最新【實驗報告】血液凝固及其影響因素

1、實驗五：血液凝固及其影響因素 實驗人： 同組人： 【實驗?zāi)康摹? 學(xué)習(xí)血液凝固的基本過程2 了解加速或延緩血液凝固的一些因素【實驗原理】血液凝固是一個酶的有限水解激活過程，在此過程中有多種凝血因子參與。根據(jù)凝血過程起動時激活因子來源不同，可將血液凝固分為內(nèi)源性激活途徑和外源性激活途徑。內(nèi)源性激活途徑是指參與血液凝固的所有凝血因子在血漿中，外源性激活途徑是指受損的組織中的組織因子進入血管后，與血管內(nèi)的凝血因子共同作用而啟動的激活過程。【實驗材料和用具】家兔清潔小試管7個、小燒杯2個、竹簽、秒表、試管架、哺乳動物手術(shù)器械一套、兔手術(shù)臺、動脈夾、塑料動脈插管、線、棉花、水浴槽、冰盒液狀石蠟、肝素、草

2、酸鉀12mg、腦勻漿液0.1ml、生理鹽水【實驗過程】1、 動物麻醉及頸部手術(shù) （此部由助教老師操作）取一只動物，稱重。按1g/kg體重的劑量將烏拉坦（氨基甲酸乙酯）由耳緣靜脈緩慢注入，觀察動物肌張力、呼吸與角膜反射的變化。動物麻醉后背位固定于兔手術(shù)臺上。剪去頸部手術(shù)野的毛，沿頸正中線在喉頭上一指至鎖骨上一指的地方作一57cm的皮膚切口。分離皮下組織及肌肉。2、 頸總動脈插管（此部由助教老師操作）在氣管兩側(cè)辨別并分離頸總動脈，頸總動脈下方穿兩條線備用。在左側(cè)頸總動脈的近心端夾一動脈夾，在動脈夾遠(yuǎn)心端距動脈夾約3cm處結(jié)扎。用小剪刀在結(jié)扎線的近側(cè)（結(jié)扎線與動脈夾之間）沿向心方向剪一小斜口（約占管

3、徑的一半），向心臟方向插入動脈插管，由備用的線結(jié)扎固定。取血時將動脈夾松開即可。3、 血液凝固的加速和延緩觀察1. 打開兔頸總動脈夾，血液從動脈插管流出，棄去第一份1mL動脈血后，向每個試管中注入1mL兔動脈血，并搖勻。2. 自血液流出動脈插管開始計時。除第1管外，其他各管每隔15秒鐘將試管傾斜一次，觀察液面是否傾斜即血液是否流動，直到試管內(nèi)血液不再流動為止，記錄凝血時間。3. 當(dāng)?shù)?管已經(jīng)凝固時，再傾斜第1管看血液是否凝固，若尚未凝固則按上述方法每隔15秒鐘傾斜一次，直到血液凝固為止，記錄凝血時間，即為該兔血的凝固時間。4. 以第2管為對照，各管觀察其他各管中血液凝固時間。5. 向第9管中滴

4、加2氯化鈣2滴，觀察血液是否凝固。6. 取出第5管中的玻棒，用水洗凈，觀察附著在玻棒上的纖維蛋白。注意事項：a) 取放試管時要用拇指和食指捏住試管的上端，不要握住試管的底部，以免手的溫度影響結(jié)果。b) 每支試管口徑及采血量要盡量一致，不可相差太大。c) 記錄凝血時間要準(zhǔn)確。d) 判斷凝血的標(biāo)準(zhǔn)要前后一致。一般以傾斜試管達45°時，試管內(nèi)血液不見流動為準(zhǔn)?！緦嶒灲Y(jié)果及相關(guān)討論】管號實驗條件凝血時間（一組）凝血時間（二組）現(xiàn)象解釋1加入0.1肝素溶液0.1mL（6滴）大于20min大于20min肝素是抗凝劑，能不可逆的阻止血液凝固。由于肝素鈉具有帶強負(fù)電荷的理化特性，能干擾血凝過程的許多

5、環(huán)節(jié)，在體內(nèi)外都有抗凝血作用。其作用機制比較復(fù)雜，主要通過與抗凝血酶（AT-）結(jié)合，而增強后者對活化的a、a、a、a和a凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破壞，妨礙凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原變?yōu)槟福灰种颇?，從而妨礙纖維蛋白原變成纖維蛋白。中和組織凝血活素（因子）。抑制血小板的聚集和釋放。它對血中有機成分和無機成分的測定均無影響。2加入2草酸鉀溶液0.1mL （6滴）大于20min血液凝固的多個環(huán)節(jié)中都需要鈣離子的參與，故通常用枸櫞酸鈉、草酸鈉和草酸鉀作為體外抗凝劑，它們可與鈣離子結(jié)合而除去血漿中的鈣離子，從而起到抗凝作用。理論上當(dāng)繼續(xù)向血液中加入CaCl2溶液，CaCl

6、2中的鈣離子會起到凝血因子IV的作用，從而使再次啟動凝血過程，血液凝固。草酸鹽是可逆性抗凝劑。但本次實驗中加入CaCl2后并沒有出現(xiàn)凝血現(xiàn)象，可能是CaCl2溶液配置有問題，或者由于操作不當(dāng)，凝血因子已經(jīng)完全失活。3室溫（6滴生理鹽水）靜置7min30s7min30s血液流出血管后，很快會凝固。血液流出血管后血小板4室溫（6滴生理鹽水）每隔15S傾斜45°4min5min傾斜可加速血小板的粘附聚集過程，并加大血小板釋放的凝血因子與血細(xì)胞的接觸面積，從而加快了凝血的過程。該過程是內(nèi)源性凝血過程。5細(xì)玻璃粉少許（6滴生理鹽水）2min45s3min玻璃粉是異物，可激活凝血因子及血小板，啟

7、動凝血過程。6腦組織浸出液（6滴）15s30s腦組織液中有組織因子途徑抑制物，是外源性凝血途徑的特異性抑制劑，因而能加速凝血過程。7置于40水浴（6滴生理鹽水）165s165s適當(dāng)升高溫度，能增加酶的活性，加快凝血過程。8置于10水?。?滴生理鹽水）大于20min降低溫度可以降低酶的活性，延緩凝血過程。9竹簽攪拌（6滴生理鹽水）有富有彈性的纖維蛋白糾纏在竹簽上同上 在竹簽的攪動下，特別是纏上線的接觸面粗糙的竹簽，能加速凝血過程，使凝血因子按一定順序相繼激活而生成凝血酶，最終使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，而糾結(jié)在竹簽上，形成一層蛋白膜。機體凝血系統(tǒng)包括凝血和抗凝兩個方面，兩者間的動態(tài)平衡是正常機體維

8、持體內(nèi)血液流動狀態(tài)和防止血液丟失的關(guān)鍵。機體的正常止凝血，主要依賴于完整的血管壁結(jié)構(gòu)和功能，有效的血小板質(zhì)量和數(shù)量，正常的血漿凝血因子活性。其中，血小板和凝血因子是生理性止凝血的重要成分,(見圖1)。抗凝系統(tǒng)不僅包括抗凝因子，還包括纖溶系統(tǒng)。BT出血時間CFT束臂試驗CRT血塊收縮試驗BPC血小板計數(shù)CT凝血時間 RT復(fù)鈣時間 APTT活化部分凝血活酶時間PT凝血酶原時間PF3血小板第3因子TF組織因子Fb纖維蛋白TXA2血栓素A2 5-HT5羥色胺PK激肽釋放酶原HMWK高分子量激肽原圖1 正常止血機制及血栓與止血常用篩選試驗檢測環(huán)節(jié)血小板的作用：在正常的血液循環(huán)中，血小板并不與內(nèi)皮細(xì)胞表面

9、或其他細(xì)胞發(fā)生作用，而是沿著毛細(xì)血管內(nèi)壁排列，維持其完整性，血管局部受損傷時，血小板的止血兼有機械性的堵塞傷口和生物化學(xué)性粘附聚集作用。止血時，首先是受損的血管壁發(fā)生收縮，使局部血液流動變慢或減少。血液中的血小板在vWF因子存在下迅速粘附于暴露的膠原纖維，此時血小板被激活，血小板形態(tài)發(fā)生改變，由正常的圓盤狀態(tài)變?yōu)閳A球形，偽足突起，血小板發(fā)生聚集(血小板膜糖蛋白IIb/IIIa由纖維蛋白原介導(dǎo)發(fā)生互相粘附、聚集)，此為血小板第一相聚集，激活的血小板便發(fā)生釋放反應(yīng)和花生四烯酸代謝，其中許多物質(zhì)，如血小板的ADP等，可加速血小板的聚集、變性成為不可逆的“第二相聚集”，形成白色血栓，構(gòu)成了初期止血的屏

10、障。與此同時，由血小釋放和激活許多促凝物質(zhì)參與血液凝固反應(yīng)。血小板膜磷脂表面提供了凝血反應(yīng)的場所，血小板第3因子在凝血過程多個環(huán)節(jié)中發(fā)揮重要作用，血小板合成釋放的TXA2和5-HT促使進一步收縮，血小板收縮蛋白則最終可使纖維蛋白收縮(血塊收縮)，使血栓更為堅固，止血更加徹底。凝血過程：血液凝固簡稱凝血，是血液由流動狀態(tài)變?yōu)槟z狀態(tài)的過程，它是止血功能的重要組成部分。凝血過程是一系列凝血因子被相繼酶解激活的過程，最終生成凝血酶，形成纖維蛋白凝塊。迄今為止，參與凝血的因子共有14個。其中用羅馬數(shù)字編號的有12個(從，其中因子并不存在)。習(xí)慣上，前4個凝血因子常分別稱為纖維蛋白原(因子)、凝血酶(因

11、子)、組織因子(因子)和鈣離子(因子)。凝血因子VI已知是血清中活化的凝血因子V，故不再視為一獨立的凝血因子。1內(nèi)源性凝血途徑內(nèi)源性凝血途徑是指參加的凝血因子全部來自血液(內(nèi)源性)。臨床上常以活化部分凝血活酶時間(APTT)來反映體內(nèi)內(nèi)源性凝血途徑的狀況。內(nèi)源性凝血途徑是指從因子激活，到因子X激活的過程。當(dāng)血管壁發(fā)生損傷，內(nèi)皮下組織暴露，帶負(fù)電荷的內(nèi)皮下膠原纖維與凝血因子接觸，因子即與之結(jié)合，在HK和PK的參與下被活化為a。在不依賴鈣離子的條件下，因子a將因子激活。在鈣離子的存在下，活化的a又激活了因子。單獨的a激活因子X的效力相當(dāng)?shù)停ca結(jié)合形成1：1的復(fù)合物，又稱為因子X酶復(fù)合物。這一

12、反應(yīng)還必須有Ca2+和PL共同參與。2外源性凝血途徑外源性凝血途徑：是指參加的凝血因子并非全部存在于血液中，還有外來的凝血因子參與止血。這一過程是從組織因子暴露于血液而啟動，到因子被激活的過程。臨床上以凝血酶原時間測定來反映外源性凝血途徑的狀況。組織因子是存在于多種細(xì)胞質(zhì)膜中的一種特異性跨膜蛋白。當(dāng)組織損傷后，釋放該因子，在鈣離子的參與下，它與因子一起形成1：1復(fù)合物。一般認(rèn)為，單獨的因子或組織因子均無促凝活性。但因子與組織因子結(jié)合會很快被活化的因子激活為a，從而形成a組織因子復(fù)合物，后者比a單獨激活因子增強16000倍。外源性凝血所需的時間短，反應(yīng)迅速。外源性凝血途徑主要受組織因子途徑抑制物

13、(TFPI)調(diào)節(jié)。TFPI是存在于正常人血漿及血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞中的一種糖蛋白。它通過與因子a或因子a-組織因子-因子a結(jié)合形成復(fù)合物來抑制因子a或因子a-組織因子的活性。另外，研究表明，內(nèi)源凝血和外源凝血途徑可以相互活化。3凝血的共同途徑從因子X被激活至纖維蛋白形成，是內(nèi)源、外源凝血的共同凝血途徑。主要包括凝血酶生成和纖維蛋白形成兩個階段。(1) 凝血酶的生成：即因子a、因子a在鈣離子和磷脂膜的存在下組成凝血酶原復(fù)合物，即凝血活酶，將凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟浮?2) 纖維蛋白形成：纖維蛋白原被凝血酶酶解為纖維蛋白單體，并交聯(lián)形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊，這一過程可分為三個階段，纖維蛋白單體的生成，纖

14、維蛋白單體的聚合，纖維蛋白的交聯(lián)。纖維蛋白原含有三對多肽鏈，其中纖維蛋白肽A(FPA)和B(FPB)帶較多負(fù)電荷，凝血酶將帶負(fù)電荷多的纖維蛋白肽A和肽B水解后除去，轉(zhuǎn)變成纖維蛋白單體。從纖維蛋白分子中釋放出的FPA和FPB可以反映凝血酶的活化程度，因此FPA和FPB的濃度測定也可用于臨床高凝狀態(tài)的預(yù)測。纖維蛋白單體生成后，即以非共價鍵結(jié)合，形成能溶于尿素或氯醋酸中的纖維蛋白多聚體，又稱為可溶性纖維蛋白。纖維蛋白生成后，可促使凝血酶對因子的激活，在a 與鈣離子的參與下，相鄰的纖維蛋白發(fā)生快速共價交聯(lián)，形成不溶的穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊。纖維蛋白與凝血酶有高親和力，因此纖維蛋白生成后即能吸附凝血酶，這樣

15、不僅有助于局部血凝塊的形成，而且可以避免凝血酶向循環(huán)中擴散。在凝血共同途徑中有兩步重要的正反饋反應(yīng)，有效地放大了內(nèi)外源凝血途徑的作用。一是Xa形成后，可反饋激活因子、；二是凝血酶形成后，可反饋激活因子、以及凝血酶原。凝血酶還可促使血小板發(fā)生聚集和釋放反應(yīng)，刺激血小板收縮蛋白引起血塊退縮。但大量凝血的產(chǎn)生卻反過來破壞因子、和因子，這是正常凝血的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，以防止不適當(dāng)?shù)倪^度凝血?？鼓齽┑倪x擇：（1） 草酸鉀：常用于尿素、肌酐、纖維蛋白原等測定，不能用鉀、鈣等測定，對LDH、丙酮酸激酶、AKP和淀粉酶有抑制作用。（2） 肝素：常用于電解質(zhì)、血氣分析、血氨等測定?？鼓齽┍壤秊?061u肝素/5ml血

16、。注意鈉鹽可使淀粉酶升高。（3） 氟化鈉：常用氟化鈉草酸鈉混合抗凝劑作血糖測定的抗凝劑，氟化鈉可以抑止烯醇化酶，它可避免血細(xì)胞葡萄糖酵解酶的作用，延長標(biāo)本的保存時間。（4） 二乙胺四乙酸鈉鹽（EDTA-Na2）：生化常用的抗凝劑，但不能用于鈣、鈉、及含氮物質(zhì)的測定，對淀粉酶、肌酸激酶、AKP、ALP、5-核苷酸酶等可抑制，對丙酮酸激酶有明顯升高的作用。（5） 枸櫞酸鈉，測定血沉用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，抗凝劑與血液比例為1：4，凝血試驗需用3.2%枸櫞酸鈉抗凝，比例為1：9。（6） 實驗室使用抗凝劑種類較多，血細(xì)胞分析及紅細(xì)胞比積測定宜用EDTA·K2抗凝，保證室溫下6小時RBC體積不

17、變，抗凝劑比例為1.02.0mg/1ml血?！緟⒖嘉墨I】生理學(xué) 姚泰 人民衛(wèi)生出版社動物生理學(xué)實驗 魏香 清華大學(xué)出版社 可修改 歡迎下載 精品 Word親愛的用戶：煙雨江南，畫屏如展。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節(jié)，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，感謝你的閱讀。1、最困難的事就是認(rèn)識自己。22.2.162.16.202220:2620:26:472月-2220:262、自知之明是最難得的知識。二二二二二二年二月十六日2022年2月16日星期三3、越是無能的人，越喜歡挑剔別人。20:262.16.202220:262.16.202220:2620:26:472.16.202220:262.16.20224、與肝膽人共事，無