第4章 藥物含量測定方法與驗證

1、第四章 藥物的含量測定方法主講主講: 朱金芳朱金芳藥物的藥物的含量含量指指藥物中所含的藥物中所含的主成分主成分的量，是的量，是評價藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)。評價藥物質(zhì)量的重要指標(biāo)。定定義義基基礎(chǔ)礎(chǔ)目目標(biāo)標(biāo)基于化學(xué)或基于化學(xué)或物理學(xué)原理物理學(xué)原理的的含量測定含量測定藥物的含量測定藥物的含量測定基于生物學(xué)基于生物學(xué)原理的原理的效價效價測定測定本章的本章的目標(biāo)目標(biāo)含量測定含量測定生物檢定法生物檢定法，微生物檢，微生物檢定法，酶法定法，酶法藥物的含量測定藥物的含量測定三種三種分析分析方法方法特點(diǎn)特點(diǎn)特點(diǎn)特點(diǎn)特點(diǎn)特點(diǎn)適用于準(zhǔn)確適用于準(zhǔn)確度與精確度度與精確度要求較高的要求較高的樣品測定樣品測定容量分容量分析法析

2、法光譜分光譜分析法析法色譜分色譜分析法析法操作簡單、結(jié)操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確，耐用果準(zhǔn)確，耐用性高，但專屬性高，但專屬性差性差簡便快速、靈簡便快速、靈敏度高，有一敏度高，有一定的準(zhǔn)確度，定的準(zhǔn)確度，但專屬性稍差但專屬性稍差靈敏度與專屬性靈敏度與專屬性都高，有一定的都高，有一定的準(zhǔn)確度，但結(jié)果準(zhǔn)確度，但結(jié)果需要對照品需要對照品適用于靈敏適用于靈敏度要求較高，度要求較高，樣本量較大樣本量較大的分析項目的分析項目適用于專屬適用于專屬性和靈敏度性和靈敏度要求較高的要求較高的復(fù)雜樣品復(fù)雜樣品第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)一、容量一、容量分析法分析法定義定義亦稱亦稱特點(diǎn)特點(diǎn)適用

3、適用范圍范圍滴定法滴定法將已知濃度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液），由滴定管滴加到將已知濃度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液），由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全（被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全（通通過過適當(dāng)方法適當(dāng)方法指示指示），然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗），然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。的體積，按化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。通過通過指示劑顏色指示劑顏色變化，或者電子變化，或者電子設(shè)備的電位或電設(shè)備的電位或電流突變來指示滴流突變來指示滴定終點(diǎn)定終點(diǎn)1、方法簡便易行：所用儀器價廉易得，操、方法簡便易行：所用儀

4、器價廉易得，操作簡便快速作簡便快速2、方法耐用性高：影響測定的試驗條件與、方法耐用性高：影響測定的試驗條件與環(huán)境因素環(huán)境因素少少3、測定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于、測定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于0.2%，滿足準(zhǔn)，滿足準(zhǔn)確度高確度高樣品樣品4、方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選、方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品擇，適用于主成分含量較高的樣品分析分析廣泛應(yīng)用于廣泛應(yīng)用于化學(xué)原料化學(xué)原料的的測定，較少應(yīng)用于藥物測定，較少應(yīng)用于藥物制劑的制劑的測定。測定。容量分析法有容量分析法有關(guān)計算關(guān)計算滴定度滴定度：每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物質(zhì)量。中國藥典用毫克（mg）表示。例如：用

5、例如：用碘量法測定維生素碘量法測定維生素C的的含量時，含量時，中國藥典中國藥典規(guī)定：每規(guī)定：每1ml碘滴定液（碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)）相當(dāng)于于8.806mg的維生素的維生素C（C2H8O6）第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)dDcCbBaA被測藥物被測藥物 滴定液滴定液滴定度計算滴定度計算WAWBaMAbMB=滴定液反應(yīng)的質(zhì)量滴定液反應(yīng)的質(zhì)量被測藥物反應(yīng)的質(zhì)量被測藥物反應(yīng)的質(zhì)量被測藥物的摩爾質(zhì)量被測藥物的摩爾質(zhì)量滴定液的摩爾質(zhì)量滴定液的摩爾質(zhì)量第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)容量分析法容量分析法有關(guān)計算有關(guān)計算ABABBAM

6、banMbMWWABBMbaVm示例一 計算Vc的滴定度T碘量法測定Vc含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LHI2OHCIOHC6662686Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0511176.13=8.806(mg/ml)Mb=0.05mol/L11MA=176.13示例二 異煙肼的滴定度溴酸鉀法測定異煙肼含量M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸鉀溴酸鉀=0.01667mol/LOH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376Mbam)ml/mg(TT =mbaM=0.0166732137.14=3.429(mg/ml)ab%1

7、00(%)WTV含量含量計算方法直接滴定法直接滴定法間接滴定法間接滴定法在實際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一在實際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一致，所以應(yīng)該進(jìn)行校正致，所以應(yīng)該進(jìn)行校正規(guī)定摩爾濃度實際摩爾濃度F直接滴定法直接滴定法 規(guī)定摩爾濃度F實際摩爾濃度%100(%)WFTV含量直接讀取直接讀取藥典規(guī)定藥典規(guī)定自己標(biāo)定自己標(biāo)定取樣量取樣量直接滴定法直接滴定法的的含量含量計算方法計算方法第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)容量分析法容量分析法定義定義亦稱亦稱特點(diǎn)特點(diǎn)適用適用范圍范圍滴定法滴定法將已知濃度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液），由滴定

8、管滴加到將已知濃度的滴定液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液），由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全（被測藥物的溶液中，直至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全（通通過過適當(dāng)方法適當(dāng)方法指示指示），然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗），然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。的體積，按化學(xué)計量關(guān)系式計算出被測藥物的含量。通過通過指示劑顏色指示劑顏色變化，或者電子變化，或者電子設(shè)備的電位或電設(shè)備的電位或電流突變來指示滴流突變來指示滴定終點(diǎn)定終點(diǎn)1、方法簡便易行：所用儀器價廉易得，操、方法簡便易行：所用儀器價廉易得，操作簡便快速作簡便快速2、方法耐用性高：影響測定的試驗

9、條件與、方法耐用性高：影響測定的試驗條件與環(huán)境因素環(huán)境因素少少3、測定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于、測定結(jié)果準(zhǔn)確：誤差低于0.2%，滿足準(zhǔn)，滿足準(zhǔn)確度高確度高樣品樣品4、方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選、方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品擇，適用于主成分含量較高的樣品分析分析廣泛應(yīng)用于廣泛應(yīng)用于化學(xué)原料化學(xué)原料的的測定，較少應(yīng)用于藥物測定，較少應(yīng)用于藥物制劑的制劑的測定。測定。生成物生成物滴定法滴定法間接滴定法間接滴定法剩余剩余量量滴定法滴定法被測藥物與化合物被測藥物與化合物A作作用生成用生成 化合物化合物B，再用，再用滴定液滴定化合物滴定液滴定化合物B也稱也稱回滴法回滴

10、法，本法先加入定量過量滴定，本法先加入定量過量滴定液液A與藥物作用，再用滴定液與藥物作用，再用滴定液B與剩余與剩余的滴定液的滴定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算%100(%)WFTV含量Mbam)ml/mg(T先計算先計算T間接間接滴定法的滴定法的生成物滴定法生成物滴定法注意滴定度注意滴定度T的計算的計算正確求正確求a和和b再計算含量再計算含量示例三 葡萄糖酸銻鈉的含量測定0.3g供試品供試品水水100ml鹽酸鹽酸15ml碘化鉀試液碘化鉀試液10ml密塞，振搖后暗處放置密塞，振搖后暗處放置10min碘量法碘量法2642322235OSI2OS2IISbI2SbSb5+2S2

11、O32-本法先用葡萄糖酸銻鈉與碘離子反應(yīng)生成碘，再用碘與硫代本法先用葡萄糖酸銻鈉與碘離子反應(yīng)生成碘，再用碘與硫代硫酸鈉反應(yīng)生成碘離子，相當(dāng)于是用硫代硫酸鈉反應(yīng)生成碘離子，相當(dāng)于是用硫代硫酸鈉滴定硫酸鈉滴定葡萄糖葡萄糖酸銻鈉，因此要找出它們兩者的量反應(yīng)關(guān)系，也就是酸銻鈉，因此要找出它們兩者的量反應(yīng)關(guān)系，也就是a和和b%100(%)WFTV含量)/(088. 676.121211 . 0)/(mlmgMbammlmgT請讀取請讀取請校正請校正%100)(%)WTFVFVABBAA含量間接滴定法的間接滴定法的剩余量滴定法剩余量滴定法也稱回滴法也稱回滴法，先，先加入定量過加入定量過量滴定液量滴定液A與

12、藥物作用，再用與藥物作用，再用滴定液滴定液B與剩余的滴定液與剩余的滴定液A反反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計算計算的關(guān)鍵在于求出滴定液計算的關(guān)鍵在于求出滴定液A應(yīng)用于藥物反應(yīng)的應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量實際量計算的關(guān)鍵在于求出滴定液計算的關(guān)鍵在于求出滴定液A應(yīng)用于藥物反應(yīng)的應(yīng)用于藥物反應(yīng)的實際量實際量間接滴定法間接滴定法的剩余的剩余量滴定法量滴定法常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、常涉及化學(xué)反應(yīng)、加熱、分取等操作等步驟，使分取等操作等步驟，使測定誤差顯著增加測定誤差顯著增加空白試驗校正空白試驗校正沒有藥物存在時的滴定，方?jīng)]有藥物存在時的滴定，方法步驟與有藥物存在時相同法步驟與有藥物存在時相同計算公

13、式相應(yīng)修正如下：計算公式相應(yīng)修正如下：%100)(%)0WTFVVABSBB含量沒有藥物存在時，滴定液沒有藥物存在時，滴定液A全部與滴定液全部與滴定液B反應(yīng)反應(yīng)濃度校正作用濃度校正作用藥物存在時，剩余滴定液藥物存在時，剩余滴定液A全部與滴定液全部與滴定液B反應(yīng)反應(yīng)示例四 司可巴比妥鈉的含量測定 取本品約取本品約0.1g，精密稱定精密稱定，置，置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，振搖使溶解，精密加溴滴定液精密加溴滴定液( (0.05mol/L) ) 25ml，再加鹽酸，再加鹽酸5ml，立即密塞，并振搖，立即密塞，并振搖1min，在暗，在暗處放置處放置15min后，注意微開瓶

14、塞，加碘化鉀試液后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉滴定液滴定液( (0.1mol/L) )滴定，至終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消滴定，至終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗校正。失，并將滴定得的結(jié)果用空白試驗校正。本法用溴與司可巴比妥鈉反應(yīng)，再用硫代硫酸鈉反滴定本法用溴與司可巴比妥鈉反應(yīng)，再用硫代硫酸鈉反滴定溴，屬反滴定法，并用空白試驗校正溴，屬反滴定法，并用空白試驗校正,滴定液滴定液A為溴，為溴，B為硫代硫酸鈉，含量計算只需先求溴滴定度，再求出硫為硫代硫酸鈉，含量計算只需先求溴滴定度，再

15、求出硫代硫酸鈉空白試驗代硫酸鈉空白試驗V0體積與樣品測定體積體積與樣品測定體積Vs示例四 司可巴比妥鈉的含量測定已知：已知：司可巴比妥鈉司可巴比妥鈉M=260.23;司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)摩爾司可巴比妥鈉與溴反應(yīng)摩爾=1:1； W=0.1022 g； 硫代硫酸鈉濃度校正因子硫代硫酸鈉濃度校正因子=1.038 ； 供試品滴定供試品滴定Vs=15.73ml ;空白試驗滴定空白試驗滴定V0 =23.21ml;)/(01.1327.2601105. 0)/(mlmgMbammlmgT%100)(%)0WTFVVABSBB含量%100)(%)0WTFVVABSBB含量%100)(%)WTFVFVABBAA

16、含量間接滴定法間接滴定法的剩余的剩余量滴定法量滴定法本公式適用于本公式適用于空白校正情形空白校正情形見上例見上例本公式適用于沒有本公式適用于沒有做空白校正情形做空白校正情形見見下下例例示例五 剩余碘量法測定異煙肼含量 異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過量的碘滴定液異煙肼在弱堿性溶液中，加定量過量的碘滴定液(0.05mol/L)氧化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液氧化，反應(yīng)完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定滴定( (以淀粉為指示劑以淀粉為指示劑) )。NCONHNH2+2I2+5NaHCO3COOH+N2+ 4NaI+ 5CO2+4H2OI2 +

17、2Na2S2O3+ 2NaINa2S4O6100WT)V-F(V%(mg/ml)858. 614.134210.1T 12: 2322322222IOSNaOSNaIII2FI含量：異煙肼習(xí)題 非那西丁含量測定 精密稱取本品精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流加稀鹽酸回流1小時后，放冷，小時后，放冷，用亞硝酸鈉液用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去滴定，用去20.00ml。每每1ml1ml亞硝酸鈉液亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于相當(dāng)于17.92mg的的C10H13O2N，請計算非那西丁的含量。，請計算非那西丁的含量。藥典藥典收載收載紅外分光紅外分光度法度法本章本章講敘講敘第

18、一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)二二、光譜分析法光譜分析法火焰光度火焰光度法法紫外可見紫外可見分光度法分光度法熒光分析熒光分析法法原子吸收分原子吸收分光光度法光光度法紫外可見紫外可見分光度法分光度法熒光分析熒光分析法法EclTA1lg%11)100/(cmEAmlgc紫外可見分光度法紫外可見分光度法基于物質(zhì)對紫外區(qū)基于物質(zhì)對紫外區(qū)(200400nm)和可見光區(qū)和可見光區(qū)(400760nm)的單色光輻射的單色光輻射建立起來的光譜分析法建立起來的光譜分析法基基礎(chǔ)礎(chǔ)朗伯朗伯-比爾定律比爾定律紫外可見分光度法紫外可見分光度法特點(diǎn)特點(diǎn)本法紫外區(qū)須選用石英比色皿，比色本法紫外區(qū)

19、須選用石英比色皿，比色皿一般為皿一般為1cm，吸光度在，吸光度在0.30.7之之間為宜，選用間為宜，選用最大最大吸收光波長。吸收光波長。1、簡便易行：使用、簡便易行：使用的儀器價格比較低廉，的儀器價格比較低廉，操作簡單，易于普及操作簡單，易于普及2、靈敏度高：本法靈敏度可達(dá)、靈敏度高：本法靈敏度可達(dá)10-710-4 g/ml，適用于低濃度試樣分析，適用于低濃度試樣分析3、準(zhǔn)確度較高、準(zhǔn)確度較高：誤差：誤差在在2%5%之間，適用之間，適用于對測定結(jié)果的準(zhǔn)確度要求較高的樣品于對測定結(jié)果的準(zhǔn)確度要求較高的樣品4、專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的、專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構(gòu)相近

20、的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。干擾，但對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。較少應(yīng)用于原料藥的含較少應(yīng)用于原料藥的含量測定，可用于量測定，可用于制劑的制劑的含量測定含量測定，更多的應(yīng)用，更多的應(yīng)用于藥物于藥物制劑制劑的定量檢查的定量檢查適用適用范圍范圍有機(jī)溶劑通常均具有很強(qiáng)的末端吸收。以空氣為空白（空白光路中不置任何物質(zhì)）測定溶劑的吸光度溶劑的吸光度在220240nm范圍內(nèi)不超過0.4，在,41250nm范圍內(nèi)不超過0.2，在251300nm范圍內(nèi)不超過0.1，在300nm以上不超過0.05。%1cm%1cm%1cm%1cm紫外可見分光度法紫外可見分光度法對溶劑的要求對溶劑的要求 紫外可見分光度紫外可見分光

21、度法法4種方法種方法含量測定方法含量測定方法;,;對應(yīng)吸光度對照品溶液濃度供試品溶液濃度RxRxRRxxAACCACAC紫外可見分光度法含量測定方法紫外可見分光度法含量測定方法對照品比較法對照品比較法分別配制供試品溶液和對照品溶液分別配制供試品溶液和對照品溶液,對照品對照品溶液中溶液中所含被測藥物的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定所含被測藥物的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的量的10010%,所用溶劑量兩者相同所用溶劑量兩者相同,在規(guī)定的波長在規(guī)定的波長下測定下測定吸光度吸光度。按下按下式計算結(jié)果式計算結(jié)果;:;:;:%100%100(%):供試品的量稀釋體積供試品濃度稱樣量測得量含量對原料藥

22、WDCWDCxx紫外可見分光度法含量測定方法紫外可見分光度法含量測定方法對照品比較法對照品比較法;:);(:%100(%):制劑的標(biāo)示量裝量制劑平均重量標(biāo)示量對于固體制劑BWBWWDCx1.317=M 3H2O/M=375.85/285.34示例示例1：取鹽酸嗎啡片：取鹽酸嗎啡片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸嗎啡鹽酸嗎啡10mg)置置100ml量瓶中，加水溶解至刻度，搖勻，濾過，精密量量瓶中，加水溶解至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液取續(xù)濾液15ml，置，置50ml量瓶中，加量瓶中，加0.2mol/L氫氧化鈉氫氧化鈉25ml，用水稀

23、釋至，用水稀釋至刻度，搖勻，刻度，搖勻，UV法測定。另取嗎啡對照品適量，精密稱定，用法測定。另取嗎啡對照品適量，精密稱定，用0.2mol/L氫氧化鈉稀釋至每氫氧化鈉稀釋至每ml中約含中約含20g的溶液，同法測定。計算，結(jié)果乘以的溶液，同法測定。計算，結(jié)果乘以1.317，即得，即得C17H19NO3HCl3H2O的的含量。含量。(規(guī)格規(guī)格5mg)A樣20/1000100 50/15 1.317 片重 A對稱樣量5100%標(biāo)示量（%）=紫外可見分光度法含量測定方法紫外可見分光度法含量測定方法吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法%1001001000(%)%11BVEVDAcm標(biāo)示量%1001001000(%)%1

24、1BWEWDAcm標(biāo)示量g/mlmg轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化單位單位100EAC%1cm1xxE值的大小反映了藥物對某一波長光的吸收能力，也反映了測定反應(yīng)的靈敏度。采用E法測定含量時，一般取三位有效數(shù)字表示，E值小于100100的一般不宜采用。100EAC%1cm1xx雙波長分光光度法（復(fù)方磺胺類藥物的測定）三點(diǎn)校正法（維生素A的）解線性方程組法等使用時應(yīng)注意，當(dāng)在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定吸光度時，波長的微小變化可對測定結(jié)果造成顯著影響。 紫外可見分光度法含量測定方法紫外可見分光度法含量測定方法計算分光光度法計算分光光度法在藥物分析中應(yīng)用的比色法：酸性染料比色法（含氮堿性藥物如：硫酸阿托品片、氫溴酸

25、東莨菪堿片的測定）四氮唑比色法、異煙肼比色法蛋白質(zhì)的雙縮脲反應(yīng)（硫酸軟骨素的測定）總黃酮、總生物堿的測定（中藥制劑） 紫外可見分光度法含量測定方法紫外可見分光度法含量測定方法比色法比色法藥典藥典收載收載紅外分光紅外分光度法度法本章本章講敘講敘第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)二二、光譜分析法光譜分析法火焰光度火焰光度法法紫外可見紫外可見分光度法分光度法熒光分析熒光分析法法原子吸收分原子吸收分光光度法光光度法紫外可見紫外可見分光度法分光度法熒光分析熒光分析法法特點(diǎn)： 靈敏度高：可達(dá)10-1010-12g/ml 熒光自熄滅：要求低濃度下測定 易受干擾：須做空白試驗 熒光

26、弱的藥物可衍生化后測定rbrrxbxxCRRRRC熒光分析法熒光分析法熒光法測定的是物質(zhì)分子的發(fā)射光譜。在一定條件下，物質(zhì)的濃度與其熒光（也稱發(fā)射光）強(qiáng)度成正比關(guān)系。熒光分析中，藥物的濃度與相應(yīng)的熒光讀數(shù)之間的線性范圍較窄，故(RxRxb)/(RrRrb)應(yīng)在0.50.52 2，如超出此范圍，應(yīng)調(diào)節(jié)溶液濃度后再測定。第一節(jié)第一節(jié) 定量分析方法的分類與特點(diǎn)定量分析方法的分類與特點(diǎn)三、三、色譜分析色譜分析法法HPLC 高靈敏度：最低檢出濃度可達(dá)10-1510-12g/ml 高專屬性 高效能與高速度特特點(diǎn)點(diǎn)HPLCNP-HPLC Normal phase high performance liqui

27、d chromatography據(jù)固定相據(jù)固定相與與流流動相極性動相極性RP-HPLC Reversed high performance liquid chromatography HPLC色譜柱：色譜柱：十八烷基硅烷鍵十八烷基硅烷鍵合硅膠、合硅膠、C8柱、氨基柱、柱、氨基柱、氰基柱氰基柱等。等。流動相：流動相：甲醇甲醇-水（或緩沖水（或緩沖鹽）、乙腈鹽）、乙腈-水（或緩沖水（或緩沖鹽）、四氫呋喃鹽）、四氫呋喃-水（或緩水（或緩沖沖鹽）。鹽）。洗脫力強(qiáng)弱依次為洗脫力強(qiáng)弱依次為四氫呋四氫呋喃喃乙腈乙腈甲醇甲醇水水 色譜柱色譜柱：硅膠硅膠柱柱流動相：流動相：正正己烷己烷-異丙醇；異丙醇；正己烷正

28、己烷-乙醇；正己烷乙醇；正己烷-二二氯甲烷氯甲烷等。等。洗脫力強(qiáng)弱依次為洗脫力強(qiáng)弱依次為乙醇乙醇 異丙醇異丙醇二二氯氯甲烷甲烷正正己己烷烷色譜柱與流動相色譜柱與流動相RP-HPLCNP-HPLC化學(xué)鍵合固定相適用pH2 8的流動相；C18 鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，故流動相中有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑的比例應(yīng)不低于不低于5%，否則將造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。 選擇性檢測器紫外包括二極管陣列（DAD）、熒光、電化學(xué)響應(yīng)值與待測液濃度有關(guān)，還與化合物結(jié)構(gòu)有關(guān)通用型檢測器示差折光、蒸發(fā)光散射檢測器對所有的化合物均有響應(yīng)更專屬、更靈敏的檢測器質(zhì)譜HPLC檢測器檢測器柱效分離度拖尾因子重復(fù)性 取對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣

29、5次，測得峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD應(yīng)小于2.0%105. 02dWTh)(70. 1)(22/,22/, 112hhRRWWttRWWttRRR21)(212HPLC系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗內(nèi)標(biāo)法 RRssC/AC/Af 校正因子HPLC測定法測定法SSxxC/AAf)C(含量外標(biāo)法 第二節(jié)第二節(jié) 定量分析樣品的前處理方法定量分析樣品的前處理方法不經(jīng)有機(jī)破壞經(jīng)有機(jī)破壞直接測定配位滴定法氧化還原滴定法水解后測定酸水解堿水解經(jīng)還原分解后測定濕法破壞凱氏定氮法干法破壞高溫灼燒法氧瓶燃燒法 葡萄糖酸鈣葡萄糖酸鈣 EDTAEDTA配位滴定配位滴定 富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 鄰二氮菲鄰二氮菲- -硫酸鈰滴定

30、硫酸鈰滴定 葡萄酸銻鈉葡萄酸銻鈉 間接碘量法間接碘量法適用范圍：金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬的有機(jī)藥物。不經(jīng)有機(jī)不經(jīng)有機(jī)破壞的前處理方法破壞的前處理方法直接測定法直接測定法1 1、酸水解法酸水解法十一烯酸氯化鋅十一烯酸鋅稀鹽酸EDTA配位滴定經(jīng)水解后測定法經(jīng)水解后測定法2 2、堿水解法堿水解法344332334)(NONHAgSCNSCNNHAgNO NaNOAgClAgNONaCl O2HHCOONa3NaClCO)(CHNaOHOHCHCCCl3223 回回流流三氯叔丁醇銀量法返滴定適用范圍：含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物。經(jīng)水解后測定法經(jīng)水解后測定法適用范圍：碘原子直

31、接與芳環(huán)連接的含碘有機(jī)化合物。經(jīng)還原分解后測定法經(jīng)還原分解后測定法適用范圍：含氮、硫、硫柳汞、氯化鈉的生物制品，含氮有機(jī)藥物分析的前處理和生物制品中金屬元素測定時生物基質(zhì)的去除。u H2SO4-HNO3u H2SO4-HClO4u H2SO4-SO42-u HNO3-KMnO4分解劑/消化劑輔助分解劑凱氏定氮法測定含有氨基和酰胺結(jié)測定含有氨基和酰胺結(jié)構(gòu)的構(gòu)的藥物藥物經(jīng)經(jīng)有機(jī)有機(jī)破壞的前處理方法破壞的前處理方法濕法破壞濕法破壞 將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被中有機(jī)結(jié)構(gòu)被“消化消化”成成COCO2 2和和H H2 2O O，有機(jī)結(jié)合

32、的氮轉(zhuǎn)，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，化為無機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，經(jīng)堿化經(jīng)堿化后后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。n 常量法含氮量 2530mgn 半微量法含氮量 1.02.0mg凱氏定氮法原理凱氏燒瓶K2SO4( (提高消解溫度提高消解溫度) )CuSO4( (加快消解速度加快消解速度) )硫酸硫酸堿液堿液硼酸硼酸( (吸收液吸收液) )甲基紅甲基紅- -溴甲酚綠指示劑溴甲酚綠指示劑硫酸滴定空白校正先用強(qiáng)先用強(qiáng)

33、酸水解酸水解再用含堿硫代硫再用含堿硫代硫酸鈉中和酸鈉中和最后用堿釋放出氨最后用堿釋放出氨氣氣 ，并蒸餾，并蒸餾出來出來1、高溫高溫灼燒法灼燒法用于含鹵素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。常加入無水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。2、氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法 系系指將含有待測元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密閉的密閉指將含有待測元素的有機(jī)藥物置于充滿氧氣的密閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底分解為的燃燒瓶中充分燃燒，使有機(jī)結(jié)構(gòu)部分徹底分解為COCO2 2和和H H2 2O O，待測元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不同價態(tài)的氧化物，被吸待測元素根據(jù)電負(fù)性的不同轉(zhuǎn)化為不同價態(tài)的氧化物，被吸收于

34、適當(dāng)?shù)奈找褐?，再根?jù)其性質(zhì)和存在方式選擇方法進(jìn)收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，再根?jù)其性質(zhì)和存在方式選擇方法進(jìn)行分析。行分析。干法破壞干法破壞燃燒時待測物轉(zhuǎn)化成不同價態(tài)燃燒時待測物轉(zhuǎn)化成不同價態(tài)的無機(jī)物以供測定的無機(jī)物以供測定 濾紙包濾紙包裝樣品裝樣品第三節(jié)第三節(jié) 藥品分析方法的驗證藥品分析方法的驗證中國藥典附錄：藥物質(zhì)量研究指導(dǎo)原則目的：證明證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求需驗證的項目：鑒別鑒別試驗，雜質(zhì)定量或限度檢查，原試驗，雜質(zhì)定量或限度檢查，原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分的測料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分的測定。藥物溶出度、釋放