正交設(shè)計法優(yōu)選戒毒膠囊的提取工藝

1、正交設(shè)計法優(yōu)選戒毒膠囊的提取工藝         09-09-02 09:41:00     編輯：studa20                   作者：靳怡然，杜英峰，袁志芳，張?zhí)m桐【摘要】  目的優(yōu)選戒毒膠囊中揮發(fā)油、醇及水提取工藝。方法采用正交設(shè)計法，以揮發(fā)油得率為指標，篩選制劑

2、中揮發(fā)油的提取工藝；以黃芩苷的含量為考察指標篩選醇提取工藝；以芍藥苷的含量為考察指標優(yōu)選金銀花、白芍、黃芪等藥味的水提工藝。結(jié)果揮發(fā)油的最佳提取工藝為當歸、川芎加水10倍量，浸泡1 h，提取8 h；醇提最佳工藝為丹參、黃芩、梔子采用70%乙醇，溶媒6倍量，回流時間為1.5h，提取次數(shù)為2次；水提取的最佳工藝為將白芍、黃芪、龜甲和熟地、黃連同上述藥渣，加10倍量水，煎煮2次，1.5 h/次，金銀花于第2次煎煮時加入。結(jié)論通過正交實驗優(yōu)選出戒毒膠囊最佳制備工藝穩(wěn)定可行。 【關(guān)鍵詞】  正交設(shè)計； 戒毒膠囊； 提取工藝Abstract：ObjectiveTo optimize the ex

3、traction process of Jiedu Capsules.MethodsThe series of tests were carried out with orthogonal design. The conditions were evaluated with the yield of volatile oil as the index. With the yield rate of baicalin as the index, and the concentration of alcohol, solvent volume, extracting time and times

4、as factors, the optimal extracting process for the extracting with alcohol was studied. With the yield rate of paeoniflorin as the index, and the volume of water, extracting time and times were optimized for the water extraction. ResultsThe optimal extracting process of volatile oil was as follows:

5、10 volumes of water were added and immersed for 1h, and then extracted for 8h. The results of alcohol extraction was defined as 85% of alcohol, 1.5 hours of refluxing time with 10 times volume of solvent and twice extraction. The best extracting process by water was defined as 1.5 hours of each extr

6、action with 10 times volume of water and twice extraction. Flos Lonicerae was extracted at the second extraction.ConclusionThe optimum preparation technology of Jiedu Capsule is suitable and reproducible.Key words：Chinese traditional medicine;  Orthogonal design;   Extracting process&

7、#160;   戒毒膠囊的處方為治療吸食阿片類成癮者的臨床經(jīng)驗方，由金銀花、黃芩、梔子、丹參、黃芪等13味藥制成。本實驗根據(jù)戒毒膠囊處方組成和各藥味之間的關(guān)系，在參考各藥物所含成分的理化性質(zhì)和藥理作用的研究基礎(chǔ)上1，2，根據(jù)與治療作用相關(guān)的有效成分或有效部位的理化性質(zhì)，結(jié)合制劑制備上的要求等實際情況，采用正交設(shè)計法對工藝路線的設(shè)計，篩選了工藝方法和條件，制定出方法簡便、條件確定的穩(wěn)定工藝。1  儀器與試藥1.1  儀器揮發(fā)油提取器（上海求精玻璃儀器廠）；美國Waters高效液相色譜儀，510泵，2487紫外檢測器；色譜工作站（Empower色譜工作站）；

8、TCQ-250超聲波清洗器（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）。1.2  試藥黃芩苷、綠原酸、芍藥苷對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；藥材均購自石家莊市藥材站，經(jīng)河北醫(yī)科大學生藥學教研室鑒定。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。2  方法與結(jié)果2.1  揮發(fā)油的提取工藝32.1.1    當歸和川芎吸水率的考察按處方量稱取當歸90 g、川芎45 g，用冷水浸泡，每4 h換水1次，泡至透心，計算藥材的吸水率為128.5。2.1.2   正交實驗設(shè)計根據(jù)藥物的性質(zhì)并結(jié)合生產(chǎn)實際，揮發(fā)油提取工藝選取了對提取率影響較大的加水量

9、（A）、浸泡時間（B）和提取時間（C）作為考察因素，以揮發(fā)油得率為考察指標，選定L9(34)正交表進行實驗。正交因素水平見表1。表1  揮發(fā)油得取工藝正交因素水平（略）2.1.3   實驗方法按處方比例分別稱取當歸90 g，川芎45 g，適當粉碎，置圓底燒瓶中，按中國藥典部揮發(fā)油測定法進行提取，到規(guī)定時間后，停止加熱，放置1 h，至油呈清亮，收集揮發(fā)油蒸餾液，用等體積石油醚萃取3次，合并石油醚提取液，減壓回收石油醚，用無水Na2SO4脫水后，稱揮發(fā)油的重量，按下式計算揮發(fā)油得率。正交實驗結(jié)果見表2。    揮發(fā)油得率（%）=揮發(fā)油重量

10、（g）原生藥重量（g）×100%    從揮發(fā)油的提取工藝方差分析表中可見，只有提取時間（C）對揮發(fā)油提取率影響最大，故提取揮發(fā)油時采用8 h。加水量（A）以加入10倍量揮發(fā)油收率較高。浸泡時間（B）對揮發(fā)油提取率影響不大，故選擇1 h。2.1.4    結(jié)果分析表2中揮發(fā)油得率經(jīng)方差分析，對各因素影響的顯著性進行了檢驗。結(jié)果見表3。表2  戒毒膠囊揮發(fā)油提取正交實驗結(jié)果（略）表3  揮發(fā)油提取方差結(jié)果分析（略）方差分析結(jié)果表明，以揮發(fā)油得率為考察指標，在提取揮發(fā)油的工藝中，提取時間（C）對揮發(fā)油量有極為

11、顯著的影響（P<0.01），故提取揮發(fā)油以8 h最佳，加水量（A）和浸泡時間（B）在選擇的水平上無顯著影響（P>0.05）。最后確定的提取工藝為A3B1C3，即將藥材加10倍量水浸泡1 h，提取8 h較為合適。2.1.5    驗證實驗取當歸、川芎，適當碎斷，分別稱取當歸90 g，川芎45 g，按已確定加水量和浸泡時間以表4的加熱時間分別提取揮發(fā)油，平行實驗3次。表4  揮發(fā)油提取驗證性實驗（略）可見，按最佳工藝進行驗證實驗，揮發(fā)油得率較高，所選的工藝技術(shù)條件A3B1C3是可行的。2.2  醇提取工藝2.2.1  

12、;  正交實驗設(shè)計醇提取工藝選取了對提取物收率影響較大的醇濃度（A）、醇用量（B）、提取時間（C）和提取次數(shù)（D）為考察因素，以黃芩苷含量為考察指標，選定L9(34)正交表進行實驗。正交因素水平表見表5。表5  醇提工藝的正交因素水平（略）2.2.2   實驗方法取丹參30 g，梔子20 g，黃芩18 g，按正交設(shè)計表加水煎煮。2.2.3  黃芩苷的含量測定供試品溶液的制備：取提取液5 ml置100 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液2 ml置100 ml的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。   

13、; 對照品溶液的制備：取60減壓干燥4 h的黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每毫升中約含30 g的溶液，即得。     測定方法：經(jīng)過實驗，采用HPLC法，選用十八烷基鍵合硅膠為固定相；甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動相；檢測波長280nm。吸取供試品溶液和對照品溶液各20 l，測定峰面積，計算，即得。正交實驗結(jié)果見表6。表6  醇提工藝正交實驗結(jié)果（略）從正交實驗結(jié)果可見，以黃芩苷含量為考察指標，對黃芩苷提取率影響大小為醇濃度A和提取次數(shù)D對黃芩苷含量的影響較大。2.2.4    結(jié)果分析表6中黃

14、芩苷含量經(jīng)方差分析，對各因素影響的顯著性進行了檢驗。結(jié)果見表7。表7  醇提工藝的方差結(jié)果分析（略）可見，在3個因素中，醇濃度A影響極為顯著，故選擇醇濃度為70%。提取次數(shù)以提取兩次對黃芩苷的提取率較高，提取時間以1.5h時對黃芩苷的提取率最高。提取倍數(shù)B對黃芩苷含量的影響不大，故加醇倍數(shù)為6倍量即可。按已經(jīng)確定的最佳工藝進行驗證實驗。結(jié)果見表8。表8  醇提工藝的驗證性實驗（略）2.3  水提取工藝因金銀花中所含有效成分綠原酸受熱不穩(wěn)定，故金銀花在所有確定進行水提的藥味中，應該后下。考察提取工藝時應以綠原酸含量單獨考察金銀花的正交，另取當歸、川芎提取揮發(fā)油后的藥

15、渣及丹參、梔子和黃芩醇提后的藥渣，與黃芪、白芍、龜版、熟地進行水提，以芍藥苷含量作為考察指標進行正交實驗，確定以上幾味藥的水提工藝。     09-09-02 09:41:00     編輯：studa202.3.1  金銀花提取工藝    正交實驗設(shè)計：金銀花水提取工藝選取了對提取物收率影響較大的加水量、提取時間、提取次數(shù)為考察因素，以綠原酸含量為考察指標，選定L9(34)正交表進行實驗。正交因素水平表見表9。表9  金銀花水提工藝正交因素水平（略）實驗方法：稱取

16、金銀花12.5 g，按正交設(shè)計表加水煎煮。    綠原酸的測定：供試品溶液制備：取提取液1 ml，置50 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液制備：取綠原酸對照品適量，精密稱定，加稀乙醇溶解并稀釋制成每1毫升中約含0.02 mg的溶液。精密量取1 ml，置5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定方法：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相；甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（188210.1）為流動相；柱溫35；檢測波長327 nm。吸取供試品溶液和對照品溶液各20 l，分別用HPLC色譜儀于波長327 nm處測定峰面積，按外標法計算綠原酸含量。實驗結(jié)果見表1

17、0。表10  金銀花水提工藝的正交實驗結(jié)果（略）從正交實驗結(jié)果可見，以綠原酸為考察指標，對綠原酸含量的影響大小依次為：加水量>提取時間>提取次數(shù)，最佳工藝為A3B3C1，即加入10倍量水，煎煮2 h，提取1次。      結(jié)果分析：表10中綠原酸含量經(jīng)方差分析，對各因素影響的顯著性進行了檢驗。結(jié)果見表11。表11  金銀花水提工藝的方差結(jié)果分析（略）對正交實驗結(jié)果進行方差分析，對各因素的影響大小的顯著性進行了檢驗，在3個因素中，加水量（A）對綠原酸的提取率影響最大，以加入10倍量時得到的綠原酸含量較高。提取時間（B）對綠原

18、酸含量影響不大，為節(jié)能及提高工效，故選擇1.5 h。提取次數(shù)（C）對綠原酸含量影響也不大，選擇提取1次。    驗證性實驗：經(jīng)過優(yōu)選后確定的提取工藝為A3B2C1，即加入10倍量水，煎煮1.5 h，提取1次。對優(yōu)選工藝和最佳工藝進行驗證性實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，選取工藝A3B2C1和最佳工藝A3B3C1無顯著性差別。驗證實驗結(jié)果見表12。表12  金銀花水提工藝的驗證性試驗（略）2.3.2  黃芪、白芍、龜版、熟地提取4    正交實驗設(shè)計：稱取白芍7.5 g，黃芪9.0 g，龜版5 g，熟地5 g及當歸27 g，川芎15

19、g提取揮發(fā)油后的藥渣與醇提工藝后的藥渣，加水煎煮提取。選取了對提取物收率影響較大的（A）加水量、（B）提取時間、（C）提取次數(shù)作為考察因素，以芍藥苷的含量為考察指標，按如下進行正交實驗。見表13。表13  水提工藝正交因素水平（略）實驗方法：取白芍7.5 g，黃芪9.0 g，龜版5 g，熟地5 g，當歸27 g，川芎15 g提取揮發(fā)油后的藥渣與醇提工藝后的藥渣，分別加水煎煮提取。    芍藥苷的測定：供試品溶液的制備：精密量取上述各藥材提取液1 ml至50 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶

20、解并稀釋制成每毫升中約含0.1 mg的溶液，即得。測定方法：選用十八烷基鍵合硅膠為固定相；乙腈-水（1783）為流動相；柱溫30；檢測波長230 nm。吸取供試品溶液和對照品溶液各20 l，分別用HPLC色譜儀于波長230 nm處測定峰面積，按外標法計算芍藥苷含量。實驗結(jié)果見表14。方差分析見表15。表14  水提工藝的正交實驗結(jié)果（略）表15  水提工藝的方差結(jié)果分析（略）從正交實驗結(jié)果可見，以芍藥苷為考察指標，對芍藥苷含量的影響大小依次為：提取次數(shù)加水量提取時間。對實驗結(jié)果進行了方差分析，對各因素的影響大小的顯著性進行了檢驗，在3個因素中，加水量（A）對芍藥苷含量影響較顯著，以加水10倍量使芍藥苷的提取率最高，提取時間（B）影響不顯著，但以提取1.5 h得到的芍藥苷含量較高。提取次數(shù)（C）對芍藥苷含量影響最大，提取2次芍藥苷的提取率最高。則最佳工藝為加水10倍量，煎煮2次，1.5