微柱凝膠免疫檢測技術(shù)博迅產(chǎn)品操作03版ppt課件

1、微柱凝膠免疫檢測技術(shù)微柱凝膠免疫檢測技術(shù) 反響原理反響原理 微柱凝膠免疫反響的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集實驗，也可微柱凝膠免疫反響的本質(zhì)是紅細(xì)胞凝集實驗，也可稱之微柱凝膠血凝實驗稱之微柱凝膠血凝實驗Microcolumn Gel Microcolumn Gel Heamagglutination AssayHeamagglutination Assay，MGHAMGHA。 在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，構(gòu)成在微柱凝膠管中，紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體結(jié)合后，構(gòu)成紅細(xì)胞凝集團塊。在一定離心力下，該凝集團塊位于膠紅細(xì)胞凝集團塊。在一定離心力下，該凝集團塊位于膠外表或膠中；而紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為分散的外

2、表或膠中；而紅細(xì)胞未和相應(yīng)抗體結(jié)合，仍為分散的紅細(xì)胞，在同樣的離心力下，紅細(xì)胞沉降到微柱管尖底紅細(xì)胞，在同樣的離心力下，紅細(xì)胞沉降到微柱管尖底部。部。4+4+2+2+- - 特點和優(yōu)點特點和優(yōu)點 簡單：不需洗滌，對陰性結(jié)果不需確證實驗，適用于大量標(biāo)本簡單：不需洗滌，對陰性結(jié)果不需確證實驗，適用于大量標(biāo)本檢測，處理了檢測，處理了CoombsCoombs實驗由于程序復(fù)雜費時等緣由未能在臨床常規(guī)實驗由于程序復(fù)雜費時等緣由未能在臨床常規(guī)運用問題。運用問題。 使不完全抗體檢測實際使不完全抗體檢測實際“金規(guī)范成為臨床的金規(guī)范成為臨床的“金規(guī)范。金規(guī)范。 多份標(biāo)本一次離心出結(jié)果，有利于臨床大量標(biāo)本檢測。多份

3、標(biāo)本一次離心出結(jié)果，有利于臨床大量標(biāo)本檢測。 另外還具備準(zhǔn)確、敏感、標(biāo)本用量少、結(jié)果保管時間長、易于另外還具備準(zhǔn)確、敏感、標(biāo)本用量少、結(jié)果保管時間長、易于規(guī)范化、規(guī)范化、 操作更平安等優(yōu)點。操作更平安等優(yōu)點。產(chǎn)品操作產(chǎn)品操作一一.預(yù)備任務(wù)預(yù)備任務(wù)檢測卡的預(yù)備檢測卡的預(yù)備1.在在18-25條件下平衡條件下平衡30分鐘。分鐘。2.離心離心2-3分鐘，平衡反響介質(zhì)。分鐘，平衡反響介質(zhì)。3.外觀檢查應(yīng)無氣泡、干膠和雜質(zhì)。外觀檢查應(yīng)無氣泡、干膠和雜質(zhì)。4.要緩慢撕膜。防止膜面上的液滴凝結(jié)因冷熱交替產(chǎn)生的污染鄰孔。要緩慢撕膜。防止膜面上的液滴凝結(jié)因冷熱交替產(chǎn)生的污染鄰孔。離心！檢測標(biāo)本的預(yù)備檢測標(biāo)本的預(yù)備

4、1.1.標(biāo)本要求用標(biāo)本要求用EDTAEDTA抗凝管采集的新穎血如陳舊血需設(shè)陰抗凝管采集的新穎血如陳舊血需設(shè)陰性對照。性對照。2.2.抗凝血樣標(biāo)本要上清廓清。如有纖毛狀、渾濁、乳糜、抗凝血樣標(biāo)本要上清廓清。如有纖毛狀、渾濁、乳糜、溶血、脂肪等狀，應(yīng)溶血、脂肪等狀，應(yīng) 再次洗滌離心。為防止纖維蛋白影再次洗滌離心。為防止纖維蛋白影響紅細(xì)胞沉降，建議運用紅細(xì)胞稀釋液。響紅細(xì)胞沉降，建議運用紅細(xì)胞稀釋液。3.3.血辮血樣須放置試管中離心處置，確保血清廓清微黃。血辮血樣須放置試管中離心處置，確保血清廓清微黃。必要時需洗滌。必要時需洗滌。4.4.在在18-2518-25條件下平衡條件下平衡3030分鐘，防止

5、冷凝集。分鐘，防止冷凝集。紅細(xì)胞懸液的制備紅細(xì)胞懸液的制備1.1.將紅細(xì)胞配制為將紅細(xì)胞配制為0.8%0.8%的懸液，最高濃度不要超越的懸液，最高濃度不要超越1% 1% 。如。如: :取取8l 8l 壓積紅細(xì)胞，參與到壓積紅細(xì)胞，參與到1ml1ml的紅細(xì)胞稀釋液抗人球的紅細(xì)胞稀釋液抗人球蛋白實驗要求用低離子液配置紅細(xì)胞懸液中，配制出的蛋白實驗要求用低離子液配置紅細(xì)胞懸液中，配制出的紅細(xì)胞懸液濃度大約為紅細(xì)胞懸液濃度大約為0.8%0.8%。2.2.外觀檢查呈均勻淡紅色，無血塊、無絮狀物如有纖維外觀檢查呈均勻淡紅色，無血塊、無絮狀物如有纖維蛋白需去除。蛋白需去除。二二. .結(jié)果斷定結(jié)果斷定陽性結(jié)果

6、：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中構(gòu)成的特異性抗陽性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中構(gòu)成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠外表或膠中，為陽性反響。原抗體復(fù)合物浮在凝膠外表或膠中，為陽性反響。陰性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗陰性結(jié)果：紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部，為陰性反響。體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部，為陰性反響。反響強度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于膠外表，為強陽性反響強度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于膠外表，為強陽性反響；復(fù)合物在膠中，為弱陽性反響；愈接近膠底部顆粒愈小，反響；復(fù)合物在膠中，為弱陽性

7、反響；愈接近膠底部顆粒愈小，反響愈弱。反響愈弱。 ？4+ 4+ 紅細(xì)胞復(fù)合物凝集位于凝膠外表紅細(xì)胞復(fù)合物凝集位于凝膠外表3+ 3+ 大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表，少部分位于凝膠中部大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表，少部分位于凝膠中部2+ 2+ 大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部大部分紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中部，少部分位于凝膠中上部1+ 1+ 紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中下部紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠中下部 與同一卡中陰性管結(jié)果對照，如與陰性結(jié)果有差別，即為與同一卡中陰性管結(jié)果對照，如與陰性結(jié)果有差別，即為 - - 紅細(xì)胞完全堆積在凝膠管尖底部紅細(xì)胞完全堆積在凝膠管尖底部完全溶血完全溶血 凝

8、膠和液體無凝集或未凝集的紅細(xì)胞，液體出現(xiàn)透明清澈紅色凝膠和液體無凝集或未凝集的紅細(xì)胞，液體出現(xiàn)透明清澈紅色不完全溶血不完全溶血 殘留紅細(xì)胞在膠外表、膠中或膠底部，液體出現(xiàn)透明清澈紅色殘留紅細(xì)胞在膠外表、膠中或膠底部，液體出現(xiàn)透明清澈紅色混合凝集混合凝集 紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表和凝膠底部紅細(xì)胞復(fù)合物位于凝膠外表和凝膠底部 完全完全 不完全不完全 混合凝集混合凝集景象及闡明景象及闡明反響強度反響強度三、規(guī)范操作規(guī)程三、規(guī)范操作規(guī)程 1、ABO、RhD血型定型檢測卡單克隆抗體血型定型檢測卡單克隆抗體操作步驟：操作步驟：1將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；2將待檢者血漿分別參與將待

9、檢者血漿分別參與5-6管中，各管中，各50l；50l50l待檢者血漿待檢者血漿3 3將待檢者將待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液分別參與紅細(xì)胞懸液分別參與1-41-4管中，管中，各各5050l l；待檢者待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液50l50l50l50l4 4取取0.8%0.8%的的ABOABO血型反定型紅細(xì)胞試劑，分別參血型反定型紅細(xì)胞試劑，分別參與與5-65-6管中，各管中，各5050l l；50l50lA A細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞5離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：A A型型RhDRhD陽性陽性50l5

10、0l50l2 2、ABOABO、RhDRhD血型檢測卡微柱凝膠血型檢測卡微柱凝膠操作步驟：操作步驟：1 1將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；2 2將待檢者將待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液分別參與第紅細(xì)胞懸液分別參與第1313或或4646管中，各管中，各5050l l； 待檢者的待檢者的0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：1.A1.A型型RhDRhD陽性；陽性； 2.B 2.B型型RhDRhD陽性陽性 3、Rh血型抗原檢測卡單克隆抗體血型抗原檢測卡單克隆抗體操作步驟操作

11、步驟:1將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；2將待檢者將待檢者0.8%紅細(xì)胞懸液分別參與紅細(xì)胞懸液分別參與16管中，各管中，各50l；待檢者待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液50l50l50l50l50l50l3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：RhDRhD、C C、e e陽性陽性4 4、抗人球蛋白檢測卡、抗人球蛋白檢測卡不規(guī)那么抗體篩不規(guī)那么抗體篩檢檢 操作步驟：操作步驟：1 1將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志； 2 2將將0.8%0.8%、篩檢紅細(xì)胞各篩檢紅細(xì)胞各5050l l

12、分別參與對應(yīng)的微管中分別參與對應(yīng)的微管中; ; 50l50l50l0.8%0.8%、篩檢紅細(xì)胞篩檢紅細(xì)胞bioxun3將待檢者血漿各將待檢者血漿各50l分別參與分別參與、微管中；微管中；437孵育孵育15分鐘；分鐘；待檢者血漿待檢者血漿50l50l50lllbioxun50l50l50l5 5離心離心5 5分鐘分鐘900rpm2900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm31500rpm3分鐘；分鐘；6 6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。根據(jù)當(dāng)前運用的篩檢紅細(xì)胞的反響格局來斷定根據(jù)當(dāng)前運用的篩檢紅細(xì)胞的反響格局來斷定bioxun 5 5、抗人球蛋白檢測卡、抗人球蛋白檢測卡交叉配血實驗交叉配血實驗操作步驟：操作

13、步驟：1 1將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志； 2 2將供血者將供血者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液與受血者血漿各紅細(xì)胞懸液與受血者血漿各5050l l先后參與主側(cè)管先后參與主側(cè)管中；中； 受血者血漿受血者血漿50l供血者紅細(xì)胞懸液供血者紅細(xì)胞懸液50l3將受血者將受血者0.8%紅細(xì)胞懸液與供血者血漿各紅細(xì)胞懸液與供血者血漿各50l先后參與次側(cè)先后參與次側(cè)管中；管中；437孵育孵育15分鐘；分鐘；供血者血漿供血者血漿50l受血者紅細(xì)胞懸液受血者紅細(xì)胞懸液50l5離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。例如上圖：例如上圖：1、3

14、不配合；不配合；2配合配合 交叉配血實驗本卷須知交叉配血實驗本卷須知1.1.運用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫實驗檢測病人紅細(xì)胞時，一定運用直接抗人球蛋白微柱凝膠免疫實驗檢測病人紅細(xì)胞時，一定要用適量要用適量EDTAEDTA的試管采血液標(biāo)本，該標(biāo)本不能放入的試管采血液標(biāo)本，該標(biāo)本不能放入2-82-8冰箱冰箱保管，以防止紅細(xì)胞在病人體外致敏所致假陽性反響。保管，以防止紅細(xì)胞在病人體外致敏所致假陽性反響。2.2.紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽性反響。盡能紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽性反響。盡能夠運用當(dāng)日采集的新穎血做本實驗。如不得不用過夜血或陳舊血夠運用當(dāng)日采集的新穎血做

15、本實驗。如不得不用過夜血或陳舊血，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對照實驗，以確定該標(biāo)天性否可，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對照實驗，以確定該標(biāo)天性否可以做本實驗。以做本實驗。3.3.血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙陰性紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反響。白在微柱凝膠中析出，妨礙陰性紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反響。4.4.如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽如在微柱凝膠管中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反響，也不排除其他緣由所致溶血，故對此標(biāo)本一定仔細(xì)分析性反響，也不排除其他緣由所致

16、溶血，故對此標(biāo)本一定仔細(xì)分析，并向上級主管技術(shù)人員報告并討論其緣由。，并向上級主管技術(shù)人員報告并討論其緣由。5.5.每日實驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。每日實驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。6.6.紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為0.8%0.8%，不得超越，不得超越1%1%。7.7.運用低離子液運用低離子液LissLiss液稀釋紅細(xì)胞可加強敏感性。液稀釋紅細(xì)胞可加強敏感性。8.8.檢測卡應(yīng)放在檢測卡應(yīng)放在18-2518-25儲存，如假設(shè)長期放在儲存，如假設(shè)長期放在44冰箱，建議每冰箱，建議每1 1個月取出，用公用離心機離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。個月取出，用公用離心機離心一次

17、，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。操作步驟：操作步驟：1 1將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；志； 2 2將將0.8%0.8%待檢者和陰性對照待檢者和陰性對照安康男性安康男性O(shè) O型紅細(xì)胞懸液型紅細(xì)胞懸液各各5050l l分別參與微管中；分別參與微管中； 150l50l50l50l50l50l2345 0.8% 0.8%待檢者紅細(xì)胞懸液待檢者紅細(xì)胞懸液陰性對照陰性對照 6、抗人球蛋白檢測卡、抗人球蛋白檢測卡抗人球蛋白實驗抗人球蛋白實驗 3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：1 1、2 2、3 3和和5 5陽性陽性4 4陰

18、性陰性 7. 7.抗人球蛋白檢測卡抗人球蛋白檢測卡母體母體IgGIgG抗體效價檢測抗體效價檢測 操作步驟操作步驟 1 1在試管中分別參與在試管中分別參與200200l l母體血清和母體血清和200200l 2-MEl 2-ME運用液，然后運用液，然后置于置于3737水浴水浴30-6030-60分鐘。以充分破壞血清中分鐘。以充分破壞血清中IgMIgM類抗體；類抗體；200200l l母體血清母體血清200200l 2-Mel 2-Me3737水浴水浴30-6030-60分鐘分鐘bioxun2取取6只干凈試管，分別做好標(biāo)志。將處置后的血清做倍比稀釋；只干凈試管，分別做好標(biāo)志。將處置后的血清做倍比稀

19、釋； 326412825651216350l 200l 200l 200l 200l 200l 標(biāo)志并參與稀釋液標(biāo)志并參與稀釋液326412825616滅活后的血清滅活后的血清50l 200l 200l 200l 200l 200l 512bioxun3 3將預(yù)備好的將預(yù)備好的HDNHDN母體母體IgGIgG抗體效價檢測卡做好標(biāo)志，在一切孔中分別參與抗體效價檢測卡做好標(biāo)志，在一切孔中分別參與5050l l父親或父親同型的父親或父親同型的0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液ABOABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)IgGIgG血型抗體或在一切孔血型抗體或在一切孔中分別參與中分別參與5050l l規(guī)范規(guī)范O O

20、型型0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液測定孕婦紅細(xì)胞懸液測定孕婦ABOABO血型系統(tǒng)以外血型系統(tǒng)以外IgGIgG血型抗血型抗體；體； 50l50l50l50l50l50l0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液bioxun4依次將依次將50l倍比稀釋血清分別參與對應(yīng)孔中；倍比稀釋血清分別參與對應(yīng)孔中； 163250l 50l 50l 50l 50l 50l 64512256128bioxun537孵育孵育15分鐘；分鐘；6離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；7結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：效價為結(jié)果：效價為 1 1：128128提示：提示： 將每次采集的血清標(biāo)本分裝凍存，每次檢測要

21、以同樣的方法、將每次采集的血清標(biāo)本分裝凍存，每次檢測要以同樣的方法、同樣的表型抗原紅細(xì)胞，當(dāng)次檢測的血清要和以前凍存的血清同時同樣的表型抗原紅細(xì)胞，當(dāng)次檢測的血清要和以前凍存的血清同時對照實驗。對照實驗。bioxun HDN母體母體IgG抗體效價檢測實驗本卷須知抗體效價檢測實驗本卷須知1.血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反響。假陽性反響。2.父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的A型或型或B型紅細(xì)胞替型紅細(xì)胞

22、替代。代。3.每日實驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。每日實驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。4.紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為0.8%，最高不超越，最高不超越1%。5.檢測卡應(yīng)放在檢測卡應(yīng)放在18-25儲存，如假設(shè)長期放在儲存，如假設(shè)長期放在4冰箱，冰箱，建議每建議每1-2個月取出，用公用離心機離心一次，以防止個月取出，用公用離心機離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。干膠或產(chǎn)生氣泡。6.倍比稀釋時要留意正確改換槍頭。倍比稀釋時要留意正確改換槍頭。7.滅活時要留意用封口膜密封試管口。滅活時要留意用封口膜密封試管口。bioxun50l50l50l50l50l50l操作步驟：操作步驟：1 1

23、將預(yù)備好的檢測卡做將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；好標(biāo)志；2 2將將0.80.8待檢者紅細(xì)待檢者紅細(xì)胞懸液分別參與胞懸液分別參與1-61-6管中管中, ,各各5050l l； 待檢者待檢者0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液8 8、新生兒、新生兒ABOABO、RhDRhD血型檢測卡微柱凝膠血型檢測卡微柱凝膠新生兒溶血病檢新生兒溶血病檢測卡測卡 3離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；4結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：結(jié)果：ABAB型型RhDRhD陽性，陽性， 直抗實驗陽性。直抗實驗陽性。 9、抗人球蛋白檢測卡、抗人球蛋白檢測卡-新生兒溶血病胎嬰兒不完全抗體檢測卡新生兒溶血

24、病胎嬰兒不完全抗體檢測卡預(yù)備任務(wù)預(yù)備任務(wù)熱放散：熱放散：取同體積的壓積血至少洗滌三次和牛血潔白蛋白混勻，置于取同體積的壓積血至少洗滌三次和牛血潔白蛋白混勻，置于56水浴水浴10分鐘，期間不斷搖動，然后離心分鐘分鐘，期間不斷搖動，然后離心分鐘2000rpm，取上清。即放散，取上清。即放散液。液。酸放散：酸放散： a.用生理鹽水洗滌待檢紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌待檢紅細(xì)胞4次。次。b.配制放散液配制放散液(取取4體積的放散液體積的放散液A與與1體積的放散液體積的放散液B混合均勻混合均勻)。c.將待檢壓積紅細(xì)胞與酸放散液等體積混合均勻，室溫孵育將待檢壓積紅細(xì)胞與酸放散液等體積混合均勻，室溫孵育1-2分鐘。

25、分鐘。d.以以3000rpm離心離心1-2分鐘。分鐘。e.立刻將酸放散液移到另一只干凈試管中，并參與紫紅色中和液調(diào)至肉色或水粉立刻將酸放散液移到另一只干凈試管中，并參與紫紅色中和液調(diào)至肉色或水粉色色500ul放散液參與中和液放散液參與中和液80-85ul，此時，此時PH值近中性。值近中性。f.將中和后的酸放散液再次進展離心將中和后的酸放散液再次進展離心3000rpm離心離心1-2分鐘取上清即放散夜分鐘取上清即放散夜。v操作步驟操作步驟v1 1將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；將預(yù)備好的檢測卡做好標(biāo)志；2 2將將0.80.8A A型紅細(xì)胞懸液各型紅細(xì)胞懸液各5050l l分分別參與別參與1 1號、號、4

26、 4號管中；將號管中；將0.80.8B B型紅型紅細(xì)胞懸液各細(xì)胞懸液各5050l l分別參與分別參與2 2號、號、5 5號；號；將將0.80.8的的O O型紅細(xì)胞懸液各型紅細(xì)胞懸液各5050l l分別分別參與參與3 3號、號、6 6號孔中；號孔中；3 3將將1313管分別參與管分別參與5050l l新生兒血漿新生兒血漿，4646管分別參與管分別參與5050l l新生兒紅細(xì)胞新生兒紅細(xì)胞放散液；放散液；50l50l50l50l50l50lA BO0.8%0.8%紅細(xì)胞懸液紅細(xì)胞懸液新生兒血漿新生兒血漿50l50l50l50l50l50l新生兒紅細(xì)胞放散液新生兒紅細(xì)胞放散液437孵育孵育15分鐘；

27、分鐘；5離心離心5分鐘分鐘900rpm2分鐘，分鐘，1500rpm3分鐘；分鐘；6結(jié)果判讀。結(jié)果判讀。結(jié)果：游離抗體陽性、放散實驗陽性結(jié)果：游離抗體陽性、放散實驗陽性 新生兒溶血病檢測實驗本卷須知新生兒溶血病檢測實驗本卷須知1.紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽性反響。盡能紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否那么出現(xiàn)假陽性反響。盡能夠運用當(dāng)日采集的新穎血做本實驗。如不得不用過夜血或陳舊夠運用當(dāng)日采集的新穎血做本實驗。如不得不用過夜血或陳舊血，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對照實驗，以確定該標(biāo)天性血，那么必需首先用該標(biāo)本做陰性對照實驗，以確定該標(biāo)天性否可以做本實驗。否可以做本實驗。2.血清標(biāo)本

28、：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必需充分去除纖維蛋白，否那么標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反響。蛋白在微柱凝膠中析出，妨礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反響。3.如在微柱凝膠中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性如在微柱凝膠中出現(xiàn)溶血景象，劇烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反響，也不排除其他緣由所致溶血，故對此標(biāo)本一定仔細(xì)分析反響，也不排除其他緣由所致溶血，故對此標(biāo)本一定仔細(xì)分析，并向上級主管技術(shù)人員多報告并討論。，并向上級主管技術(shù)人員多報告并討論。4.父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的A型或型或B型紅細(xì)胞替代。型紅細(xì)

29、胞替代。5.洗出盡量多紅細(xì)胞進展放散；留意放散的溫度不可超越洗出盡量多紅細(xì)胞進展放散；留意放散的溫度不可超越56，以，以防溶血；酸放散室溫孵育時間必需在防溶血；酸放散室溫孵育時間必需在1-2分鐘之間；天冷時放散分鐘之間；天冷時放散液留意保溫；盡能夠多得放散液吸出；留意除去放散液中殘留液留意保溫；盡能夠多得放散液吸出；留意除去放散液中殘留的紅細(xì)胞；放散前紅細(xì)胞要充分洗滌，至少三次。的紅細(xì)胞；放散前紅細(xì)胞要充分洗滌，至少三次。6.每日實驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。每日實驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。7.紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為紅細(xì)胞懸液的濃度應(yīng)為0.8%，最高不超越，最高不超越1%。8.檢測

30、卡應(yīng)放在檢測卡應(yīng)放在18-25儲存，如假設(shè)長期放在儲存，如假設(shè)長期放在4冰箱，建議每冰箱，建議每1-2個月取出，用公用離心機離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。個月取出，用公用離心機離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。臨床遇到的一些問題及緣由的分析臨床遇到的一些問題及緣由的分析問題問題1：正反定型卡反定型側(cè)出現(xiàn)弱陽性結(jié)果：正反定型卡反定型側(cè)出現(xiàn)弱陽性結(jié)果緣由及分析緣由及分析能夠是一些特殊標(biāo)本如血液病、腫瘤病人和老年人等抗體比較弱，有些大醫(yī)能夠是一些特殊標(biāo)本如血液病、腫瘤病人和老年人等抗體比較弱，有些大醫(yī)院做過統(tǒng)計當(dāng)?shù)卦鹤鲞^統(tǒng)計當(dāng)?shù)?0%左右的人群存在此情況，不同地域比例能夠不同。左右的人群存在此情況，

31、不同地域比例能夠不同。處置方法處置方法加樣后加樣后2-8 孵育孵育1015分鐘，可添加弱抗體檢出率。分鐘，可添加弱抗體檢出率。問題問題2. 正反定型卡正定型結(jié)果陽性弱正反定型卡正定型結(jié)果陽性弱緣由及分析緣由及分析能夠是一些特殊疾病引起抗原減弱。能夠是一些特殊疾病引起抗原減弱。處置方法處置方法加樣后室溫孵育加樣后室溫孵育1015分鐘，可添加弱抗原檢出率。分鐘，可添加弱抗原檢出率。問題問題3. 交叉配血陰性結(jié)果不好假陽性，有交叉配血陰性結(jié)果不好假陽性，有1+或或2+結(jié)果結(jié)果緣由及分析緣由及分析 a. 標(biāo)本本身的問題放置時間長、標(biāo)本本身存在致敏景象、標(biāo)本被標(biāo)本本身的問題放置時間長、標(biāo)本本身存在致敏景

32、象、標(biāo)本被污染。污染。 b. 低于實驗要求溫度或沒有孵育，特別是在冬天很容易出現(xiàn)此問低于實驗要求溫度或沒有孵育，特別是在冬天很容易出現(xiàn)此問題。題。問題問題4. 4. 正反定型不符正反定型不符緣由及分析緣由及分析a. a. 一些特殊疾病引起。一些特殊疾病引起。b. b. 新生兒抗體弱或無抗體。新生兒抗體弱或無抗體。c. c. 抗原弱或亞型引起?？乖趸騺喰鸵?。問題問題5. 血型卡或抗人球卡出現(xiàn)混合凝集及疑似景象血型卡或抗人球卡出現(xiàn)混合凝集及疑似景象緣由及分析緣由及分析a.不同血型相容性輸血、骨髓移植和器官移植等。不同血型相容性輸血、骨髓移植和器官移植等。b.標(biāo)本存放時間過長，存在一些細(xì)胞碎片、細(xì)胞團塊或纖維標(biāo)本存放時間過長，存在一些細(xì)胞碎片、細(xì)胞團塊或纖維蛋白在膠上部構(gòu)成紅線或紅色圓環(huán)。蛋白在膠上部構(gòu)成紅線或紅色圓環(huán)。c.亞型亞型問題問題6. 母體效價卡結(jié)果各稀釋度都為陽性母體效價卡結(jié)果各稀釋度都為陽性緣由及分析緣由及分析滅活不完全或者稀釋度不夠。滅活不完全或者稀釋度不夠。處置方法處置方法重新滅活或重新滅活或先將血清標(biāo)本稀釋，取先將血清標(biāo)本稀釋，取4+最高稀釋倍數(shù)的血清用等量最高稀釋倍數(shù)的血清用等量2-me滅活。滅活。問題問題7. 7. 卡式法檢測卡式法檢測HDNHDN母體母體IgGIgG抗體效價的臨界值抗體效價的臨界值 卡式