一種用松香制偽的沉香藥材鑒別研究

1、一種用松香制偽的沉香藥材鑒別研究        【摘要】     目的 識(shí)別一種偽品沉香及其制偽方法。方法 通過性狀特征、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、浸出物含量測(cè)定及揮發(fā)性成分的GCMS分析，比較正品沉香與偽品沉香的區(qū)別。結(jié)果 偽品沉香的醇浸出物含量符合中華人民共和國藥典(2005年版)一部“沉香”鑒別項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定，但其他檢驗(yàn)項(xiàng)目均與正品沉香存在較大差異。結(jié)論 偽品沉香由松香制偽，醇浸出物含量已不能作為評(píng)價(jià)沉香質(zhì)量的唯一指征，建議在中華人民共和國藥典“沉香”鑒別項(xiàng)下增加

2、薄層色譜鑒別。     【關(guān)鍵詞】  沉香;偽品沉香;中藥鑒別;GCMS    Identification of fake agarwood falsified with rosin GAO Xiaoxia1,TIAN Jiajia1,ZHANG Weimin2,WU Guanqing3(1. School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical College,Guangzhou,Guangdong 510006,China;

3、2. Guangdong Institute of Microbiology,Guangzhou,Guangdong 510070,China; 3. Xinyi Rare Agarwood Development Co.,Ltd.,Xinyi,Guangdong 525300,China)Abstract:Objective To establish a reliable and safe method to identify fake agarwood containing adulterants of other herbaceous materials. Methods The dif

4、ferences of fake agarwood and genuine agarwood samples were identified with appearance properties,microscopic identification,thinlayer chromatography identification,and extractive assay and volatile component quantification by GC/MS. Results Alcoholsoluble extractive assay of fake agarwood met the r

5、elevant requirements for the identification of agarwood in Chinese Pharmacopoeia 2005,whilst other identification items of fake agarwood were obviously different from those of genuine agarwood. Conclusion The fake agarwood was falsified with rosincoated or rosinimmersed resinfree wood of Aquilaria s

6、inensis (Lour.) Gilg. The content of alcoholsoluble extractive could not be the only identification standard for geniune agarwood. It was recommended that the TLC identification should be added to the identification characteristics for Aquilaria agallocha in Chinese Pharmacopoeia 2005.Key words:Agar

7、wood; fake agarwood; identify; GCMS正品沉香藥材分為國產(chǎn)沉香和進(jìn)口沉香，是中國、日本、印度及其他東南亞國家的傳統(tǒng)名貴藥材和天然香料。國產(chǎn)沉香為瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg.含樹脂的木材1，主產(chǎn)于海南、廣東、廣西、云南和臺(tái)灣等地。沉香藥材中樹脂所占比例越大，質(zhì)量則越好，反之則質(zhì)量差，因此一些不含樹脂或樹脂含量極低的劣等沉香不可供藥用。中華人民共和國藥典從1977年版起規(guī)定沉香的醇溶性浸出物不得少于15.0%2，2005年版規(guī)定不得少于10.0%1 。但由于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中浸出物含量測(cè)定專屬性較差，市場(chǎng)上出現(xiàn)了白木香或其

8、他木材表面涂黑色油性物質(zhì)以使其浸出物含量達(dá)到藥典規(guī)定的偽劣沉香3。故僅通過醇浸出物含量來評(píng)價(jià)沉香質(zhì)量已不可靠，單純的顯微鑒別和顯色反應(yīng)也略顯單薄。我國現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅規(guī)定了沉香的鑒別和浸出物含量，進(jìn)口藥材檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中則以TLC法對(duì)沉香進(jìn)行檢驗(yàn)，展開劑為苯丙酮(體積比91)，當(dāng)中的苯對(duì)人體及環(huán)境的危害極大，慢性中毒可導(dǎo)致再生障礙性貧血等疾病4。為了提高沉香的鑒別水平，同時(shí)避免展開劑對(duì)環(huán)境的污染及人體的傷害，本文通過正品沉香與偽品沉香在性狀特征、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、浸出物含量及揮發(fā)性成分等方面的比較，初步建立了國產(chǎn)沉香藥材的鑒別方法，為識(shí)別偽制沉香、完善沉香的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。1 材料與方法1.

9、1 材料與儀器國產(chǎn)沉香1批，由廣東省信宜市珍稀沉香發(fā)展有限公司提供5;市售沉香2批，購自廣東省信宜市藥材市場(chǎng);白木香木材2批，分別采自廣東省信宜市金垌信宜市珍稀沉香發(fā)展有限公司5年生實(shí)驗(yàn)林、廣東省信宜市鎮(zhèn)隆西溏古玉自然村1215年生白木香林。以上藥材經(jīng)由廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院藥用植物教研室鑒定，均為瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg.的木材，其中僅國產(chǎn)沉香含有樹脂。HP5890GCHP5972MS 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀;BS124S 電子分析天平(德國Sartorius);DL360A超聲波清洗器(上海之信儀器有限公司)。除硫酸為化學(xué)純外，其余試劑均為分析

10、純。1.2 薄層色譜鑒別取各批號(hào)藥材按藥典浸出物項(xiàng)下1所得醇溶性浸出液10 mL，精密量取，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)右掖际谷芙猓D(zhuǎn)移至1 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，0 保存?zhèn)溆?，作為供試品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5 L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷丙酮(體積比955)為展開劑，展距8.5 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。1.3 揮發(fā)性成分的提取取沉香藥材粉末約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷20 mL，密塞，搖勻，稱定重量，冷浸過夜，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷

11、，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)尤燃淄槭谷芙?，轉(zhuǎn)移至1 mL量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，即得。1.4 氣相色譜條件色譜柱為Varian Cp sil 5 CB(30 m×0.25 nm×0.25 m)彈性石英毛細(xì)管柱;進(jìn)樣口溫度260 ;載氣為高純度氦氣，流速1.0 mL/min;不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1 L。升溫程序：90 保持4 min，1 /min升至145 ，保持30 min， 2 /min升至230 ，保持60 min。1.5 質(zhì)譜條件離子源為EI源; 電子能量70 eV; 電離電壓 1 957 mV,離子源溫度17

12、2 ，溶劑延時(shí)4 min，質(zhì)量掃描范圍50500 m/z。2 結(jié) 果2.1 性狀、顯微鑒別和浸出物測(cè)定國產(chǎn)沉香為不規(guī)則的短段，表面褐棕色，具刀削痕，木塊表面有散布褐黑色斑紋，剖面木質(zhì)內(nèi)外一色，質(zhì)較實(shí)，氣微香，味淡。2批市售沉香為不規(guī)則的短段，表面黑褐色，剖面木質(zhì)白色，木質(zhì)紋理稍粗，氣香，味淡。2批白木香呈不規(guī)則的片塊形，剖面木質(zhì)白色，木質(zhì)紋理稍粗，氣微香，味淡。顯微特征：纖維管胞長梭形，多成束，紋孔相交或呈人字形;草酸鈣柱晶少見;韌型纖維單個(gè)散在，有單斜紋孔;導(dǎo)管為具緣紋孔。其中，國產(chǎn)沉香具黃棕色樹脂團(tuán)塊，市售沉香具黃褐色團(tuán)塊。2批市售沉香的顯微鑒別結(jié)果不符合沉香檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定。按中國藥典

13、(2005年版)1和國家藥品監(jiān)督管理局關(guān)于進(jìn)口沉香的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)6進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果見表1。3批沉香藥材醇溶性浸出物均符合中國藥典(2005年版)的有關(guān)規(guī)定，但2批市售沉香的顯色反應(yīng)結(jié)果均不符合沉香檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中為櫻紅色的有關(guān)規(guī)定。2批白木香木材醇溶性浸出物含量分別為3.29%和5.04%，不符合2005年版藥典所規(guī)定的不得少于10.0%要求。表1中火試試驗(yàn)為經(jīng)驗(yàn)鑒別法，一般以燃燒后具有特異香氣為優(yōu)。2.2 薄層色譜鑒別3批沉香藥材薄層色譜圖與白木香相比差異顯著，沉香藥材熒光斑點(diǎn)多;市售沉香熒光斑點(diǎn)的位置、顏色與國產(chǎn)沉香有較大區(qū)別，如在Rf 0.62處，市售沉香多1個(gè)亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn);Rf 0.25處，國產(chǎn)

14、沉香多1個(gè)粉紅色熒光斑點(diǎn)。見圖1。表1 沉香藥材主要性狀特征、顯微鑒別、理化鑒別、浸出物含量結(jié)果2.3 揮發(fā)性成分的GCMS分析通過HPMSD化學(xué)工作站，采用峰面積歸一化法計(jì)算各化合物相對(duì)百分含量，將所得各色譜峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)經(jīng)Wiley 138質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索。國產(chǎn)沉香分離得到57個(gè)峰，檢出其中30個(gè)，總相對(duì)含量為53.8%;市售沉香共分離得到21個(gè)峰，檢出其中10個(gè)，檢出成分占?xì)饣a(chǎn)物的58.7%;市售沉香共分離得到22個(gè)峰，檢出其中9個(gè)，檢出成分占?xì)饣a(chǎn)物的56.4%。2個(gè)白木香樣品分別檢出12和10個(gè)峰，檢出成分分別占?xì)饣a(chǎn)物總量的70.3%和81.7%。市售和國產(chǎn)沉香的主要化學(xué)成分為芳香族

15、化合物、倍半萜類、脂肪酸/烷/酯類及2(2苯乙基)色酮類。市售和國產(chǎn)沉香的芳香族化合物含量較高，分別為27.4%、49.43%和47.30%，種類也較多，分別為13、5和4種;倍半萜類成分含量相對(duì)較少，分別為4.16%、8.21%和6.55%。2個(gè)白木香木材樣品檢出的成分均為脂肪酸/烷類。3批沉香藥材和白木香的揮發(fā)性成分總離子流圖和GCMS分析結(jié)果見圖2、表2。3 討 論3.1 陳代賢等7.8提出沉香藥材的真?zhèn)舞b別，性狀與理化鑒別合格是重要的環(huán)節(jié)，否則浸出物含量高也是不合格品。筆者收集的沉香樣品其醇溶性浸出物含量均達(dá)到要求，但偽品沉香與正品沉香性狀特征、理化鑒別和薄層色譜鑒別結(jié)果均有較大差異。

16、本實(shí)驗(yàn)建立的薄層色譜鑒別法簡便、快捷、安全，可較直觀地反映沉香真?zhèn)?，故建議在下一版中國藥典“沉香”鑒別項(xiàng)中增加TLC鑒別，以提高檢驗(yàn)方法的專屬性。在提取方法的選擇上，分別對(duì)丙酮浸泡6、丙酮回流提取、乙醇回流提取1、微量升華所得物質(zhì)1用三氯甲烷溶解進(jìn)行了比較。結(jié)果表明浸出物測(cè)定項(xiàng)下的乙醇回流提取液，斑點(diǎn)展開清晰，分離效果好，且可以節(jié)省取樣量和提取時(shí)間，因此選擇乙醇回流提取法。同時(shí)對(duì)展開系統(tǒng)進(jìn)行了考察，取浸出物項(xiàng)下的乙醇回流提取液，分別比較三氯甲烷乙醚(體積比91)、三氯甲烷丙酮(體積比955)、正已烷乙酸乙酯(體積比53)、苯丙酮(體積比91)的展開效果。結(jié)果表明用三氯甲烷丙酮(體積比955)進(jìn)

17、行展開，斑點(diǎn)清晰、分離效果好，且熒光斑點(diǎn)多、信息量豐富，故選其作為展開劑。值得一提的是，文中所用的正品沉香藥材是收集于國產(chǎn)沉香主產(chǎn)區(qū)的廣東沉香5，是道地藥材。但是否適宜作為薄層色譜鑒別的對(duì)照藥材，以及有關(guān)對(duì)照品等問題尚需進(jìn)一步研究。3.2 據(jù)文獻(xiàn)9報(bào)道，白木香健康木材組織中以脂肪酸類成分為主，沉香中主要有芳香族、倍半萜、2(2苯乙基)色酮類化合物等成分。本實(shí)驗(yàn)表明市售沉香中無2(2苯乙基)色酮類和脂肪酸類成分，芳香族和倍半萜類化合物的組成也與正品沉香藥材不同。與富含樹脂的國產(chǎn)沉香相比，市售沉香中無重要的芳香族化合物芐基丙酮和對(duì)甲氧基芐基丙酮，以及沉香螺旋醇和白木香醛等特征性的倍半萜類化合物。根

18、據(jù)顯微鑒別和GCMS分析結(jié)果，推斷市售沉香應(yīng)來源于尚未結(jié)香的、無樹脂的白木香木材，為偽品沉香。與白木香相比，市售沉香的浸出物含量高，疑為用一些油脂類醇溶性物質(zhì)處理過。由于此類偽制品目前在市場(chǎng)上極為常見，為分析其制偽方法，對(duì)其進(jìn)行了GCMS分析。結(jié)果表明，市售沉香和在保留時(shí)間127 min時(shí)出現(xiàn)的色譜峰為脫氫松香酸，其含量分別為44.3%和32.0%，是兩者的主要成分。脫氫松香酸又稱去氫樅酸，是松脂中的松香經(jīng)催化異構(gòu)化后脫氫而得10。同時(shí)，2批市售沉香檢出物中的長葉環(huán)烯、刺伯烯、長葉龍腦、脫氫松香酸甲酯等均為松節(jié)油的主要成分11-13。且與白木香木材的揮發(fā)性成分相比，2批市售沉香中脂肪酸/烷類成

19、分極少甚至缺失。若如前推斷，偽品沉香系白木香木材用松香浸泡、涂抹而成，則在偽品沉香中應(yīng)檢測(cè)到與白木香相同或相似種類和比例的脂肪酸/烷類成分。因此推斷，偽品沉香為白木香木材加松香煎煮后曬干而成。    【參考文獻(xiàn)】  1國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典M.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:128.2國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1977:302.3郭桂明. 名貴中藥材沉香的資源現(xiàn)狀與真?zhèn)舞b別J. 北京中醫(yī),2006，25(5)：293-294.4中華人民共和國衛(wèi)生部.職業(yè)性苯中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)M. 北京：法律出版社，2002：1-3.5郭曉玲，田佳佳，高曉霞,等. 不同產(chǎn)區(qū)沉香藥材揮發(fā)油成分GCMS分析J.中藥材,2009，32(9)：1354-1358.6國家藥品監(jiān)督管理局.兒茶等43種進(jìn)口藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)M.北京：人