色譜分析法在藥物分析中的應(yīng)用(共8頁(yè))

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上色譜分析法在藥物分析中的運(yùn)用氣相色譜法測(cè)定丁香藥材中丁香酚的含量丁香Eugenia caryopbllata Thunb藥材來(lái)源于桃金娘科植物的干燥花蕾，收載于中國(guó)藥典1995年版一部。在95版藥典中，丁香藥材的音量測(cè)定只收載了測(cè)定揮發(fā)油音量的方法，但沒(méi)有測(cè)定揮發(fā)油中丁香酚(C10H12O2)的音量。為進(jìn)一步控制和考察丁香藥材中丁香酚的音量，我們分別采用了浸潰法和揮發(fā)油提取法，提取后用氣相色譜法分別來(lái)測(cè)定丁香藥材中丁香酚的音量。1 儀器與試磚GC-9A 和GC-14B氣相色譜議(日本島津)。10%PEG-20M 色譜柱。丁香酚耐照品 購(gòu)自中國(guó)藥品生物錨品檢定所(批號(hào)：

2、7258802)，經(jīng)標(biāo)化其音量為98%以上，其它試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2 1 色譜條件廈系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：色譜柱：lO%PEG-20M，檢測(cè)器FID，N2：60kPa，柱溫：180，進(jìn)樣口溫度：250，衰減2。在上述條件下丁香酚峰與其它組分峰均能達(dá)到基線分離，且出峰對(duì)間較快，峰形較好，陰性樣品無(wú)干擾。吸取上述對(duì)照品溶液1L，注人氣相色譜儀，結(jié)果理論塔板數(shù)n> 1200。拖尾因子在0.951.05之間，校正因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.0%。28 供試品和對(duì)照品溶液的制備22 1 提潰時(shí)間的確定：在試驗(yàn)研究中比較了不同浸漬時(shí)同丁香藥材中丁香酚的含量。上述結(jié)果表明，浸漬24 h以上，丁香藥

3、材中的丁香酚已浸漬完全。222 供試品溶液的制備：取本品粗粉約0.6g，精密稱定，量具塞錐形瓶中，精密加入乙醇2OmL，稱定重量，搖勻t宣溫放量24h以上，再稱定重量，補(bǔ)足損失重量，振搖后放量，用濾紙濾過(guò)。精密量取濾液5mL，量25mL的容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。22 3 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇溶解，制得0.492 mgmL 的溶液，作為對(duì)照品溶液。23 線性范圍的考察 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液0.5、1、1.5、2.0、2.5、3.0、4、5L，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱座標(biāo)，丁香酚音量為橫座標(biāo)，計(jì)算得回歸方程Y= 9.26

4、×10000X一35.94，r=0.9999，表明丁香酚在0.2462.46ng具有良好的線性關(guān)系。24 精密度試驗(yàn)：精密吸取丁香酚對(duì)照品溶液1L，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果測(cè)得平均峰面積為，RSD為1.3%。2. 5 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批藥材5份，按丁香酚音量測(cè)定方法操作，結(jié)果丁香酚音量的平均值為121.02mgg，RSD 為0.7%。26 回收率試驗(yàn)：采用加樣回收法，精密稱取已知音量的丁香藥材0.1 g(每克藥材吉丁香酚121.6mg)，分別加對(duì)照品適量，按音量測(cè)定方法試驗(yàn)，結(jié)果平均回收率為98.6，RSD為0.5%。27 樣品音量的測(cè)定 分別取不同來(lái)源的5批丁香藥材，按吉量測(cè)定方法試驗(yàn)

5、，分別測(cè)定丁香酚的含量。3 小結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用浸潰提取法比揮發(fā)油提取法簡(jiǎn)便、可控和準(zhǔn)確，可以作為該藥材的質(zhì)量檢控指標(biāo)之一。HPLC-ELSD在藥物分析中的應(yīng)用1、在天然藥物及復(fù)方成藥分析中的應(yīng)用     ELSD能夠測(cè)定沒(méi)有紫外吸收或?yàn)樽贤饽┒巳跷盏臉悠罚烊划a(chǎn)物中的許多成分無(wú)疑找到了直接、準(zhǔn)確的測(cè)定方法。ELSD在天然產(chǎn)物及其復(fù)方成藥分析中的應(yīng)用報(bào)道主要有皂苷類、生物堿類、萜類內(nèi)酯等。皂苷無(wú)紫外吸收或僅為末端吸收，ELSD能夠?qū)ζ洳唤?jīng)衍生進(jìn)行檢測(cè)，在HPLCELSD的應(yīng)用中這方面的報(bào)道最多。主要有一次性分離分析天然人參、生脈散復(fù)方、育精膠囊中的多

6、種人參皂苷；西洋參中的人參皂苷和擬人參皂苷定量測(cè)定；三七中的三七皂苷的含量分析；黃芪、黃芪注射液和保元湯中的黃芪皂苷、黃芪甲甙的分離和測(cè)定；麥冬中的甾體皂甙元；天麻中的天麻甙的含量測(cè)定等。這些研究主要采用Cl8柱、乙晴與水作流動(dòng)相，不經(jīng)衍生直接測(cè)定多組分含量，結(jié)果顯示方法靈敏度高(一般檢測(cè)限低于3gm1)、線性關(guān)系良好。對(duì)于無(wú)紫外吸收的生物堿類成分，ELSD同樣顯示出操作簡(jiǎn)單、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。對(duì)比HPLCUV法測(cè)定貝母中的甾類貝母生物堿，采用ELSD檢測(cè)器，不但不需衍生化操作，提高了結(jié)果的準(zhǔn)確度，而且可檢測(cè)出不含雙鍵的貝母甲素，對(duì)動(dòng)物體內(nèi)的生物堿類成分如河豚毒素，無(wú)紫外吸收且安全性低，不適合衍

7、生化法，可用ELSD法進(jìn)行檢測(cè)，獲得滿意結(jié)果。銀杏作為一種保健藥品，其主要活性成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯，以往銀杏中的萜類內(nèi)酯成分主要采用HPLCUV法和HPLCRI測(cè)定，但由于萜類內(nèi)酯紫外吸收差，又含少量物質(zhì)的干擾，結(jié)果穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性較差隨著ELSD的發(fā)展和普及，這些方法已經(jīng)逐漸被ELSD法所取代。2、 在抗生素分析中的應(yīng)用     HPLCELSD早在20世紀(jì)九十年代就用于天然產(chǎn)物分析，隨著技術(shù)的發(fā)展，其應(yīng)用范圍已逐漸擴(kuò)大，近年來(lái)屢有用HPLCELSD分析抗生素類藥物的報(bào)道，HPLCELSD分析抗生素類藥物的報(bào)道多見(jiàn)于氨基糖苷類抗生素、氨基糖苷類抗生素是

8、臨床上常用的抗生素，可通過(guò)微生物發(fā)酵或半合成制得，是一類單組分或多組分糖基取代的氨基環(huán)醇類化合物，主要有：鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、阿米卡星、小諾霉素等。對(duì)這一類抗生素的含量測(cè)定多采用微生物法，但微生物法測(cè)定的是各活性組分的總量，無(wú)法反映各組分組成。為克服這個(gè)缺點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外的藥典采用HPLC法進(jìn)行測(cè)定，但這類抗生素?zé)o紫外吸收，只能采取衍生化法(多為柱前衍生)，結(jié)果易受衍生化反應(yīng)條件的影響而不夠準(zhǔn)確，ELSD法很好地解決了這個(gè)問(wèn)題。氨基糖苷類抗生素含多個(gè)氨基，可產(chǎn)生含不同當(dāng)量無(wú)機(jī)酸鹽產(chǎn)品，對(duì)于這些副產(chǎn)物成分，ELSD也能很好的加以測(cè)定。高效液相色譜 - 熒光衍生法在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用體內(nèi)藥物分

9、析是在大量復(fù)雜組分中進(jìn)行微量或超微量藥物及代謝產(chǎn)物的測(cè)定。體內(nèi)藥物分析最常用的檢品是血樣(血漿、血清、全血)、尿樣、唾液及組織液, 特殊情況下也采用乳汁、淚液、膽汁、羊水、糞便等1。隨著藥物的開(kāi)發(fā)研究, 藥物的服用劑量越來(lái)越小, 體內(nèi)藥物的濃度越來(lái)越低, 這對(duì)分析方法靈敏度和選擇性等都提出很高的要求2。高效液相色譜法具有準(zhǔn)確、靈敏度、專一性強(qiáng)等特點(diǎn), 一直是體內(nèi)藥物分析的主要手段3。而高效液相色譜的熒光檢測(cè)器比紫外吸收檢測(cè)器靈敏度高。具有強(qiáng)紫外吸收的化合物檢測(cè)靈敏度可達(dá) ng水平, 而熒光衍生物一般的檢測(cè)水平為 10-1210-14m ol/L,靈敏度比紫外檢測(cè)器提高 101000 倍4。故

10、H PLC 法結(jié)合熒光檢測(cè)法所具有的較高的選擇性及靈敏度以及試樣用量少的特性, 使得對(duì)復(fù)雜生物樣品中藥物及其代謝物的測(cè)定變得更加靈敏、準(zhǔn)確、快速。但熒光檢測(cè)器要求被檢測(cè)樣品能被激發(fā)產(chǎn)生熒光. 對(duì)于不產(chǎn)生熒光或熒光較弱的樣品靈敏度很低, 甚至不能檢測(cè)。為了擴(kuò)大檢品范圍, 提高檢測(cè)靈敏度, 常采用熒光衍生法。熒光衍生法是指在一定條件下利用某種試劑與樣品中待測(cè)組分相作用, 使其產(chǎn)物具有熒光或熒光增強(qiáng)。另外,熒光檢測(cè)器選擇性好, 過(guò)量的試劑和副產(chǎn)物往往不產(chǎn)生干擾, 衍生物亦不必純化, 因此熒光衍生技術(shù)的采用, 擴(kuò)大了高效液相色譜 - 熒光測(cè)定法在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用范圍, 為藥物代謝動(dòng)力學(xué), 臨床藥理

11、學(xué)和毒理學(xué)等研究提供科學(xué)依據(jù)。熒光衍生化反應(yīng)根據(jù)衍生反應(yīng)的場(chǎng)所來(lái)分, 有柱前衍生化(pre-colum n derivatization), 柱上衍生化(on-colum n derivati-zation)和柱后衍生化(post-colum n derivatization)三種. 從是否與儀器聯(lián)機(jī)的角度來(lái)分有: 在線(on-line)、離線(of-line)和旁線(at-line)(自動(dòng)化)三種. 目前在 H PLC 中以離線的柱前衍生法(簡(jiǎn)稱柱前衍生法)與在線的柱后衍生法(簡(jiǎn)稱柱后衍生法)使用居多. 旁線衍生化方法是發(fā)展方向5。1 衍生化試劑常用的熒光衍生化試劑有: 熒光試劑和熒光染料熒

12、光胺(fluorescam ine, 又名胺熒) 、鄰苯二甲醛(O-phthaldehyde) 、丹酰 氯 (dansylchloride, DNS-Cl)、 氯 化 硝 基 苯 駢 氧 二 氮 茂(NBD-chloride)、等。熒光胺是一常用熒光衍生化試劑, 可同伯胺及大多數(shù)氨基酸反應(yīng), 反應(yīng)迅速, 衍生物具有高熒光強(qiáng)度的吡咯啉酮, 而試劑本身則迅速水解為不發(fā)熒光的產(chǎn)物, 是一理想的柱前衍生化試劑; 丹酰氯是應(yīng)用最廣的熒光衍生試劑, 常用于含氨基藥物的測(cè)定, 同伯胺和仲胺都能反應(yīng), 還可用于含酚羥基藥物如雌激素的測(cè)定; 鄰苯二甲醛, 常用于伯胺類及 - 氨基酸類化合物的熒光分析。胺類化合物

13、的衍生試 劑 還 有 熒 光 素 異 硫 氰 酸 酯 (FITC) 、 芴 代 甲 氧 基 酰 氯(FM OC) 、4- 氯 -7- 硝基 -2,1,3- 苯駢惡二唑 ( NBD-C) 、l6-氨喹啉基琥珀酰亞胺碳酸酯(AQC) 等610。目前已開(kāi)發(fā)出一些醇和酸的衍生化試劑1113。醇、酚的衍生試劑有: 羰基氯類(FM OC、CEOC) , 氯 甲 酸 芴 甲 酯 (FM OC-C1); 磺 酰 氯 類(DNs-Cl) , 鹵代三嗪類有:1- 乙氧基 -4- (二氯 - 三嗪)萘(EDTN ) ; 羧酸類化合物的衍生試劑有: 4- 溴甲基 -7- 甲氧基香豆素 (BrM M C) , 7-N-

14、 哌嗪 -4- 二甲氨基苯駢呋喃重氮(DBD-Pz) 、9- 蒽重氮甲烷 (ADAM ) 、4- 氨甲基 -6, 7- 二甲基香豆素(ADM C)、9-(2- 羥乙基)- 吖啶酮(H EA ) 等。羰基化合物的衍生試劑有肼類: DNs-H 、CEOC-H , 氨基類有氨基甲基芘等。另外, 還有些化學(xué)試劑可利用化學(xué)反應(yīng)使一些自身不能產(chǎn)生熒光的化合物轉(zhuǎn)變成熒光化合物。這可能是由于化學(xué)反應(yīng)增加了 電子共軛系統(tǒng)的長(zhǎng)度或增加分子結(jié)構(gòu)的剛性和共平面性所致。常用的化學(xué)反應(yīng)有氧化還原反應(yīng)、水解反應(yīng)、縮合反應(yīng)、絡(luò)合反應(yīng)、光化學(xué)反應(yīng)等。比如維生素 B1 可在堿性溶液中被 K3Fe(CN)6 氧化成具有熒光的硫色素

15、, 氨芐青霉素在酸性溶液中(pH =2),以甲醛為催化劑, 90加熱 2 小時(shí),水解成強(qiáng)烈黃色熒光的化合物。2 生物樣品的前處理生物樣品中的藥物在檢測(cè)前, 首先應(yīng)除去蛋白質(zhì)的干擾, 保證色譜柱的柱效和壽命。去除蛋白質(zhì)常用的方法有加入沉淀劑和變性試劑, 如硫酸銨、硫酸鈉等中性鹽、強(qiáng)酸和重金屬鹽等; 加入可與水混溶的有機(jī)溶劑, 如甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃等。經(jīng)有機(jī)溶劑或酸處理后的生物樣品與反相 H PLC 分析相匹配。應(yīng)用反相 H PLC 時(shí)生物樣品甚至可以不用有機(jī)溶劑萃取, 可將含藥的液體樣品直接進(jìn)樣或經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的去蛋白后進(jìn)樣, 操作簡(jiǎn)單, 所以應(yīng)用前景甚為廣泛14。另外還有酶消化法、綴合

16、物水解 冷凍干燥等方法。生物樣品一般經(jīng)預(yù)處理后, 再進(jìn)行分離提取。提取的目的是從大量共存物中分離出需要的微量組成 - 藥物及其代謝物。常用的方法有溶劑提取和固相分離兩種。溶劑提取常用的有機(jī)溶劑有正丁醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、苯、正已烷等及它們的混合溶液; 固相分離是將具有吸附或離子交換性質(zhì)、表面積大的擔(dān)體作為填充劑, 裝于小分離管中 ,將生物樣品中的干擾物或藥物保留在擔(dān)體上而進(jìn)行分離的方法 ,也可認(rèn)為是微型柱色譜法2。常用擔(dān)體有聚苯乙烯、十八烷基鍵合硅膠、活性碳及硅藻土等。還有將預(yù)處理過(guò)程與層析過(guò)程線上(on-line)進(jìn)行的 ,在分析柱前加上較短(45cm )的預(yù)柱 ,使蛋白質(zhì)等大

17、分子雜質(zhì)沉積在預(yù)柱上。3 熒光衍生法- 高效液相色譜法3.1 柱前熒光衍生法- 高效液相色譜法目前在 HP LC 中以離線的柱前衍生法(簡(jiǎn)稱柱前衍生法)使用最多 ,柱前衍生法的優(yōu)點(diǎn)是: 相對(duì)自由地選擇反應(yīng)條件;不存在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的限制; 衍生化的副產(chǎn)物可進(jìn)行預(yù)處理以降低或消除其干擾; 容易允許多步反應(yīng)的進(jìn)行; 有較多的衍生化試劑可選擇; 不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。缺點(diǎn)是: 形成的副產(chǎn)物可能對(duì)色譜分離造成較大困難; 在衍生化過(guò)程中 ,容易引入雜質(zhì)或干擾峰 ,或使樣品損失。此方法目前在藥物分析中運(yùn)用最多。毛麗莎15等采用對(duì)硝基苯甲酰氯柱前熒光衍生法 ,用高效液相色譜儀同時(shí)測(cè)定人尿和血清中雌激素雙酚 A

18、、4- 壬基酚、17- 乙炔基雌二醇及雌三醇、17- 雌二醇和 17- 雌二醇。尿樣經(jīng)酸水解、固相萃取柱濃縮、凈化分離; 血清樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白后 ,用乙醚萃取游離態(tài)雌激素 ,N2 氣流揮干。所研究的 6 種被測(cè)物除 4- 壬基酚和雙酚 A 外, 其余 4 種化合物本身的熒光強(qiáng)度較弱 ,直接熒光檢測(cè)的靈敏度低。故采用對(duì)硝基苯甲酰氯為熒光衍生劑, 在無(wú)水條件下與 6 種雌激素在無(wú)水環(huán)境中發(fā)生熒光衍生化反應(yīng) ,生成具有強(qiáng)熒光物質(zhì)。衍生化后, 17- 乙炔基雌二醇、雌三醇和兩種異構(gòu)體雌二醇的熒光效率明顯提高 ,用高效液相色譜法進(jìn)行定量。檢出限為 2.78.3/g L; 加標(biāo)回收率尿樣為 78.010

19、2.5%, 血清樣為 72.698.6%; 方法精密度為 1.294.52%。 張慧 ,余琛16等建立血清中鹽酸美西律的柱前衍生化 -液相色譜熒光檢測(cè)法。鹽酸美西律是一伯胺類化合物,故首先將血清樣品用丙酮液直接沉淀蛋白后 ,定量加入熒光胺丙酮溶液 ,得鹽酸美西律的熒光衍生物。采用反相高效液相色譜法 ,熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng)(ER)為 392nm ,發(fā)射波長(zhǎng)(Em)為 480nm 。在 0.1006.400 mg ?L-1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為 5g?L-1 ,(S/ N 4)。批內(nèi) 、批間 精密度為 1.345.31%。 可滿足鹽酸美西律的臨床血藥濃度的監(jiān)測(cè)和藥代動(dòng)力學(xué)研究。葉惟泠

20、等17用甘磺酰氯柱前衍生化反相高效液相色譜熒光檢測(cè)法分析了正常人和肝病患者血漿中哌啶酸的水平。熒光胺能特異地與一級(jí)氨基酸和生物胺反應(yīng) ,其衍生物能用乙酸乙酯提取去除。PA( 哌 啶酸- 2)等 亞胺酸也能與熒光胺反應(yīng) ,但不產(chǎn)生熒光化合物 ,且該反應(yīng)在酸性條件下是可逆的。故樣品采用熒光胺提取法 ,除去血漿中的其他氨基酸和生物胺對(duì)檢測(cè)的干擾。哌啶酸一 3 為內(nèi)標(biāo)物 ,測(cè)得平均回收率為84% , 至少在 40pm ol至 2nmo l的范圍內(nèi), 濃度與響應(yīng)的線性關(guān)系良好 兩個(gè)哌啶酸的檢測(cè)極限分別 2.0 和 2.5pmo l。魏字峰18建立測(cè)定血漿中賴諾普利濃度的方法 ,靈敏度高 ,操作步驟簡(jiǎn)單。

21、首先將血漿樣品經(jīng)固相萃取, 然后與熒光用 Hy persilODS 柱 ,流動(dòng)相為 20 mm o /l L KH2 P04 緩沖液(pH3 .0)- 甲醇(35:65, V/ V), 流速為 1.0 ml/ mi n; 進(jìn)樣量為 20l; 熒光檢測(cè)器的激發(fā)波長(zhǎng)為 383nm , 發(fā)射波長(zhǎng)為 477 nm 。賴諾普利濃度在 2200 n/g ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 (r=0.9978) ,工作曲線穩(wěn)定 ,平均絕對(duì)回收率為 68.55% (n=l5) ,日內(nèi)與日間精密度均小于 3% , 最低檢測(cè)限為 ln/g ml ; 且內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定。徐智儒、蔣曄19建立生物樣品中阿德福韋的反相高效液

22、相色譜分析方法。方法是先將大鼠血漿、組織經(jīng)沉淀蛋白處理后 ,分別加入氯乙醛(0.32mo ?lL-1)及乙酸鈉(4m o?lL -1)50l, 混勻 ,95水浴加熱 30 mi n 進(jìn)行衍生化反應(yīng) ,用 Inter-silC18 反相柱(150 mm ×4.6 mm , 5m) , 乙腈 -10 mm o l?L-1 磷酸鹽緩沖液(2 m mo ?lL-1 氫氧化四丁基銨, 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 為 7.0)(10:90)為流動(dòng)相 ,流速 1.5m L?mi n-1 ,熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為 ex309nm 和 me425nm 。測(cè)定血藥 濃度的線性范 圍為0.020- 7.9g?mL -

23、1 ,其相關(guān)系數(shù)為 (r=0.9993) ,最低檢測(cè)限為 5?gL-1。方法回收率為 95.199.0% 。汪震、劉東等20建立測(cè)定血漿加巴噴丁濃度的高效液相色譜法。方法: 待測(cè)血漿中加入內(nèi)標(biāo)替米沙坦后, 用乙腈沉淀蛋白 ,鄰苯二甲醛衍生化 ,進(jìn)行高效液相熒光檢測(cè)。色譜柱為Symm etryC18 柱 ,流動(dòng)相為 0.05mo l?L-1 磷酸二氫鉀溶液 - 乙腈(57:43) ,pH 3.6。流速 0.8 m l?mi n-1, 激發(fā)波長(zhǎng) 330 nm ,發(fā)射波長(zhǎng) 440 nm 。結(jié)果: 線性范圍為 0.02716.35 m g?L-1, r=0.9973 ,低、中、高三種濃度的平均回收率分

24、別為 91.9% ,99.2%, 9 6.0%, 最低檢測(cè)限為 0.027mg ?L-1。潘保良21建立了一種綿羊血漿中阿維菌素(AVM )熒光高效液相色譜(H PLC)檢測(cè)法。用甲醇提取綿羊血漿中的 AVM并用 ODS-C18 固相萃取法進(jìn)行純化 ,純化后的 AVM 經(jīng)干燥處理后 ,用三氟乙酸酐和 N- 甲基咪唑?qū)ζ溥M(jìn)行熒光衍生化,用熒光 HP LC 進(jìn)行檢測(cè)。本方法的最低檢測(cè)限為 0.1 n/g ml 。在血漿 AVM 含量 2.550.0 /g ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好 ,該方法靈敏度高 ,干擾少 ,重復(fù)性好。張曉萍、王國(guó)民22將血漿中兒茶酚胺類化合物(CAs)與二苯基硼酸 -2- 氨基

25、乙醇在堿性條件下生成配合物 ,用正辛醇將從正庚醇中提取后 ,與 1,2- 二苯基乙二胺(DPE)在適宜的條件下發(fā)生衍生化反應(yīng) ,生成相應(yīng)的二苯基喹喔啉衍生物。這些衍生物在島律 Shim -Pack CLC-ODS 柱上 ,用甲醇 -0.50mo l/L Tris- H Cl緩沖液等度洗脫, 16m in 能完全分離; 在W atersNova-pack C18 柱上 ,用甲醇 0.01 mo 1/LTris-HC l緩沖液等度洗脫 ,10mi n 能完全分離; 熒光檢測(cè)波長(zhǎng): xe350nm ,me480nm- 去甲腎上腺素(NB)檢測(cè)限為 10fmo l/100l、腎上腺素(E)和多巴胺(D

26、A)的檢測(cè)限分別為 10fm ol/100l和 12.5fmo I/100l。毛葉萌23建立一種高效液相色譜法(HP LC)用于測(cè)定血漿中的威替米星含量。方法: 樣品采用乙腈蛋白沉淀法 ,并以奈替米星作為內(nèi)標(biāo), 將威替米星與氯甲酸芴甲酯(FM OC-C1)衍生化后在反相 C18 柱上達(dá)到分離 ,以熒光檢測(cè)器檢測(cè)反應(yīng)生成的衍生物。試驗(yàn)中對(duì)不同衍生化條件進(jìn)行了考察。流動(dòng)相為乙腈 - 水(95:5) ,熒光檢測(cè)激發(fā)波長(zhǎng) 263 nm , 發(fā)射波長(zhǎng) 315nm 。結(jié)果: 威替米星線性范圍是 0.0245 mg ?L-1, 定量限為0.02 mg ?L-1。血漿中的相對(duì)平均回收率為 99.84%。 重現(xiàn)

27、性好,靈敏度高。3.2 柱后衍生- 高效液相色譜法柱后衍生法是樣品經(jīng)色譜柱分離后 ,在洗脫液中加入衍生試劑 ,使進(jìn)行反應(yīng)后 ,檢測(cè)衍生物。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是: 可以自動(dòng)連續(xù)進(jìn)行, 操作簡(jiǎn)便 ,產(chǎn)物不需要高的穩(wěn)定性 ,只需有好的重復(fù)性, 能定量進(jìn)行即可; 且被分析物可以在其原有的形式下進(jìn)行分離 ,容易選用已有的分析方法。缺點(diǎn)是: 柱后衍生化是洗脫液同試劑混合后經(jīng)反應(yīng)器到達(dá)檢測(cè)器 ,可造成峰展寬 ,降低分辨率; 衍生反應(yīng)最好在 2mi n 內(nèi)完成 ,對(duì)于一定的溶劑和有限的反應(yīng)時(shí)間來(lái)說(shuō), 可供選擇的反應(yīng)有限; 需要額外的設(shè)備( 柱后衍生化反應(yīng)器); 避免過(guò)量的試劑造成干擾。堡二里、陳青俊等24研究柱后

28、光化學(xué)衍生熒光檢測(cè)高效液相色譜分離測(cè)定豬肝中維生紊 B1 的方法。采用 C18 柱 ,以含有 2% 乙腈的 pH 4.0 磷酸鹽緩沖液(0.1m ol/L)作流動(dòng)相反相分離 ,豬肝中的維生素 B1 可與其它雜質(zhì)達(dá)到完全分離。色譜流出液在柱后與 0.75% Na2SO3-4% NaOH 的混合試劑溶液在線匯合后流經(jīng)一聚四氟乙烯(PTFE)細(xì)管制成的光化學(xué)反應(yīng)器時(shí) ,維生素 B1 轉(zhuǎn)化為強(qiáng)熒光產(chǎn)物 ,由熒光檢測(cè)器測(cè)定。在最佳條件下 ,進(jìn)樣 20l,檢測(cè)限為 3.8g/L,工作曲線的線性范圍為 0.03310mg /L ,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為 1.8% , 標(biāo)準(zhǔn)加入回收率為 97102%。 姜莉

29、 ,趙守成25用柱后衍生一熒光檢測(cè)高效液相色譜法快速測(cè)定牛奶中鏈霉素殘留量, 牛奶樣品經(jīng)磷酸溶液提取,提取液用苯磺酸陽(yáng)離子交換柱和 C18 固相萃取柱凈化 ,鏈霉素殘留液用甲醇從 C18 固相萃取柱上洗脫 ,經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸干, 殘?jiān)?0.01mo /l L 庚烷磺酸鈉溶液溶解 ,用氫氧化鈉溶液為衍生試劑 ,柱后衍生一高效液相色譜熒光檢測(cè)器在激發(fā)波長(zhǎng) 263 nm 和發(fā)射波長(zhǎng) 435 nm 測(cè)定。方法線性范圍為0.010.10 m g/ kg; 在 0.010.10 mg / kg 范圍 ,三個(gè)添加水平的回收率為 78.380.2% , 變異系數(shù)(CV)為 7.4% 12.4% ,方法檢出限為 0.005 mg / kg。任一平 ,徐威等26應(yīng)用柱后衍生熒光測(cè)定高效