本文采用大鼠腸缺血再灌注模型，探討亞低溫缺血預處理對大鼠腸缺血再灌注腎損傷的保護作用。1 材料與方法1.1 材料選用健康雄性Wistar大鼠24只，體質(zhì)量250g左右，由咸寧學院動物室提供。SOD、GSHPX、MDA、Ca2+Mg2+ATPase試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。1.2 方法10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉后，大鼠仰臥固定，取腹部正中切口，暴露腸系膜上動脈（SMA），用無損傷動脈夾夾閉其根部導致缺血，松夾即為再灌注，在各設(shè)定時相點經(jīng)髂動脈取血并迅速放血致死，取腎組織勻漿，同時取少許腎組織行光、電鏡觀察。將24只大鼠隨機分為3組，每組8只。假手術(shù)對照組（sh

8、am組）：僅暴露SMA而不夾閉，共3h結(jié)束實驗后取材；缺血再灌注組（I/R組）：夾閉SMA 60min后松夾2h再取材；亞低溫預處理組（MHIP組）：在小腸周圍充填碎冰造成小腸亞低溫（3335），夾閉SMA 5min和松夾5min作為預處理，余同I/R組。1.3 指標測定SOD活性用鄰苯三酚自氧化法檢測，MDA含量測定用改良硫代巴比妥酸（TBA）比色法測定，5.5,二硫?qū)Χ趸郊姿幔―TNB）比色法測定GSHPX，定磷法測定Ca2+Mg2+ATPase。光鏡檢查：取腎組織經(jīng)10%甲醛固定，石臘包埋切片，HE染色，觀察切片。電鏡檢查：腎組織用生理鹽水漂洗后2.5%戊二醛固定，送電鏡室，經(jīng)四氧化

9、鋨雙固定、脫水、包埋、切片等操作后，在日立H600透視電鏡下觀察。1.4 統(tǒng)計學分析所有數(shù)據(jù)均以±s表示，組與組之間比較采用t檢驗。P0.05為有統(tǒng)計學意義。2 結(jié) 果2.1 腎形態(tài)學改變光鏡下sham組腎組織未見充血，上皮細胞正常，未見蛋白管型；I/R組腎組織明顯充血，上皮細胞變性，少量蛋白管型；MHIP組腎組織充血，上皮細胞變性明顯減輕，未見蛋白管型。2.2 腎組織中SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性及MDA含量的變化大鼠腸缺血再灌注后腎組織SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性下降，而MDA含量明顯上升，與sham組比較均有顯著性差異（P均0.0

10、1）。MHIP組腎組織中MDA含量明顯低于I/R組（P0.01），SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性均明顯高于I/R組（P均0.01）。見表1。表1 各組大鼠腎組織SOD、GSHPX、MDA、Ca2+Mg2+ATPase測定結(jié)果比較與I/R組比較，*P0.01；與sham組比較，P0.013 討 論腸缺血再灌注致腎損傷的機制尚不完全清楚，目前認為與內(nèi)毒素、血小板激活因子、腫瘤壞死因子、前列腺素、補體、氧自由基、白三烯、粒細胞介導、鈣超載和基因異常表達有關(guān)。自由基損傷是器官組織損傷尤其是腸缺血再灌注損傷的主要機制之一，因此拮抗自由基損傷對防治腸缺血再灌注致多器官損傷具有重要意義

11、。研究表明，低溫及預處理可以從多途徑、多環(huán)節(jié)抑制氧自由基的產(chǎn)生及其引發(fā)的連鎖反應35。本實驗結(jié)果顯示，大鼠腸缺血再灌注后腎組織SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase活性下降，而MDA含量明顯上升，說明缺血再灌注損傷大鼠體內(nèi)有大量氧自由基產(chǎn)生，造成腎組織的損傷。MHIP組腎組織中MDA含量明顯低于I/R組，SOD、GSHPX、Ca2+Mg2+ATPase的活性均明顯高于I/R組，提示亞低溫缺血預處理能抑制脂質(zhì)過氧化反應，提高ATP酶活性，穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境，減少鈣超載，這可能是亞低溫缺血預處理對大鼠腸缺血再灌注后腎損傷保護作用的主要機制。關(guān)于亞低溫缺血預處理對防治腸缺血再灌注后腎損傷的具體機理

12、尚有待深入研究?！緟⒖嘉墨I】1Lee MA,McCauley RD,Kong SE,et al.Pretreatment with glycine reduces the severity of warm intestinal ischemicreperfusion injury in the ratJ.Ann Plast Surg，2004，46:3202Mitsuoka H,Unno N,Sakurai T.Pathophysiological role of endothelins in pulmonary microcirculatory disorders due to intestinal ischemia and reperfusionJ.J Surg Res，1999，87(2):