最新2010版藥典生化藥匯總

1、2010版藥典版藥典生化藥總結(jié)報告生化藥總結(jié)報告徐康森l第一部分:生化藥的基本概況l第二部分:2010年版中國藥典生化藥歸總第一部分：生化藥的基本概況第一部分：生化藥的基本概況l1、生化藥的定義l2、生化藥的發(fā)展1、生化藥的定義、生化藥的定義 生化藥物是我國醫(yī)藥產(chǎn)品的一個大類。 生化藥主要從動、植物及微生物發(fā)酵提取的、化學合成、生物-化學半合成或用現(xiàn)代生物重組技術制得的一類藥品 尤其對于嚴重危害人類健康和生命的疾病，如心腦血管病、癌癥、糖尿病和病毒疾患等有其獨特的治療效果。深受人民的歡迎和重視。2、生化藥的發(fā)展歷程、生化藥的發(fā)展歷程時間時間發(fā)展階段發(fā)展階段品種標準品種標準產(chǎn)值產(chǎn)值1950年-1

2、978年初具規(guī)模1978年-1995年準備發(fā)展品種100個左右產(chǎn)值20億1995年-2005年初步發(fā)展品種350個左右產(chǎn)值200億2005年-2009年發(fā)展品種400個左右產(chǎn)值500-600億醫(yī)藥行業(yè)的發(fā)展狀況醫(yī)藥行業(yè)的發(fā)展狀況第二部分：第二部分：2010年版中國藥典生年版中國藥典生 化藥歸總化藥歸總l l 為貫徹黨的十七大精神，落實科學發(fā)展觀，建國以來的第九版藥典中國藥典2010年版，已完成增修訂任務，目前已經(jīng)正式出版發(fā)行。宗旨：宗旨：l提高藥典質(zhì)量，l應用高新技術，l解決安全隱患，l趕超國際水平。本屆藥典生化藥修訂工作的特點本屆藥典生化藥修訂工作的特點l時間短l任務重l難度大l要求高中國藥

3、典中國藥典2010版生化藥版生化藥標準品種數(shù)匯總標準品種數(shù)匯總類別2005版標準（品種）2010版標準（品種）增加標準（品種）標準（品種）增長%刪除氨基酸及其衍生物 44（23）53（26）9（3）20.5%（13%）核酸及其衍生物 44（10）51（11）7（1）15.9%（10%）酶與輔酶 28（11）34（14）6（3）21.4%（27%）多肽、蛋白 26（11）30（13）8（3）30.8%（27%） 4多糖 15（5）19（6）4（1）26.6%（20%）脂 2（1）4（2）2（1）100.0%（100.0%）1總數(shù) 159（61） 191（72） 36（12）22.6%（19.6%

4、）5范圍范圍特點特點工藝（制劑）工藝（制劑）質(zhì)標增修訂內(nèi)容質(zhì)標增修訂內(nèi)容氨基酸及其衍生物氨基酸及其衍生物人生命的基本組成單位，人生命的基本組成單位，人健康的基本營養(yǎng)成分，人健康的基本營養(yǎng)成分，救死扶傷十分重要。救死扶傷十分重要。85年年200萬瓶萬瓶08年年2億萬瓶億萬瓶合成、發(fā)酵、提取、酶轉(zhuǎn)化合成、發(fā)酵、提取、酶轉(zhuǎn)化固：片、膠囊、顆粒、散、口含固：片、膠囊、顆粒、散、口含液：口服液、滴眼液、注射、沖洗液液：口服液、滴眼液、注射、沖洗液TLC其它其它aa檢查檢查 有關物質(zhì)有關物質(zhì)滲透壓滲透壓 紅外圖譜紅外圖譜*可見異物可見異物 旋光度：系數(shù)法計算旋光度：系數(shù)法計算*抑菌劑抑菌劑 含量測定：非水

5、滴定、比色、含量測定：非水滴定、比色、*微生物限度微生物限度 HPLC*細內(nèi)細內(nèi)核酸及其衍生物核酸及其衍生物生命的基本物質(zhì)、臨床治生命的基本物質(zhì)、臨床治病毒、心血管、腦損傷、病毒、心血管、腦損傷、缺氧等缺氧等合成、發(fā)酵合成、發(fā)酵固：片、含、膠、顆、凍干固：片、含、膠、顆、凍干液：口服、注射、滴液（眼、鼻）液：口服、注射、滴液（眼、鼻）Nacl注射、葡萄糖注射注射、葡萄糖注射 有關物質(zhì)有關物質(zhì) 含量均勻度含量均勻度異常毒性異常毒性 TLC滲透壓滲透壓 含量測定含量測定殘留溶劑殘留溶劑 熱源修訂為細內(nèi)熱源修訂為細內(nèi)溶液顏色和澄清溶液顏色和澄清 說明書增加用法、用量、注射途徑、說明書增加用法、用量、

6、注射途徑、 注速注速 酶與輔酶酶與輔酶參與一切代謝、生物體內(nèi)參與一切代謝、生物體內(nèi)催化劑、往往有生物活性催化劑、往往有生物活性大部分從生物體組織提取、少部分發(fā)酵大部分從生物體組織提取、少部分發(fā)酵法法固：片、膠囊、顆粒、軟膠囊、凍干、固：片、膠囊、顆粒、軟膠囊、凍干、粉粉液：注射液、溶液液：注射液、溶液溶液的顏色溶液的顏色 無菌無菌高分子物質(zhì)高分子物質(zhì) 過敏過敏有關物質(zhì)有關物質(zhì) 降壓物質(zhì)降壓物質(zhì)異常毒性異常毒性細菌內(nèi)毒素細菌內(nèi)毒素微生物限度微生物限度多肽多肽蛋白蛋白aa殘基組成肽鏈，由肽鏈殘基組成肽鏈，由肽鏈組成生命的基本物質(zhì)蛋白組成生命的基本物質(zhì)蛋白是國內(nèi)外新崛起一類新品是國內(nèi)外新崛起一類新品

7、種種 3-32aa很關注很關注大部分合成，少部分提取、重組產(chǎn)品歸大部分合成，少部分提取、重組產(chǎn)品歸發(fā)酵工藝發(fā)酵工藝固：注射用固：注射用液：注射液溶液液：注射液溶液高分子蛋白高分子蛋白 異毒異毒有關物質(zhì)有關物質(zhì) 細內(nèi)細內(nèi)相關蛋白相關蛋白 微生物限度微生物限度含量：含量：HPLC 過敏過敏金屬離子：吸收光譜金屬離子：吸收光譜多糖、多糖、脂脂機體代謝中提供能源、碳機體代謝中提供能源、碳源，亦是細胞結(jié)構(gòu)主要組源，亦是細胞結(jié)構(gòu)主要組成部分成部分提取、發(fā)酵提取、發(fā)酵固：片、膠囊、乳膏、軟膠囊、注射用固：片、膠囊、乳膏、軟膠囊、注射用液：注射液、液：注射液、Nacl、葡萄糖注射液、葡萄糖注射液金屬離子：吸收

8、光譜金屬離子：吸收光譜 有關物質(zhì)：有關物質(zhì)：HPLC 比活：比活： 含測：含測：HPLC、GC比旋度比旋度 過氧化值過氧化值有機殘留有機殘留 *甲氧基胺值甲氧基胺值細內(nèi)細內(nèi) 不皂化值不皂化值一、氨基酸及其衍生物類一、氨基酸及其衍生物類l1、基本介紹l 該類品種是組成蛋白質(zhì)的基本單位。組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸只有20種左右，均為L-a-氨基酸（除甘氨酸外）。因為是人類健康的基本營養(yǎng)成分，故在救死扶傷中扮演十分重要角色。l 臨床上除單方使用aa外，其還是復方aa注射液的主要組成成分。臨床上常用的氨基酸注射液有3aa、6aa、9aa、11aa、15aa、17aa、18aa（I-II）等。l 從1985

9、年銷售100萬瓶，到2008年銷售量已經(jīng)達到2億萬瓶，市場潛力很大，前景美好。2、2010年版中國藥典收載的氨基年版中國藥典收載的氨基酸及其衍生物類品種酸及其衍生物類品種l ?；撬峒捌渲苿ㄆ⑸?、顆粒、膠囊、滴眼液）；鹽酸精氨酸及其制劑（片、注射液）；色氨酸；谷氨酸（鈉）及其制劑（片、注射液、鉀注射液）；組氨酸及鹽酸組氨酸；脯氨酸；精氨酸；酪氨酸；絲氨酸；異亮氨酸；亮氨酸；賴氨酸（鹽酸、醋酸、芐達）；纈氨酸；門冬酰胺（片）、甘氨酸（沖洗液）、胱氨酸（片、鹽酸）、丙氨酸、甲硫氨酸（片）、蘇氨酸、苯丙氨酸、谷丙甘氨酸膠囊、乙酰半胱氨酸（滴眼液、顆粒）、乙酰谷氨酸（注射液）、羧甲司坦（口服溶液、片

10、、顆粒）等53個品種。3、收載的氨基酸及其衍生物類藥、收載的氨基酸及其衍生物類藥品品基本特點基本特點l幾乎包含了國內(nèi)外所有氨基酸類產(chǎn)品l方便臨床使用，該類產(chǎn)品呈現(xiàn)制劑系列化特點，如固體制劑包括：片、膠囊、顆粒、散、口含片；液體制劑有：口服溶液、滴眼液、注射液等4、品種增修訂情況、品種增修訂情況l l 增訂、修訂和統(tǒng)一有關檢查項目內(nèi)容、使得該類標準基本與國外同類標準接軌。增訂情況增訂情況修訂情況修訂情況TLC法檢查其他氨基酸 增加方法學系統(tǒng)適用性 試驗滲透壓可見異物抑菌劑（滴眼液、注射液）微生物限度細菌內(nèi)毒素 增加限度要求、干擾試驗等有關物質(zhì) 增加靈敏度要求、最小檢測量熱原修訂為細菌內(nèi)毒素溶液的

11、顏色紅外光譜旋光度用系數(shù)法計算含量測定 非水滴定 比色法 HPLC法二、核酸及其衍生物類二、核酸及其衍生物類l1、簡介：l 核酸是生命的最基本物質(zhì)，存在于一切生物細胞內(nèi)，DNA只要存在細胞的染色體中，RNA主要存在細胞的微粒體中。2、2010年版藥典收載的核酸及其年版藥典收載的核酸及其衍生物類藥品的品種衍生物類藥品的品種l 三磷酸腺苷二鈉、注射用ATP（注射液）、胞磷膽堿鈉（注射用、注射液）、肌苷（口服溶液、片、注射液、膠囊、注射用）、環(huán)磷腺苷（注射用）、鹽酸阿糖胞苷（注射用）、腺苷鈷胺（片）、更昔洛韋（注射液、注射用）、利巴韋林原料及其制劑、阿昔洛韋原料及其制劑、泛昔洛韋（片、膠囊）、鹽酸伐

12、昔洛韋（片、膠囊）等51個品種。3、收載的核酸及其衍生物類藥品、收載的核酸及其衍生物類藥品品種的基本特點品種的基本特點l臨床上治療病毒疾患為主，部分治療心血管及腦損傷、缺氧等疾病。l 如早期阿糖胞苷酸是治療威脅人類健康的病毒疾患的首創(chuàng)藥物；第一代核苷酸類藥物利巴韋林，第二代阿昔洛韋、更昔洛韋直至泛昔洛韋等。l該類產(chǎn)品大部分是微生物發(fā)酵或半合成的，化學結(jié)構(gòu)清楚、成分明白、質(zhì)量標準較完善。l2010年版藥典收載的核酸類藥物品種較為齊全，尤其制劑，劑型完整，低的2-3種，多的7-8種。如利巴韋林有11種：固體制劑有4種，片、口含片、膠囊、顆粒；液體制劑有7種，滴眼液、滴鼻液、口服溶液、注射劑、氯化鈉

13、注射液、葡萄糖注射液、注射用。4、品種增修訂情況、品種增修訂情況l 該類藥品大部分標準項目比較完善，大部分未增訂和修訂，少部分進行了增修訂。增訂情況增訂情況修訂情況修訂情況有關物質(zhì)異常毒性滲透壓殘留溶劑含量均勻度熱原修訂為細菌內(nèi)毒素含量測定方法TLC法分離度要求溶液的澄清度與顏色用法、用量注射途徑、注射速度Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹l 鹽酸阿糖胞苷（上海所起草，標準已全面達到或超過國外標準，有代表意義值得借鑒）l修訂了含量測定為HPLC法，限度達到98%-102%l增訂項目共6項：氯含量（因鹽酸鹽）、溶液的澄清度與顏色、有關物質(zhì)、熾灼殘渣、重金屬、殘留溶劑等。l 特

14、別是其中的氯含量測定、有關物質(zhì)檢查、l 殘留溶劑檢查等很重要l氯含量：電位滴定法測定，回收率100.4%，RSD=0.8%（n=6）；l有關物質(zhì)：對阿糖腺苷、尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷等進行考察，采用2種C18色譜柱進行系統(tǒng)適用性考察，得出相應結(jié)果。經(jīng)天津所和廣東所復核，結(jié)果一致；l殘留溶劑：對5個企業(yè)的8種溶劑進行考察（聚乙二醇毛細管柱，進行系統(tǒng)適用性、回收率和最低檢出限進行考察）。經(jīng)天津所和廣東所復核，結(jié)果一致。鹽酸阿糖胞苷質(zhì)量標準對比鹽酸阿糖胞苷質(zhì)量標準對比2010版版 2005版版 BP2007 USP30 JP15 鹽酸阿糖胞苷鹽酸阿糖胞苷 同左同左 阿糖胞苷阿糖胞苷 阿糖胞苷阿糖胞苷

15、阿糖胞苷阿糖胞苷 含量含量限度限度 無水干燥無水干燥98.0%102.0% 97.0%103.0% 99.0%100.5% 98.0%102.0% 98.5%101.0% 性狀性狀 白色、類白色細小針狀結(jié)白色、類白色細小針狀結(jié)晶或結(jié)晶粉末，水易溶，晶或結(jié)晶粉末，水易溶，乙醇略溶，乙醚幾乎不溶乙醇略溶，乙醚幾乎不溶 同左同左 白色或近白結(jié)晶性粉末白色或近白結(jié)晶性粉末 同左同左 白色晶體或晶粉白色晶體或晶粉，水易溶，乙醇，水易溶，乙醇略溶略溶 熔點熔點 189198 同左同左 215 214 比旋度比旋度 127+133 同左同左 154+160 同左同左 同左同左 鑒別鑒別 紫外紫外-可見：可見

16、：280nm最大吸收，最大吸收，241nm最小最小吸收吸收;含測：與對照液含測：與對照液主峰主峰RT一致一致;紅外圖譜紅外圖譜;溶液呈氯化物鑒別反溶液呈氯化物鑒別反應應 同左同左 154+160 紫外紫外-可見可見:230-350檢測，檢測，281 nm最大吸收；特殊吸收最最大吸收；特殊吸收最大 值 在大 值 在 5 4 0 n m 570nm ;紅外圖譜紅外圖譜;相關物檢查：與對相關物檢查：與對照品斑點一致照品斑點一致 紅外圖譜紅外圖譜含測：與對照含測：與對照品主峰品主峰RT一致一致 紅外圖譜紅外圖譜紫外紫外-可見與對可見與對照在相同照在相同nm有相有相同吸收同吸收 澄清度與澄清度與顏色顏色

17、 1號顏色號顏色2號號1.2g10ml 澄清無色澄清無色 1g10ml 澄清且不澄清且不得比對照溶液得比對照溶液Y5顏色顏色深深 0.2g20ml，澄清無色澄清無色 PH 0.20g/20ml水水溶液，溶液，6.58.0 三、酶及其輔酶類三、酶及其輔酶類l1、簡介：l 酶是生物體內(nèi)的催化劑，參與一切代謝過程。酶的組成為單純蛋白質(zhì)和結(jié)合蛋白質(zhì)。后者為酶蛋白，非蛋白部分為輔酶或輔基。酶又可以按照各種催化反應分類，如氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、異構(gòu)酶、合成酶等。2、2010年版藥典收載的酶及輔酶年版藥典收載的酶及輔酶類類藥品品種藥品品種l 胰酶（腸溶片、腸溶膠囊）、胰蛋白酶（注射用）、糜蛋白酶（注射

18、用）、胃蛋白酶（片、顆粒、含糖胃蛋白酶）、玻璃酸酶（注射用）、抑肽酶（注射用）、凝血酶凍干粉、尿激酶（注射用）、門冬酰胺酶、*（注射用）、細胞色素C（注射用、注射液）、烏司他丁*（溶液、注射用）、輔酶Q10（片、注射液、膠囊、軟膠囊）、激肽原酶*等34個品種。l *為新增品種3、收載的酶及輔酶類品種的基本、收載的酶及輔酶類品種的基本特點特點l國外藥典收載的品種，本次藥典大部分均已收入。l大部分是生物體某些組織中提取、純化和精制的；另一部分是微生物經(jīng)發(fā)酵、破壁后再從發(fā)酵液中提取、純化和精制而成的。l酶是蛋白質(zhì)，具有生物活性，通常用于提純和純化蛋白質(zhì)的方法都適用于酶。l質(zhì)量指標的制定中注意酶的總活

19、性和比活力純度的關系。l新增訂的藥品品種僅有3個。4、增修訂情況、增修訂情況l溶液的顏色l高分子物質(zhì)檢查l有關物質(zhì)l異常毒性l細菌內(nèi)毒素l微生物限度l無菌l過敏Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹抑肽酶該品種由上海藥檢所起草Chp2005、Bp2008/Ep6.0、USP32版均收載，本版繼續(xù)收載，但依據(jù)USP作了三個方面的修訂。1.檢查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有關物質(zhì)參照USP32采用附錄新技術毛細管電法：這是我國第一個用該法上藥典的品種。柱：石英毛細管分離柱毛細管溫度： 30電極液：磷酸二氫鉀溶液分離壓：12KV波長：214nm結(jié)果：去丙aa抑肽酶抑肽酶RT0.99（

20、上海所0.989） 去丙aa-去甘aa-抑肽酶抑肽酶RT0.98（上海所0.978）（兩相關物分離度1.40，去丙aa-抑肽酶抑肽酶分離度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8）Minutes024681012141618202224262830AU-0.006-0.004-0.0020.0000.0020.0040.0060.00818.41718.61718.829Minutes1516171819202122232425AU-0.006-0.004-0.0020.0000.0020.0040.0060.00818.35418.55418.792對照品圖供試品圖Chp2010版生化藥標準實例介紹版

21、生化藥標準實例介紹2.檢查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關物（參照USP32）色譜柱：TSK-GEL IC-Cation-SW柱溫：40 流動相：磷酸二氫鉀緩沖液流速：1.0ml/min 梯度洗程序結(jié)果：N-焦谷氨酰-抑肽酶抑肽酶 RT0.9（分離度2.2，抑肽酶拖尾因子0.92，最低檢出量：82ng）min05101520253035mAU0100200300400 DAD1 A, Sig=210,4 Ref=off (XMM021100000043.D) 15.082 16.046 18.037min05101520253035mAU0100200300400 DAD1 A, Sig=210,4

22、 Ref=off (XMM021100000008.D) 5.641 6.093 6.799 8.203 9.403 12.436 13.475 15.463 16.349 18.364 20.754對照品圖供試品圖Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹3.檢查高分子蛋白（USP32）關鍵是采用三根串聯(lián)Gel色譜柱（TSK-G4000SWXL柱）柱溫35，流速1.0ml/min,二聚體相對RT0.9，分離度1.4，拖尾因子0.91。 以上用新技術的三項檢查，有效控制抑肽酶產(chǎn)品的純度，使產(chǎn)品質(zhì)量有一個飛躍，使標準的制定達到或超過國外標準。min01020304050mAU 020

23、406080 VWD1 A, Wavelength=280 nm (XMM20090304000019.D) 26.753 28.520 29.840 32.291 33.321 34.704min01020304050mAU 020406080 VWD1 A, Wavelength=280 nm (XMM20090304000012.D) 28.522 30.036對照品圖供試品圖項目項目ChP 2010版版ChP 2005版版BP2008/EP6.0USP32性狀同右白色、微黃幾乎白色粉，易濕溶解性同右易溶于水、0.9%NaCl，不溶于乙醇、丙酮、乙醚溶于水溶液不溶于有機溶劑鑒別（1）胰蛋

24、白酶能使底物顯紫紅色，本品不能；（2）HPLC（同USP31）同左（1）（1）TLC法（2）抑制抑肽酶活性（1）TLC法（2）HPLC法pH同右5mg/ml ：5.07.0溶液澄清度同右2mg/ml ：溶液應澄清吸光度同右3U/ml：277nm最大吸收度0.8同左同左干燥失重0.1g真空干燥6.0%0.1g真空3h6.0%水分6.0%6.0%去丙aa抑肽酶和去丙aa-去甘aa 抑肽酶同USP32毛細管電泳法，分別7.5%和8.0%N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關物質(zhì)同USP32HPLC：已知1.0%，單個0.5%，未知總量1.0%高分子蛋白同USP32凝膠柱3.0%分子排阻，抑肽酶前不得有峰分子排阻

25、1.0%細菌內(nèi)毒素0.14 IU/抑肽酶同左熱原15 U/kg，應符合同左同左異常毒性同右4 U/ml，iv，應符合同左同左降壓1.5 U/kg，應符合抑肽酶國內(nèi)外質(zhì)量標準比較四、多肽、蛋白類四、多肽、蛋白類l1、簡介：l 肽類是氨基酸相互結(jié)合成多肽鏈。l 蛋白質(zhì)就是由多個氨基酸殘基組成的多肽鏈。一般以51個aa殘基，分子量為5733的Insulin劃分，高于此分子量的稱為蛋白，小于的為肽類。l肽鍵(peptide bond)的形成2、2010年版藥典收載的多肽及蛋年版藥典收載的多肽及蛋白類藥品品種白類藥品品種l 尿促性素、注射用HMg、絨促性素、注射用HCg、醋酸丙氨瑞林、注射用醋酸丙氨瑞林

26、、硫酸魚精蛋白及其注射液、五肽胃泌素及其注射液、縮宮素注射液、鮭降鈣素及其注射液、生長抑素及其注射用、甲狀腺素片、醋酸奧曲肽（注射液、注射用）、胸腺法新（注射用）、胰島素（系列產(chǎn)品）、重組人生長激素（注射用）等30個品種。3、收載多肽及蛋白類品種的基本、收載多肽及蛋白類品種的基本特點特點l本次藥典收載的產(chǎn)品中少部分為臟器提取的激素、肽類。安全性無法保障的品種如垂體后葉粉、注射液；縮宮素溶液；甲狀腺粉等刪除。l部分肽和小分子蛋白中的生物活性、生物鑒別由化學測定法代替。l本次藥典收載的合成肽類藥品，純度較高、質(zhì)量優(yōu)良，大部分質(zhì)量標準與國際接軌。生物測定法修訂情況修訂類型品種名稱修訂內(nèi)容（修訂原因）

27、刪除品種垂體后葉粉工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒有保障刪除品種垂體后葉注射液工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒有保障刪除品種縮宮素溶液工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒有保障刪除品種甲狀腺粉工藝粗糙；產(chǎn)品純度差、雜質(zhì)多、質(zhì)量低；安全沒有保障刪除部分生物測定胰島素豬胰島素注射液中性胰島素注射液精蛋白胰島素注射液刪除生物效價和兔血糖法，改用HPLC法測定，加限度試驗（動物減半，隨機涉及生物統(tǒng)計，結(jié)果為等效）簡化效價測定為活性鑒別。刪除生物測定硫酸魚精蛋白*國外用化學滴定法替代生物測定刪除生物測定縮宮素注射液*國外已用HPLC法代替生物測定。國內(nèi)目前產(chǎn)品因雜質(zhì)多，大

28、于30%，故未收載刪除生物測定肝素及其制劑*國外已用抗II和抗Xa（分光法）取代生物測定國內(nèi)尚待盡快改用分光法替代生物測定減少生物測定注射用重組人生長激素常規(guī)用HPLC法測定，同時一年進行至少一次生物測定減少生物測定鮭降鈣素常規(guī)用HPLC法測定，同時一年進行至少一次生物測定*暫未修訂4、增修訂情況、增修訂情況l高分子蛋白l有關物質(zhì)l相關蛋白l含量測定：HPLCl金屬離子：吸收光譜l細菌內(nèi)毒素l異常毒性l微生物限度l過敏Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹l（一）生長抑素lBP09；EP60有收載；ChP和USP均未收載l浙江省所參照各國藥典，進口標準等進行起草。l1、含量限度

29、：同國外使用HPLC法，C18柱，進樣量少，等度洗脫。l2、鑒別：TLC法，點樣量改成10ul，Rf=0.25，展開劑改為冰醋酸。l3、有關物質(zhì)：無中間體、粗品，故進行強制降解試驗，最低檢測限為0.1ugl4、氨基酸組成：經(jīng)方法學改進采用二硫代二丙酸先與半胱氨酸結(jié)合再水解進行測定。l5、醋酸：參照國內(nèi)外合成肽有關方法，用HPLC法進行方法學研究。210nm檢測，梯度洗脫，線性10-500ug/ml，回收率101.6%（n=3），檢測限2.5ng，定量限7.6ng。l6、細菌內(nèi)毒素：方法學研究包括限值與熱原對比，靈敏度、干擾試驗、確證試驗等。l7、殘留溶劑：進行了乙腈、甲醇、乙醚、三乙胺、二甲基

30、甲酰胺進行測定Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹（二）胰島素ChP2010版依據(jù)USP33、EP6.0標準，參照2005版分別對來源、性狀、鑒別 、檢查項下含量測定項、活性檢查作了修訂和補充 ，（該品種江蘇所起草，檢定所復核）1.肽圖分析：經(jīng)V8酶水解胰島素、對其分子碎片中的肽圖進行分析，該法能確定不同種屬的胰島素，該法專屬性強。人胰島素酶解-HPLC肽圖豬胰島素酶解-HPLC肽圖Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹胰島素2.相關蛋白：參照USP32、EP6.0由SDS-PAGE改為分離度較好的HPLC法，梯度洗脫及系統(tǒng)適用性試驗，使A21脫酰胺胰島素0.

31、5%，其它相關蛋白限值5.0%，而實測樣前者0.5%；后者3.94.0%。3.高分子蛋白：將一般柱色譜改為分子排阻色譜，色譜條件和系統(tǒng)實用性試驗均與ChP2005重組人胰島素標準一致。Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹胰島素 4.含量測定：用HPLC法代替生物測定法。ChP 2010版考慮到胰島素生物活性的重要性，故除改用HPLC法外，原料在檢查項中再加生物活性測定，參考USP32，動物數(shù)減半，生物統(tǒng)計簡化，作限度實驗，為常規(guī)測定用，該法既能省時、省力、省成本，又能有效控制質(zhì)量。五、多糖、脂類五、多糖、脂類l1、簡介：l 糖類是自然界中一類重要的含碳化合物，主要生物學功能是

32、在機體代謝中提供能源和碳源，也是組織和細胞結(jié)構(gòu)的主要組成成分。l 主要分類有單糖（簡單的多羥基醛或酮）和聚糖（單糖縮合而成，20個單糖結(jié)構(gòu)以下的為低聚糖，20個以上的為多糖。低聚糖：蔗糖、麥芽糖、乳糖 ；純多糖：右旋糖酐、香菇多糖；雜多糖：肝素、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸）2、2010年版藥典收載的糖及脂類年版藥典收載的糖及脂類品種品種l 硫酸軟骨素片、膠囊l 肝素鈉、注射液、乳膏l(xiāng) 右旋鐵、片、注射液l 右旋糖酐20、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液l 右旋糖酐40、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液l 右旋糖酐70、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液l 前列地爾、注射用前列地爾l 多烯酸乙酯、軟膠囊3、收載的糖及脂類

33、品種的主要特、收載的糖及脂類品種的主要特點點l采用高科技、新方法，是質(zhì)量顯著提高（如肝素、硫酸軟骨素等）l脂類，采用新的質(zhì)控指標是多烯酸乙酯的質(zhì)量與EP、JP等基本一致。4、增修訂情況、增修訂情況l金屬離子：吸收光譜l有關物質(zhì)：HPLCl比活l含量測定：HPLC、GCl比旋度l殘留溶劑l甲氧基苯胺值l不皂化值l細菌內(nèi)毒素Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹（一）肝素鈉 （中檢所起草）比活：從原150u/mg提高到170u/mg(USP32180，BP2008為150，JP15為130)產(chǎn)品純度提高比旋度：從原+35到+50（因雜質(zhì)嚴控，故該項提高）吸收度：260nm、280n

34、m是核酸和蛋白質(zhì)吸收峰，因雜質(zhì)嚴控，260nm 吸收度從原0.20到0.10，280nm吸收度從原0.15到0.10 說明雜質(zhì)減少。Na+：用原子吸收光譜限度9.5-12.5%（同EP）有機殘留：甲醇，乙醇，丙酮中國藥典規(guī)定細菌內(nèi)毒素：原1單位0.015Eu到1單位0.01Eu 以上六項標準均有十分明顯的提高Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹（一）肝素鈉 （中檢所起草）有關物質(zhì)：應用離子色譜HPLC，使雜質(zhì)硫酸皮膚軟骨素5.0%，多硫酸軟骨素不得檢出。 該法USP,EP,BP,JP均沒訂。美國藥典論壇可能要采用該法，因該法能十分清晰分析：肝素，硫酸皮膚素，多硫軟骨素，可代替

35、昂貴核磁共振及毛細管電泳。ChP 2010的該項目超過國際水平，有十分重要的意義。0.010.020.030.040.050.060.075.0-0.0500.1000.2000.30020090331 #22 modified by nicpbpqhHP-sysUV_VIS_1AUmin1 - 6.9032 - 21.1633 - 29.7734 - 42.6070.010.020.030.040.050.060.075.0-0.0500.1250.2500.3750.50020090331 #25 modified by nicpbpkp-0029-20UV_VIS_1AUmin1 - 2

36、3.3432 - 30.3273 - 42.310Chp2010版生化藥標準實例介紹版生化藥標準實例介紹（二）硫酸軟骨素（中檢所起草） 該品質(zhì)量指標有顯著性提高，從含量原來40%左右直提至90%（口服），直接與國際接軌。 除標準中來源豬、紅外、吸收度、細內(nèi)、有機殘留增修有提高外，主要含量測定：用專一性很強且靈敏的酶解法分離硫酸軟骨素呈A、B、C。再用離子色譜柱法很好分離硫酸軟骨素成B、C和A。使硫骨素含量為90%（固）、95%（固）、97%（注、眼）。 該法的特點，抵能測豬軟骨素（A/C有固定值 ），因國外來源很雜（牛、豬、禽、海洋動物），靈敏度優(yōu)于USP 和EP的電泳法、EP為滴定時，因無專

37、屬性使將其它多糖混雜于方法中，使硫酸軟骨素含量偏高。 2010版藥典生化藥完成情況總結(jié)版藥典生化藥完成情況總結(jié)l1、標準和品種完成情況l標準完成191個規(guī)格，增加36個，增加率（與chp2005年版比較）為22.6%l品種完成72個、增加12個新品種，增加率（與chp2005年版比較）為19.6%l刪除標準共5個 2、附錄和指導原則增訂情況、附錄和指導原則增訂情況 l（1）蛋白質(zhì)含量測定（提供六種可選擇的方法，適應各有關品種的選擇）l（2）多肽醋酸含量測法（為合成肽的檢查項提供統(tǒng)一的方法）l（3）電泳附錄中等點聚焦法（電泳附錄中增加先進技術及常用方法）l（4）氨基酸分析中的衍生法（為考慮各有關

38、單位習慣等）l l 其中的（4）為指導原則中增訂（1）蛋白質(zhì)含量測定方法）蛋白質(zhì)含量測定方法l第一法：凱氏定氮法（提供了非蛋白氮供試品制備方法）。靈敏度較低，適用于0.2-2.0mg氮。換算系數(shù)因蛋白質(zhì)所含氨基酸結(jié)構(gòu)差異會稍有區(qū)別。l第二法：福林酚法（Lowry法）。靈敏度高，測定范圍通?？蛇_20-250ug。干擾物質(zhì)較多（還原物質(zhì)、酚類、檸檬酸、硫酸銨、Tris緩沖液、甘氨酸、甘露醇、糖類、甘油等）l第三法：雙縮脲法?？焖?、靈敏度低，測定范圍為1-10mg。干擾物質(zhì)有硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸l第四法：2,2-聯(lián)喹啉-4,4-二羧酸法（BCA法）。靈敏度較高，測定范圍80-400ug。樣品中不能有還原劑和銅螯合物。l第五法：考馬斯亮藍法（Bradford法）。靈敏度高，可測定1-200ug蛋白量。干擾物質(zhì)有去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉等。樣品緩沖液呈強堿性也會影響顯色。l第六法：紫外分光光度 法。干擾因素多，常用于純化蛋白質(zhì)的微量測定（2）合成多肽中的醋酸測定法）合成多肽中的醋酸測定法l 采用液相色譜法測定合成多肽中的醋酸或