微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)博迅產(chǎn)品操作03版ppt課件

1、微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù) 反響原理反響原理 微柱凝膠免疫反響的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)，也可微柱凝膠免疫反響的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)，也可稱之微柱凝膠血凝實(shí)驗(yàn)稱之微柱凝膠血凝實(shí)驗(yàn)Microcolumn Gel Microcolumn Gel Heamagglutination AssayHeamagglutination Assay，MGHAMGHA。 在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，構(gòu)成在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，構(gòu)成紅細(xì)胞凝集團(tuán)塊。在一定離心力下，該凝集團(tuán)塊位于膠紅細(xì)胞凝集團(tuán)塊。在一定離心力下，該凝集團(tuán)塊位于膠外表或膠中；而紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為分散的外

2、表或膠中；而紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為分散的紅細(xì)胞，在同樣的離心力下，紅細(xì)胞沉降到微柱管尖底紅細(xì)胞，在同樣的離心力下，紅細(xì)胞沉降到微柱管尖底部。部。4+4+2+2+- - 特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn) 簡(jiǎn)單：不需洗滌，對(duì)陰性結(jié)果不需確證實(shí)驗(yàn)，適用于大量標(biāo)本簡(jiǎn)單：不需洗滌，對(duì)陰性結(jié)果不需確證實(shí)驗(yàn)，適用于大量標(biāo)本檢測(cè)，處理了檢測(cè)，處理了CoombsCoombs實(shí)驗(yàn)由于程序復(fù)雜費(fèi)時(shí)等緣由未能在臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)由于程序復(fù)雜費(fèi)時(shí)等緣由未能在臨床常規(guī)運(yùn)用問(wèn)題。運(yùn)用問(wèn)題。 使不完全抗體檢測(cè)實(shí)際使不完全抗體檢測(cè)實(shí)際“金規(guī)范成為臨床的金規(guī)范成為臨床的“金規(guī)范。金規(guī)范。 多份標(biāo)本一次離心出結(jié)果，有利于臨床大量標(biāo)本檢測(cè)。多份

3、標(biāo)本一次離心出結(jié)果，有利于臨床大量標(biāo)本檢測(cè)。 另外還具備準(zhǔn)確、敏感、標(biāo)本用量少、結(jié)果保管時(shí)間長(zhǎng)、易于另外還具備準(zhǔn)確、敏感、標(biāo)本用量少、結(jié)果保管時(shí)間長(zhǎng)、易于規(guī)范化、規(guī)范化、 操作更平安等優(yōu)點(diǎn)。操作更平安等優(yōu)點(diǎn)。產(chǎn)品操作產(chǎn)品操作一一.預(yù)備任務(wù)預(yù)備任務(wù)檢測(cè)卡的預(yù)備檢測(cè)卡的預(yù)備1.在在18-25條件下平衡條件下平衡30分鐘。分鐘。2.離心離心2-3分鐘，平衡反響介質(zhì)。分鐘，平衡反響介質(zhì)。3.外觀檢查應(yīng)無(wú)氣泡、干膠和雜質(zhì)。外觀檢查應(yīng)無(wú)氣泡、干膠和雜質(zhì)。4.要緩慢撕膜。防止膜面上的液滴凝結(jié)因冷熱交替產(chǎn)生的污染鄰孔。要緩慢撕膜。防止膜面上的液滴凝結(jié)因冷熱交替產(chǎn)生的污染鄰孔。離心！檢測(cè)標(biāo)本的預(yù)備檢測(cè)標(biāo)本的預(yù)備

4、1.1.標(biāo)本要求用標(biāo)本要求用EDTAEDTA抗凝管采集的新穎血如陳舊血需設(shè)陰抗凝管采集的新穎血如陳舊血需設(shè)陰性對(duì)照。性對(duì)照。2.2.抗凝血樣標(biāo)本要上清廓清。如有纖毛狀、渾濁、乳糜、抗凝血樣標(biāo)本要上清廓清。如有纖毛狀、渾濁、乳糜、溶血、脂肪等狀，應(yīng)溶血、脂肪等狀，應(yīng) 再次洗滌離心。為防止纖維蛋白影再次洗滌離心。為防止纖維蛋白影響紅細(xì)胞沉降，建議運(yùn)用紅細(xì)胞稀釋液。響紅細(xì)胞沉降，建議運(yùn)用紅細(xì)胞稀釋液。3.3.血辮血樣須放置試管中離心處置，確保血清廓清微黃。血辮血樣須放置試管中離心處置，確保血清廓清微黃。必要時(shí)需洗滌。必要時(shí)需洗滌。4.4.在在18-2518-25條件下平衡條件下平衡3030分鐘，防止

5、冷凝集。分鐘，防止冷凝集。紅細(xì)胞懸液的制備紅細(xì)胞懸液的制備1.1.將紅細(xì)胞配制為將紅細(xì)胞配制為0.8%0.8%的懸液，最高濃度不要超越的懸液，最高濃度不要超越1% 1% 。如。如: :取取8l 8l 壓積紅細(xì)胞，參與到壓積紅細(xì)胞，參與到1ml1ml的紅細(xì)胞稀釋液抗人球的紅細(xì)胞稀釋液抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)要求用低離子液配置紅細(xì)胞懸液中，配制出的蛋白實(shí)驗(yàn)要求用低離子液配置紅細(xì)胞懸液中，配制出的紅細(xì)胞懸液濃度大約為紅細(xì)胞懸液濃度大約為0.8%0.8%。2.2.外觀檢查呈均勻淡紅色，無(wú)血塊、無(wú)絮狀物如有纖維外觀檢查呈均勻淡紅色，無(wú)血塊、無(wú)絮狀物如有纖維蛋白需去除。蛋白需去除。二二. .結(jié)果斷定結(jié)果斷定陽(yáng)性結(jié)果

6、：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中構(gòu)成的特異性抗陽(yáng)性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中構(gòu)成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠外表或膠中，為陽(yáng)性反響。原抗體復(fù)合物浮在凝膠外表或膠中，為陽(yáng)性反響。陰性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原無(wú)相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗陰性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原無(wú)相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部，為陰性反響。體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部，為陰性反響。反響強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于膠外表，為強(qiáng)陽(yáng)性反響強(qiáng)度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于膠外表，為強(qiáng)陽(yáng)性反響；復(fù)合物在膠中，為弱陽(yáng)性反響；愈接近膠底部顆粒愈小，反響；復(fù)合物在膠中，為弱陽(yáng)性

7、反響；愈接近膠底部顆粒愈小，反響愈弱。反響愈弱。 ？4+ 4+ 紅細(xì)胞復(fù)合物凝集位于凝膠外表紅細(xì)胞復(fù)合物凝集位于凝膠外表3+ 3+ 大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表，少部分位于凝膠中部大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表，少部分位于凝膠中部2+ 2+ 大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部1+ 1+ 紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中下部紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中下部 與同一卡中陰性管結(jié)果對(duì)照，如與陰性結(jié)果有差別，即為與同一卡中陰性管結(jié)果對(duì)照，如與陰性結(jié)果有差別，即為 - - 紅細(xì)胞完全堆積在凝膠管尖底部紅細(xì)胞完全堆積在凝膠管尖底部完全溶血完全溶血 凝

8、膠和液體無(wú)凝集或未凝集的紅細(xì)胞，液體出現(xiàn)透明清澈紅色凝膠和液體無(wú)凝集或未凝集的紅細(xì)胞，液體出現(xiàn)透明清澈紅色不完全溶血不完全溶血 殘留紅細(xì)胞在膠外表、膠中或膠底部，液體出現(xiàn)透明清澈紅色殘留紅細(xì)胞在膠外表、膠中或膠底部，液體出現(xiàn)透明清澈紅色混合凝集混合凝集 紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表和凝膠底部紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表和凝膠底部 完全完全 不完全不完全 混合凝集混合凝集景象及闡明景象及闡明反響強(qiáng)度反響強(qiáng)度三、規(guī)范操作規(guī)程三、規(guī)范操作規(guī)程 1、ABO、RhD血型定型檢測(cè)卡單克隆抗體血型定型檢測(cè)卡單克隆抗體操作步驟：操作步驟：1將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；2將待檢者血漿分別參與將待

9、檢者血漿分別參與5-6管中，各管中，各50l；50l50l待檢者血漿待檢者血漿3 3將待檢者將待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液分別參與紅細(xì)胞懸液分別參與1-41-4管中，管中，各各5050l l；待檢者待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液50l50l50l50l4 4取取0.8%0.8%的的ABOABO血型反定型紅細(xì)胞試劑，分別參血型反定型紅細(xì)胞試劑，分別參與與5-65-6管中，各管中，各5050l l；50l50lA A細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞5離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：A A型型RhDRhD陽(yáng)性陽(yáng)性50l5

10、0l50l2 2、ABOABO、RhDRhD血型檢測(cè)卡微柱凝膠血型檢測(cè)卡微柱凝膠操作步驟：操作步驟：1 1將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；2 2將待檢者將待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液分別參與第紅細(xì)胞懸液分別參與第1313或或4646管中，各管中，各5050l l； 待檢者的待檢者的0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：1.A1.A型型RhDRhD陽(yáng)性；陽(yáng)性； 2.B 2.B型型RhDRhD陽(yáng)性陽(yáng)性 3、Rh血型抗原檢測(cè)卡單克隆抗體血型抗原檢測(cè)卡單克隆抗體操作步驟操作

11、步驟:1將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；2將待檢者將待檢者0.8%紅細(xì)胞懸液分別參與紅細(xì)胞懸液分別參與16管中，各管中，各50l；待檢者待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液50l50l50l50l50l50l3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：RhDRhD、C C、e e陽(yáng)性陽(yáng)性4 4、抗人球蛋白檢測(cè)卡、抗人球蛋白檢測(cè)卡不規(guī)那么抗體篩不規(guī)那么抗體篩檢檢 操作步驟：操作步驟：1 1將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志； 2 2將將0.8%0.8%、篩檢紅細(xì)胞各篩檢紅細(xì)胞各5050l l

12、分別參與對(duì)應(yīng)的微管中分別參與對(duì)應(yīng)的微管中; ; 50l50l50l0.8%0.8%、篩檢紅細(xì)胞篩檢紅細(xì)胞bioxun3將待檢者血漿各將待檢者血漿各50l分別參與分別參與、微管中；微管中；437孵育孵育15分鐘；分鐘；待檢者血漿待檢者血漿50l50l50lllbioxun50l50l50l5 5離心離心5 5分鐘分鐘900rpm2900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm31500rpm3分鐘；分鐘；6 6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。根據(jù)當(dāng)前運(yùn)用的篩檢紅細(xì)胞的反響格局來(lái)斷定根據(jù)當(dāng)前運(yùn)用的篩檢紅細(xì)胞的反響格局來(lái)斷定bioxun 5 5、抗人球蛋白檢測(cè)卡、抗人球蛋白檢測(cè)卡交叉配血實(shí)驗(yàn)交叉配血實(shí)驗(yàn)操作步驟：操作

13、步驟：1 1將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志； 2 2將供血者將供血者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液與受血者血漿各紅細(xì)胞懸液與受血者血漿各5050l l先后參與主側(cè)管先后參與主側(cè)管中；中； 受血者血漿受血者血漿50l供血者紅細(xì)胞懸液供血者紅細(xì)胞懸液50l3將受血者將受血者0.8%紅細(xì)胞懸液與供血者血漿各紅細(xì)胞懸液與供血者血漿各50l先后參與次側(cè)先后參與次側(cè)管中；管中；437孵育孵育15分鐘；分鐘；供血者血漿供血者血漿50l受血者紅細(xì)胞懸液受血者紅細(xì)胞懸液50l5離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。例如上圖：例如上圖：1、3

14、不配合；不配合；2配合配合 交叉配血實(shí)驗(yàn)本卷須知交叉配血實(shí)驗(yàn)本卷須知1.1.運(yùn)用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)檢測(cè)病人紅細(xì)胞時(shí)，一定運(yùn)用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫實(shí)驗(yàn)檢測(cè)病人紅細(xì)胞時(shí)，一定要用適量要用適量EDTAEDTA的試管采血液標(biāo)本，該標(biāo)本不能放入的試管采血液標(biāo)本，該標(biāo)本不能放入2-82-8冰箱冰箱保管，以防止紅細(xì)胞在病人體外致敏所致假陽(yáng)性反響。保管，以防止紅細(xì)胞在病人體外致敏所致假陽(yáng)性反響。2.2.紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽(yáng)性反響。盡能紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽(yáng)性反響。盡能夠運(yùn)用當(dāng)日采集的新穎血做本實(shí)驗(yàn)。如不得不用過(guò)夜血或陳舊血夠運(yùn)用當(dāng)日采集的新穎血做

15、本實(shí)驗(yàn)。如不得不用過(guò)夜血或陳舊血，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以確定該標(biāo)天性否可，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以確定該標(biāo)天性否可以做本實(shí)驗(yàn)。以做本實(shí)驗(yàn)。3.3.血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙陰性紅細(xì)胞沉淀，呈假陽(yáng)性反響。白在微柱凝膠中析出，妨礙陰性紅細(xì)胞沉淀，呈假陽(yáng)性反響。4.4.如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽(yáng)如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽(yáng)性反響，也不排除其他緣由所致溶血，故對(duì)此標(biāo)本一定仔細(xì)分析性反響，也不排除其他緣由所致

16、溶血，故對(duì)此標(biāo)本一定仔細(xì)分析，并向上級(jí)主管技術(shù)人員報(bào)告并討論其緣由。，并向上級(jí)主管技術(shù)人員報(bào)告并討論其緣由。5.5.每日實(shí)驗(yàn)前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。每日實(shí)驗(yàn)前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。6.6.紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為0.8%0.8%，不得超越，不得超越1%1%。7.7.運(yùn)用低離子液運(yùn)用低離子液LissLiss液稀釋紅細(xì)胞可加強(qiáng)敏感性。液稀釋紅細(xì)胞可加強(qiáng)敏感性。8.8.檢測(cè)卡應(yīng)放在檢測(cè)卡應(yīng)放在18-2518-25儲(chǔ)存，如假設(shè)長(zhǎng)期放在儲(chǔ)存，如假設(shè)長(zhǎng)期放在44冰箱，建議每冰箱，建議每1 1個(gè)月取出，用公用離心機(jī)離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。個(gè)月取出，用公用離心機(jī)離心一次

17、，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。操作步驟：操作步驟：1 1將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；志； 2 2將將0.8%0.8%待檢者和陰性對(duì)照待檢者和陰性對(duì)照安康男性安康男性O(shè) O型紅細(xì)胞懸液型紅細(xì)胞懸液各各5050l l分別參與微管中；分別參與微管中； 150l50l50l50l50l50l2345 0.8% 0.8%待檢者紅細(xì)胞懸液待檢者紅細(xì)胞懸液陰性對(duì)照陰性對(duì)照 6、抗人球蛋白檢測(cè)卡、抗人球蛋白檢測(cè)卡抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)抗人球蛋白實(shí)驗(yàn) 3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：1 1、2 2、3 3和和5 5陽(yáng)性陽(yáng)性4 4陰

18、性陰性 7. 7.抗人球蛋白檢測(cè)卡抗人球蛋白檢測(cè)卡母體母體IgGIgG抗體效價(jià)檢測(cè)抗體效價(jià)檢測(cè) 操作步驟操作步驟 1 1在試管中分別參與在試管中分別參與200200l l母體血清和母體血清和200200l 2-MEl 2-ME運(yùn)用液，然后運(yùn)用液，然后置于置于3737水浴水浴30-6030-60分鐘。以充分破壞血清中分鐘。以充分破壞血清中IgMIgM類抗體；類抗體；200200l l母體血清母體血清200200l 2-Mel 2-Me3737水浴水浴30-6030-60分鐘分鐘bioxun2取取6只干凈試管，分別做好標(biāo)志。將處置后的血清做倍比稀釋；只干凈試管，分別做好標(biāo)志。將處置后的血清做倍比稀

19、釋； 326412825651216350l 200l 200l 200l 200l 200l 標(biāo)志并參與稀釋液標(biāo)志并參與稀釋液326412825616滅活后的血清滅活后的血清50l 200l 200l 200l 200l 200l 512bioxun3 3將預(yù)備好的將預(yù)備好的HDNHDN母體母體IgGIgG抗體效價(jià)檢測(cè)卡做好標(biāo)志，在一切孔中分別參與抗體效價(jià)檢測(cè)卡做好標(biāo)志，在一切孔中分別參與5050l l父親或父親同型的父親或父親同型的0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液ABOABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)IgGIgG血型抗體或在一切孔血型抗體或在一切孔中分別參與中分別參與5050l l規(guī)范規(guī)范O O

20、型型0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液測(cè)定孕婦紅細(xì)胞懸液測(cè)定孕婦ABOABO血型系統(tǒng)以外血型系統(tǒng)以外IgGIgG血型抗血型抗體；體； 50l50l50l50l50l50l0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液bioxun4依次將依次將50l倍比稀釋血清分別參與對(duì)應(yīng)孔中；倍比稀釋血清分別參與對(duì)應(yīng)孔中； 163250l 50l 50l 50l 50l 50l 64512256128bioxun537孵育孵育15分鐘；分鐘；6離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；7結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：效價(jià)為結(jié)果：效價(jià)為 1 1：128128提示：提示： 將每次采集的血清標(biāo)本分裝凍存，每次檢測(cè)要

21、以同樣的方法、將每次采集的血清標(biāo)本分裝凍存，每次檢測(cè)要以同樣的方法、同樣的表型抗原紅細(xì)胞，當(dāng)次檢測(cè)的血清要和以前凍存的血清同時(shí)同樣的表型抗原紅細(xì)胞，當(dāng)次檢測(cè)的血清要和以前凍存的血清同時(shí)對(duì)照實(shí)驗(yàn)。對(duì)照實(shí)驗(yàn)。bioxun HDN母體母體IgG抗體效價(jià)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)本卷須知抗體效價(jià)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)本卷須知1.血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽(yáng)性反響。假陽(yáng)性反響。2.父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的A型或型或B型紅細(xì)胞替型紅細(xì)胞

22、替代。代。3.每日實(shí)驗(yàn)前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。每日實(shí)驗(yàn)前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。4.紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為0.8%，最高不超越，最高不超越1%。5.檢測(cè)卡應(yīng)放在檢測(cè)卡應(yīng)放在18-25儲(chǔ)存，如假設(shè)長(zhǎng)期放在儲(chǔ)存，如假設(shè)長(zhǎng)期放在4冰箱，冰箱，建議每建議每1-2個(gè)月取出，用公用離心機(jī)離心一次，以防止個(gè)月取出，用公用離心機(jī)離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。干膠或產(chǎn)生氣泡。6.倍比稀釋時(shí)要留意正確改換槍頭。倍比稀釋時(shí)要留意正確改換槍頭。7.滅活時(shí)要留意用封口膜密封試管口。滅活時(shí)要留意用封口膜密封試管口。bioxun50l50l50l50l50l50l操作步驟：操作步驟：1 1

23、將預(yù)備好的檢測(cè)卡做將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；好標(biāo)志；2 2將將0.80.8待檢者紅細(xì)待檢者紅細(xì)胞懸液分別參與胞懸液分別參與1-61-6管中管中, ,各各5050l l； 待檢者待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液8 8、新生兒、新生兒ABOABO、RhDRhD血型檢測(cè)卡微柱凝膠血型檢測(cè)卡微柱凝膠新生兒溶血病檢新生兒溶血病檢測(cè)卡測(cè)卡 3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：ABAB型型RhDRhD陽(yáng)性，陽(yáng)性， 直抗實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。直抗實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。 9、抗人球蛋白檢測(cè)卡、抗人球蛋白檢測(cè)卡-新生兒溶血病胎嬰兒不完全抗體檢測(cè)卡新生兒溶血

24、病胎嬰兒不完全抗體檢測(cè)卡預(yù)備任務(wù)預(yù)備任務(wù)熱放散：熱放散：取同體積的壓積血至少洗滌三次和牛血潔白蛋白混勻，置于取同體積的壓積血至少洗滌三次和牛血潔白蛋白混勻，置于56水浴水浴10分鐘，期間不斷搖動(dòng)，然后離心分鐘分鐘，期間不斷搖動(dòng)，然后離心分鐘2000rpm，取上清。即放散，取上清。即放散液。液。酸放散：酸放散： a.用生理鹽水洗滌待檢紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌待檢紅細(xì)胞4次。次。b.配制放散液配制放散液(取取4體積的放散液體積的放散液A與與1體積的放散液體積的放散液B混合均勻混合均勻)。c.將待檢壓積紅細(xì)胞與酸放散液等體積混合均勻，室溫孵育將待檢壓積紅細(xì)胞與酸放散液等體積混合均勻，室溫孵育1-2分鐘。

25、分鐘。d.以以3000rpm離心離心1-2分鐘。分鐘。e.立刻將酸放散液移到另一只干凈試管中，并參與紫紅色中和液調(diào)至肉色或水粉立刻將酸放散液移到另一只干凈試管中，并參與紫紅色中和液調(diào)至肉色或水粉色色500ul放散液參與中和液放散液參與中和液80-85ul，此時(shí)，此時(shí)PH值近中性。值近中性。f.將中和后的酸放散液再次進(jìn)展離心將中和后的酸放散液再次進(jìn)展離心3000rpm離心離心1-2分鐘取上清即放散夜分鐘取上清即放散夜。v操作步驟操作步驟v1 1將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)志；2 2將將0.80.8A A型紅細(xì)胞懸液各型紅細(xì)胞懸液各5050l l分分別參與別參與1 1號(hào)、號(hào)、4

26、 4號(hào)管中；將號(hào)管中；將0.80.8B B型紅型紅細(xì)胞懸液各細(xì)胞懸液各5050l l分別參與分別參與2 2號(hào)、號(hào)、5 5號(hào)；號(hào)；將將0.80.8的的O O型紅細(xì)胞懸液各型紅細(xì)胞懸液各5050l l分別分別參與參與3 3號(hào)、號(hào)、6 6號(hào)孔中；號(hào)孔中；3 3將將1313管分別參與管分別參與5050l l新生兒血漿新生兒血漿，4646管分別參與管分別參與5050l l新生兒紅細(xì)胞新生兒紅細(xì)胞放散液；放散液；50l50l50l50l50l50lA BO0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液新生兒血漿新生兒血漿50l50l50l50l50l50l新生兒紅細(xì)胞放散液新生兒紅細(xì)胞放散液437孵育孵育15分鐘；

27、分鐘；5離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：游離抗體陽(yáng)性、放散實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果：游離抗體陽(yáng)性、放散實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性 新生兒溶血病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)本卷須知新生兒溶血病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)本卷須知1.紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽(yáng)性反響。盡能紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽(yáng)性反響。盡能夠運(yùn)用當(dāng)日采集的新穎血做本實(shí)驗(yàn)。如不得不用過(guò)夜血或陳舊夠運(yùn)用當(dāng)日采集的新穎血做本實(shí)驗(yàn)。如不得不用過(guò)夜血或陳舊血，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以確定該標(biāo)天性血，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，以確定該標(biāo)天性否可以做本實(shí)驗(yàn)。否可以做本實(shí)驗(yàn)。2.血清標(biāo)本

28、：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽(yáng)性反響。蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽(yáng)性反響。3.如在微柱凝膠中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽(yáng)性如在微柱凝膠中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽(yáng)性反響，也不排除其他緣由所致溶血，故對(duì)此標(biāo)本一定仔細(xì)分析反響，也不排除其他緣由所致溶血，故對(duì)此標(biāo)本一定仔細(xì)分析，并向上級(jí)主管技術(shù)人員多報(bào)告并討論。，并向上級(jí)主管技術(shù)人員多報(bào)告并討論。4.父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的A型或型或B型紅細(xì)胞替代。型紅細(xì)

29、胞替代。5.洗出盡量多紅細(xì)胞進(jìn)展放散；留意放散的溫度不可超越洗出盡量多紅細(xì)胞進(jìn)展放散；留意放散的溫度不可超越56，以，以防溶血；酸放散室溫孵育時(shí)間必需在防溶血；酸放散室溫孵育時(shí)間必需在1-2分鐘之間；天冷時(shí)放散分鐘之間；天冷時(shí)放散液留意保溫；盡能夠多得放散液吸出；留意除去放散液中殘留液留意保溫；盡能夠多得放散液吸出；留意除去放散液中殘留的紅細(xì)胞；放散前紅細(xì)胞要充分洗滌，至少三次。的紅細(xì)胞；放散前紅細(xì)胞要充分洗滌，至少三次。6.每日實(shí)驗(yàn)前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。每日實(shí)驗(yàn)前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。7.紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為0.8%，最高不超越，最高不超越1%。8.檢測(cè)

30、卡應(yīng)放在檢測(cè)卡應(yīng)放在18-25儲(chǔ)存，如假設(shè)長(zhǎng)期放在儲(chǔ)存，如假設(shè)長(zhǎng)期放在4冰箱，建議每冰箱，建議每1-2個(gè)月取出，用公用離心機(jī)離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。個(gè)月取出，用公用離心機(jī)離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。臨床遇到的一些問(wèn)題及緣由的分析臨床遇到的一些問(wèn)題及緣由的分析問(wèn)題問(wèn)題1：正反定型卡反定型側(cè)出現(xiàn)弱陽(yáng)性結(jié)果：正反定型卡反定型側(cè)出現(xiàn)弱陽(yáng)性結(jié)果緣由及分析緣由及分析能夠是一些特殊標(biāo)本如血液病、腫瘤病人和老年人等抗體比較弱，有些大醫(yī)能夠是一些特殊標(biāo)本如血液病、腫瘤病人和老年人等抗體比較弱，有些大醫(yī)院做過(guò)統(tǒng)計(jì)當(dāng)?shù)卦鹤鲞^(guò)統(tǒng)計(jì)當(dāng)?shù)?0%左右的人群存在此情況，不同地域比例能夠不同。左右的人群存在此情況，

31、不同地域比例能夠不同。處置方法處置方法加樣后加樣后2-8 孵育孵育1015分鐘，可添加弱抗體檢出率。分鐘，可添加弱抗體檢出率。問(wèn)題問(wèn)題2. 正反定型卡正定型結(jié)果陽(yáng)性弱正反定型卡正定型結(jié)果陽(yáng)性弱緣由及分析緣由及分析能夠是一些特殊疾病引起抗原減弱。能夠是一些特殊疾病引起抗原減弱。處置方法處置方法加樣后室溫孵育加樣后室溫孵育1015分鐘，可添加弱抗原檢出率。分鐘，可添加弱抗原檢出率。問(wèn)題問(wèn)題3. 交叉配血陰性結(jié)果不好假陽(yáng)性，有交叉配血陰性結(jié)果不好假陽(yáng)性，有1+或或2+結(jié)果結(jié)果緣由及分析緣由及分析 a. 標(biāo)本本身的問(wèn)題放置時(shí)間長(zhǎng)、標(biāo)本本身存在致敏景象、標(biāo)本被標(biāo)本本身的問(wèn)題放置時(shí)間長(zhǎng)、標(biāo)本本身存在致敏景

32、象、標(biāo)本被污染。污染。 b. 低于實(shí)驗(yàn)要求溫度或沒(méi)有孵育，特別是在冬天很容易出現(xiàn)此問(wèn)低于實(shí)驗(yàn)要求溫度或沒(méi)有孵育，特別是在冬天很容易出現(xiàn)此問(wèn)題。題。問(wèn)題問(wèn)題4. 4. 正反定型不符正反定型不符緣由及分析緣由及分析a. a. 一些特殊疾病引起。一些特殊疾病引起。b. b. 新生兒抗體弱或無(wú)抗體。新生兒抗體弱或無(wú)抗體。c. c. 抗原弱或亞型引起。抗原弱或亞型引起。問(wèn)題問(wèn)題5. 血型卡或抗人球卡出現(xiàn)混合凝集及疑似景象血型卡或抗人球卡出現(xiàn)混合凝集及疑似景象緣由及分析緣由及分析a.不同血型相容性輸血、骨髓移植和器官移植等。不同血型相容性輸血、骨髓移植和器官移植等。b.標(biāo)本存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，存在一些細(xì)胞碎片、細(xì)胞團(tuán)塊或纖維標(biāo)本存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，存在一些細(xì)胞碎片、細(xì)胞團(tuán)塊或纖維蛋白在膠上部構(gòu)成紅線或紅色圓環(huán)。蛋白在膠上部構(gòu)成紅線或紅色圓環(huán)。c.亞型亞型問(wèn)題問(wèn)題6. 母體效價(jià)卡結(jié)果各稀釋度都為陽(yáng)性母體效價(jià)卡結(jié)果各稀釋度都為陽(yáng)性緣由及分析緣由及分析滅活不完全或者稀釋度不夠。滅活不完全或者稀釋度不夠。處置方法處置方法重新滅活或重新滅活或先將血清標(biāo)本稀釋，取先將血清標(biāo)本稀釋，取4+最高稀釋倍數(shù)的血清用等量最高稀釋倍數(shù)的血清用等量2-me滅活。滅活。問(wèn)題問(wèn)題7. 7. 卡式法檢測(cè)卡式法檢測(cè)HDNHDN母體母體IgGIgG抗體效價(jià)的臨界值抗體效價(jià)的臨界值 卡式