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1實(shí)驗(yàn)三 革蘭氏染色法一、細(xì)菌抹片及染色的目的 由于細(xì)菌個(gè)體微小,基本上無(wú)色透明,故將其用適當(dāng)染料染色觀察,方能顯示它的形態(tài)、大小、構(gòu)造及染色特性等,在細(xì)菌鑒別上有重要意義。2二、原理 細(xì)菌的等電點(diǎn)較低,約 在pH 25之間,故在中性、堿性或 弱 堿性溶液中,菌體蛋白質(zhì)電離后帶負(fù)電荷,易與帶正電荷的堿性染料如龍膽紫及堿性復(fù)紅等結(jié)合,使細(xì)菌被染成紫色或紅色。3三、細(xì)菌抹片制備及染色程序載玻片準(zhǔn) 備接種環(huán)滅 菌固體被檢物加蒸餾水一滴液體被檢物不加蒸餾水釣菌涂抹干燥固定火焰固定化學(xué)固定染色單染色法復(fù)染色法水洗干燥鏡檢繪圖4四、細(xì)菌革蘭氏染色法的步驟及結(jié)果1、加草酸銨結(jié)晶紫染色液 1-2min,水洗;2、加革蘭氏稀碘液 1-3min,水洗;3、加95%酒精脫色 0.5min,水洗;4、10倍稀釋石碳酸復(fù)紅液復(fù)染 10-30s,水洗;5、結(jié)果 藍(lán)紫色:革蘭氏陽(yáng)性菌 紅 色:革蘭氏陰性菌5枯草芽孢桿菌大腸桿菌6 五、作業(yè)1、制備細(xì)菌染色標(biāo)本片時(shí)應(yīng)注意哪些事項(xiàng)?2、涂片固定的意義何在?固定時(shí)應(yīng)注意什么問(wèn)題?3、試述細(xì)菌革蘭氏染色法的步驟及結(jié)果。4、繪出鏡檢圖。
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