干細胞的標記

1、干細胞的標記【摘要】干細胞是一類具有多向分化潛能的特殊細胞，伴隨著對其研究的深入，干細胞的臨床應用前景也越來越廣闊。但干細胞移植后，如何從宿主辨別移植細胞，并觀察其在體內(nèi)的生存和轉(zhuǎn)歸情況，一直是讓人困擾的問題。采用有效的技術來標記和示蹤干細胞移植治療的效果將對其在動物實驗研究和l臨床應用上起到促進作用。本實驗通過對注入小鼠體內(nèi)由SPIO標記的干細胞磁共振成像的研究進展了以綜述。【關鍵詞】干細胞；細胞示蹤；磁共振成像1SPI()特異性靶向作用 所謂磁標記探針是指將順磁性粒子以某種方因結(jié)合轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)，由順磁 性物質(zhì)在細胞內(nèi)的蓄積與所連接的物質(zhì)數(shù)量成正比，因此，順磁性物質(zhì)引起的MR信號分布代表了受體

2、、抗體或基因的分布，而通過順磁性標記的配體，在受體介導下，產(chǎn)生特異性濃集，達到選擇性強化進成像的目的。因此SPIO特異性靶分子或靶細胞結(jié)合的關鍵技術就是SPIO表面預處理：與特異性單克隆抗體或受體結(jié)合后標記某種靶細胞；帶正電荷的轉(zhuǎn)染劑(transfectionagent，TA)，如多聚賴氨酸(PI。I，)、硫酸魚精蛋白、繁脂質(zhì)體等轉(zhuǎn)染劑直接或間接連接在SPIO包衣上，使其能夠?qū)δ骋话形镔|(zhì)具有特異性靶向的、并能夠進行體內(nèi)或和體外示蹤，對SPIO表面處理不僅可增強其對靶物質(zhì)的親和力，還有助于SPl0進入細胞內(nèi)，對其進行特異性標記或示蹤。 標記干細胞及示蹤：采用氧化鐵顆粒標記干細胞在神經(jīng)系統(tǒng)中應用最

3、早。對干細胞進行廣泛的磁共振(MRI)活體示蹤研究，用于辨別干細胞移植后在受體中的遷徙、增殖情況，以解決由于常規(guī)MRI不能區(qū)別移植干細胞和受體細胞的問題8。Frank等91用單純SPIO顆粒和SPIO與轉(zhuǎn)染劑結(jié)合后標記干細胞結(jié)果表面，單純SPIO標記效率低且濃度高，同時增加了其毒性。為增加標記的效能，Zhu等”3在場強47T的MR掃描儀上研究體內(nèi)外PI。I。一SPIO標記的神經(jīng)干細胞，結(jié)果顯示PI。I。一SPIO標記率為i00，且在TzWl和T。WI低信號持續(xù)7天，證明了此方法標記神經(jīng)干細胞的有效性。Daldruplink等1用脂質(zhì)體包裹表面帶負電荷的P7228(以陰離子右旋糖苷衍生物包被的U

4、SPIOs)標記造血干細胞注射入正常鼠體內(nèi)后14、24和48 h，15T MR觀察到肝臟和脾臟有明顯的信號減低，骨髓則在24和48 h后見信號減低，HoehnLl糾用轉(zhuǎn)染劑包裹SPIO標記了小鼠胚胎神經(jīng)干細胞，并且動態(tài)的觀察到了移植后的磁性標記細胞在腦內(nèi)遷徙的過程。因此SPIO在于細胞標記及示蹤方面以顯示出其獨特的優(yōu)勢。實驗流程 1.我們先稱取了10mg的魚精蛋白溶于10ml的蒸餾水中； 2.用槍吸取0.3ml的SPIO溶于20ml的無血清的培養(yǎng)基中； 3.取1中已配制的溶液100ul加入2中溶液中，使硫酸魚精蛋白濃度為5ug/ml； 4.往3中的溶液加入等體積的雙倍血清培養(yǎng)基，使最終SPIO的濃度為50ug Fe/ml,即所需溶液。 干細胞買來之后用我們預先配制好的混合液給細胞換液，孵育過夜，接下第二天，觀察磁珠標記的情況，并拍照，大多數(shù)細胞均被標記。為了得到更高的標記效率，第三天我們又進行了富集純化，富集過程如下： 1.用胰酶消化細胞，加入3ml的培養(yǎng)基，并將細胞轉(zhuǎn)移到15ml的玻璃離心管中，15000rpm離心5min，棄上清； 2.加入新的培養(yǎng)基打勻細胞，用強力磁石富集，棄上清，重復2次； 3.加入2.5ml