CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胃癌不同TNM分期中的表達(dá)

1、.CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在胃癌不同TNM分期中的表達(dá)康文喜 樊 靜 河北省秦皇島市腫瘤醫(yī)院 郵編：066001 摘要 目的：探討CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）在胃癌患者不同TNM分期外周血中的表達(dá)。方法：采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)200例胃癌患者不同TNM分期外周血中CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比，并進(jìn)行比較。結(jié)果：胃癌患者外周血CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比率明顯高于健康對(duì)照組，P 0.05；期明顯高于期, P0.01；低分化者明顯高于高分化者，P0.05；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，

2、P0.05；差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 胃癌患者外周血中的CD4+CD25+CD127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例明顯升高，可能在胃癌的免疫耐受中發(fā)揮重要作用,檢測(cè)其結(jié)果對(duì)于判斷胃癌的病程進(jìn)展及預(yù)后有一定參考價(jià)值。 關(guān)鍵詞 ：胃癌 CD4+CD25+CD127-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 流式細(xì)胞術(shù) 胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)的發(fā)病率居各類腫瘤之首。胃癌的發(fā)生與機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，在諸多發(fā)病機(jī)制中Tregs細(xì)胞發(fā)揮著重要的作用1。CD4+CD25+ 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（Tregs）由日本學(xué)者Sakaguchi等2于1995年首次報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)，Tregs能抑制免疫反應(yīng), 防止自身免疫的

3、發(fā)生, 誘導(dǎo)免疫耐受。研究證實(shí)Tregs 在生理和病理狀態(tài)下均有重要的免疫調(diào)節(jié)作用。Tregs細(xì)胞具有低反應(yīng)性與免疫抑制性兩大功能特征。在體內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)、維持自身免疫耐受中發(fā)揮著決定性作用。胃癌可誘導(dǎo)Tregs增生，致血液中Tregs數(shù)量增多。本研究采用流式細(xì)胞儀分析胃癌患者外周血CD4 +CD25+ CD127-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)，探討Tregs細(xì)胞與胃癌不同TNM分期、腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系及其臨床意義。1.材料和方法1.1 臨床資料：本文收集我院2006年3月-2010年12月收治的胃癌患者200例，其中男性140例，女性60例，年齡2869歲，平均年齡（42.328.69歲），所有病例均

4、經(jīng)病理學(xué)診斷為胃癌。臨床TNM分期按照國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行：期95例、期68例、期37例；其中高分化腺癌83例，中分化腺癌49例，低分化腺癌68例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者139例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者61例；對(duì)照組均為健康體檢者共30例。1.2 主要試劑及儀器：鼠抗人單克隆抗體CD4-FITC、CD25-PC5、CD127-PE；同型對(duì)照IgG1、IgG2、紅細(xì)胞裂解液、流式細(xì)胞儀（EPICS XL）購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司。1.3 實(shí)驗(yàn)方法：所有被觀察對(duì)象均于清晨空腹采集靜脈血2ml，經(jīng)EDTA-2K抗凝，使用直接免疫熒光標(biāo)記法標(biāo)記細(xì)胞并進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析。操作步驟：取單克隆抗體CD4-FITC、 CD2

5、5-PC5、CD127-PE及同型對(duì)照各20l，加入100ul EDTA-2K抗凝的外周血，室溫下避光孵育15分鐘,再加入紅細(xì)胞裂解液500l，避光孵育10分鐘；加入PBS洗2次，離心1500轉(zhuǎn)/5分鐘，棄上清后加入適量的PBS，上機(jī)檢測(cè)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPPS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析，進(jìn)行t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以 （x-s）表示，P0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.結(jié)果2.1 胃癌患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比率與健康者的比較 通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)法分析, 胃癌患者外周血CD4+CD25+CD127- Treg占總CD4+ T細(xì)胞的比率為4.24%1. 16 % ,健康對(duì)照組為 0.71%0.32%，

6、胃癌患者外周血Treg比例較健康對(duì)照組顯著增高( P 0. 05) 。表1. 胃癌患者與健康者CD4+CD25+CD127-/CD4+T比率的比較類 別NCD4+CD25+CD127-/CD4+T（%）P對(duì)照組300.710.320.05胃癌患者2004.241.162.2 胃癌患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比率與臨床TNM分期的關(guān)系 表2的數(shù)據(jù)顯示，胃癌患者在期、期外周血Treg的比例明顯高于期和期，P0.01，提示TNM分期越晚, Treg細(xì)胞增多越明顯。表2 CD4+CD25+CD127-/CD4+Tregs 在TNM分期的比較分析對(duì)象n CD4+CD25+CD127-/CD4+T（%）P臨床分

7、期期951.250.860.01期683.431.71期374.281.252.3 胃癌患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比率與癌組織分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系 數(shù)據(jù)顯示，胃癌患者外周血Treg細(xì)胞比例在低分化者明顯高于高分化者，P0.05；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，P0.05。分 析 對(duì) 象NCD4+CD25+CD127-/CD4+T（%）P組織分化程度高分化832.680.350.05中分化493.830.37低分化684.210.42淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有1394.521.340.05無(wú)612.260.31表3.CD4+CD25+CD127-/CD4+Tregs比率在癌組織分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

8、情況的比較3. 討論CD4+CD25+ Tregs細(xì)胞是近年新發(fā)現(xiàn)的一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，在維持免疫系統(tǒng)的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、免疫應(yīng)答、免疫耐受的平衡中起重要作用，尤其是在宿主抗腫瘤免疫反應(yīng)中起抑制性調(diào)節(jié)作用。人體內(nèi)Tergs的比例變化在機(jī)體發(fā)生、生長(zhǎng)、發(fā)育、進(jìn)展過(guò)程中可誘發(fā)一系列的免疫逃逸。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者Tregs細(xì)胞數(shù)目明顯高于正常人，腫瘤患者常處于免疫功能低下?tīng)顟B(tài)，當(dāng)腫瘤發(fā)生時(shí)外周血中CD4+CD25+ Tergs細(xì)胞可誘導(dǎo)性增高。腫瘤抑制因素對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制性調(diào)控是腫瘤免疫逃逸的主要機(jī)制之一，在諸多的腫瘤免疫耐受和免疫抑制性調(diào)節(jié)機(jī)制中，Tregs的作用倍受關(guān)注。據(jù)報(bào)道腫瘤患者的外周血和腫瘤局部

9、的CD4+CD25+Tergs比例增加，說(shuō)明Tregs細(xì)胞調(diào)節(jié)的免疫耐受和腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，并直接參與了腫瘤的進(jìn)展。Tregs高表達(dá)CD25分子、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體（glucocorticoid-induced TNFreceptor）， GITR和細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA-4），并表達(dá)一種獨(dú)特的細(xì)胞核內(nèi)蛋白-Foxp3。 研究證實(shí), Tregs 在生理和病理狀態(tài)下均具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用【3】。其機(jī)制主要是通過(guò)直接接觸和分泌抑制性調(diào)控因子兩個(gè)途徑對(duì)免疫系統(tǒng)，特別是細(xì)胞免疫，發(fā)

10、揮抑制性免疫調(diào)節(jié)作用。最近研究表明，CD127分子在Treg細(xì)胞表面呈現(xiàn)低表達(dá)并且與Foxp 3的表達(dá)成負(fù)相關(guān)，因此用CD4+、CD25+、CD127lo/-可以很好的反映具有抑制作用的Treg亞群。正常情況下，維持免疫平衡、防止自身免疫反應(yīng)的重要機(jī)制中Tregs起到免疫抑制調(diào)節(jié)作用；在腫瘤病理?xiàng)l件下，Tregs功能上調(diào)和誘導(dǎo)增高，能有效、系統(tǒng)地抑制免疫系統(tǒng)的反應(yīng)性，造成腫瘤免疫耐受加劇，降低免疫系統(tǒng)的免疫監(jiān)視作用，從而使腫瘤產(chǎn)生免疫逃逸【4】。國(guó)外研究表明，肺癌、卵巢癌、胃腸道腫瘤等多種腫瘤患者都有外周血和腫瘤局部Tregs比例增高【5,6】，劉海紅等12 采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)胃癌患者外周血Tr

11、eg 進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血Treg 水平增高,且與臨床分期有關(guān), III、IV 期患者外周血Treg 水平高于I、II 期患者,而且IV 期患者Treg比例明顯升高,提示胃癌患者免疫功能失調(diào)與其外周血調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞比例增大有關(guān),胃癌患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫耐受和腫瘤的生長(zhǎng)密切相關(guān),可能直接參與腫瘤進(jìn)展的發(fā)生過(guò)程。本研究結(jié)果顯示，200例胃癌患者外周血中CD4+ CD25+ CD127- Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞的比率為4.241.16，較30例健康對(duì)照組0.710.32顯著增高， P0.01。在不同TNM分期的胃癌患者中，期患者外周血CD4+ CD25+ CD127lo/-Tre

12、gs細(xì)胞比率為4.281.25，明顯高于-期患者1.250.86、3.431.71。 P0.01。在不同分化程度的胃癌患者中，低分化者CD4+CD25+CD127-Tregs的比率明顯高于高分化者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CD4+CD25+CD127-Tregs的比率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。結(jié)果顯示Tregs調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)值與TNM分期呈正相關(guān)，與轉(zhuǎn)移及預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致【7】，提示胃癌患者外周血Tregs細(xì)胞誘導(dǎo)作用增高。腫瘤發(fā)生的早期和腫瘤低負(fù)荷狀態(tài)下，CD4+CD25+CD127-Tregs的比率較進(jìn)展期腫瘤和腫瘤高負(fù)荷狀態(tài)下顯著增高，并影響到全身。腫瘤病人Tregs誘導(dǎo)增高

13、與病情及預(yù)后相關(guān)聯(lián)。胃癌患者中Tregs數(shù)目越多，預(yù)后越差，生存率越低。切除癌瘤后外周血中Tregs數(shù)目明顯減少，當(dāng)腫瘤復(fù)時(shí)發(fā)外周血中Tregs數(shù)目又明顯增高，這些現(xiàn)象說(shuō)明腫瘤增長(zhǎng)及惡性程度與Tregs細(xì)胞數(shù)目之間存在密切關(guān)系。Tregs細(xì)胞數(shù)目增高導(dǎo)致腫瘤微環(huán)境中CCR4+天然Tregs細(xì)胞數(shù)目增高，從而抑制效應(yīng)T細(xì)胞的產(chǎn)生，導(dǎo)致機(jī)體抗腫瘤耐受13。；我們對(duì)本研究結(jié)果及文獻(xiàn)資料進(jìn)行綜合分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者Tregs誘導(dǎo)增高和免疫抑制性調(diào)控作用增強(qiáng)是一種普遍現(xiàn)象，不具備腫瘤類型特異性，而Tregs誘導(dǎo)增高的程度可能受多種綜合因素影響，但腫瘤負(fù)荷大小、病情輕重及分期是其中重要的影響因素。另外，由于

14、Tregs誘導(dǎo)增高和抑制性免疫調(diào)控作用增強(qiáng)是腫瘤免疫耐受的重要因素，下調(diào)Tregs比例或抑制其功能將必然有助于提高機(jī)體抗腫瘤的免疫力，在腫瘤治療特別是腫瘤免疫學(xué)治療中的價(jià)值將受到日益關(guān)注。胃癌患者外周血CD4+、CD25+、CD127lo/-Treg增多可能是導(dǎo)致機(jī)體免疫低下的原因之一，降低胃癌患者體內(nèi)CD4+、CD25+、CD127lo/-Treg或逆轉(zhuǎn)其表型，增強(qiáng)機(jī)體免疫監(jiān)視功能，可成為胃癌治療的新方法。深入研究Tregs細(xì)胞在腫瘤免疫機(jī)制中的作用和外周血Tregs細(xì)胞的比率變化，對(duì)預(yù)后判斷和指導(dǎo)臨床免疫治療具有十分重要的意義，選擇性去除血液中的Tregs細(xì)胞，同時(shí)聯(lián)合使用抗腫瘤的免疫治療

15、，將成為未來(lái)腫瘤治療研究的一個(gè)非常可行的方法【8-12】。參考文獻(xiàn)：【1】王學(xué)野，韓梅，陳琳等 胃癌患者外周血CD4+CD25highCD127 low調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義J. 中國(guó)免疫學(xué)雜志,2009, 25 (5):459-461.【2】Sakaguchi S， Sakaguchi N， Asano M， et al Immunologic self tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptoralpha-chains （CD25） Breakdown of a single mechanism

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