高效液相色譜思考題與練習題

1、思考題與練習題 1.高效液相色譜是如何實現高效、快速、靈敏的？解：    氣相色譜理論和技術上的成就為液相色譜的發(fā)展創(chuàng)造條件，從它的高效、高速和高靈敏度得到啟發(fā)，采用5-10m微粒固定相以提高柱效，采用高壓泵加快液體流動相的流速；設計高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測器，提高檢測靈敏度，克服經典液相色譜的缺點，從而達到高效、快速、靈敏。2.簡述液相色譜中引起色譜峰擴展的主要因素，如何減少譜帶擴張，提高柱效？解：    液相色譜中引起色譜峰擴展的主要因素為渦流擴散、流動相傳質、停留流動相傳質及柱外效應。 

2、   在液相色譜中要減少譜帶擴張，提高柱效，要減少填料顆粒直徑，減小填料孔穴深度，提高裝填的均勻性，采用低黏度溶劑作流動相，流速盡可能低，同時要盡可能采用死體積較小的進樣器、檢測器、接頭和傳輸管線等。3.色譜柱A柱長為15cm，載體粒度為5m。另一B柱長為30cm，載體粒度為10m。兩柱的柱效相等嗎？解：    l=L/dp    lA=15/0.0005=30000    lB= 30/0.0010=30000A柱的折合柱長為30000，B柱的

3、折合柱長也為30000，表明組分在兩根柱內從柱入口到出口都經過30000個載體顆粒，兩柱的柱效相等。4.流動相為什么要脫氣？常用的脫氣方法有拿幾種？解：流動相中溶解氣體存在以下幾個方面的害處 （1）氣泡進入檢測器，引起光吸收或電信號的變化，基線突然跳動，干擾檢測；（2）溶解在溶劑中的氣體進入色譜柱時，可能與流動相或固定相發(fā)生化學反應；（3） 溶解氣體還會引起某些樣品的氧化降解，對分離和分析結果帶來誤差。因此，使用前必須進行脫氣處理。 常用的脫氣法有以下幾種: （1）加熱脫氣法；（2）抽吸脫氣法（3）吹氦脫氣法；（4） 超聲波振蕩脫氣法。5.在液相色譜中。常用作固定相，又可用作鍵合相基體的物質是

4、A. 分子篩B. 硅膠 C. 氧化鋁D. 活性炭 解：B硅膠要形成化學鍵合固定相，所用的基質材料應有某種化學反應活性，在四種固體固定相中只有硅膠含有硅醇基，是能進行鍵合的活性官能團。6.在150×2mm硅膠柱流動相為己烷/甲醇（150:2），紫外檢測器色譜條件下分離丙烯酰胺，判斷以下組分的出峰次序，為什么？ A.B.解：    在給定的色譜條件下，組分B先出峰，組分A后出峰。以硅膠為固定相，己烷/甲醇（150:2）為流動相，該體系為正相色譜，樣品的極性A>B，在正相色譜體系極性小的組分先出峰，極性大的組分后出峰，所以出峰次序為B先出，A后

5、出。7.在硅膠柱上，用甲苯為流動相，某組分的保留時間為30min，如果改用四氯化碳或乙醚為流動相，試指出選用哪中溶劑能減少該組分的保留時間？為什么？ 解：    該體系為正向色譜體系。在該體系中流動相的極性增大保留值減少。流動相甲苯、四氯化碳及乙醚的溶劑強度參數分別是0.29、0.18、0.38，因此選用溶劑強度參數大于甲苯的乙醚，可縮短該化合物的保留時間。8.為什么體積排阻色譜中任何組分的分配系數必須符合0K1？如果K>1說明什么問題?解：    因為組分的分配系數為K=Cs/Cm,Cs與Cm分別為組分在固

6、定相和流動相中的濃度,當分子直徑大于孔徑時,此時Cm=0,K=0.當分子直徑小于固定相孔徑時,組分向空隙內流動相擴散,達到平衡時,一半組分在空隙內,一半組分在空隙外,此時K=1.0,若分子直徑介于以上兩種極限情況之間,K一定介于0與1之間,可見體積排阻色譜中,任何祖父呢的分配系數為0K1,如果K>1說明此時的分離方式已不是純粹的體積排阻色譜,其分離過程受到其他作用力(如吸附)的支配.9.為了測定鄰氨基苯酚中微量雜質苯胺,現有下列固定相:硅膠,ODS鍵合相,流動相有:水-甲醇,異丙醚-己烷,應選用哪種固定相,流動相?為什么?解：    鄰氨基苯酚中微

7、量雜質苯胺測定,為了良好分離,應讓苯胺先出峰,由于苯胺的極性小于鄰氨基苯酚,因此應采用正相色譜法,選用硅膠為固定相,異丙醚-己烷為流動相.10.在ODS鍵合相固定相,甲醇-水為流動相時試判斷四種苯并二氮雜苯的出現峰順序.為什么? 1.2. 3.4. 解：色譜條件為反相鍵合相色譜體系,在反相色譜體系中極性大的組分k小,首先出峰,按四種苯并二氮雜苯的結構,出峰順序為4-3-2-1.窗體頂端自測題 1.在GC和LC中, 影響柱選擇性的不同的因素是A.固定相的種類； B. 柱溫；C流動相的種類；D分配比。 2.在液相色譜中, 范氏方程中的哪一項對柱效能的影響可以忽略不計? A渦流擴散項；B分子擴散項；

8、   C固定相傳質阻力項；D流動相中的傳質阻力。3.在液相色譜中, 某組分的保留值大小實際反映了哪些部分的分子間作用力？ A組分與流動相；B組分與固定相；   C組分與流動相和固定相；D組分與組分。 4.在液-固色譜法中, 以硅膠為固定相, 對以下四組分, 最后流出色譜柱的組分可能是A.苯酚； B. 苯胺；C鄰羥基苯胺；D對羥基苯胺。  5.在液-固色譜法中, 以硅膠為固定相, 對以下四組分, 最后流出色譜柱的組分可能是A.苯酚； B. 苯胺；C鄰羥基苯胺；D對羥基苯胺。  6.用液相色譜法分離長鏈飽和烷烴的混合物, 應采用下述哪一種檢測器?A

9、紫外吸收檢測器；B示差折光檢測器；   C熒光檢測器；D電化學檢測器。 7.液液色譜法中的反相液相色譜法，其固定相、流動相和分離化合物的性質分別為：A非極性、極性和非極性；      B極性、非極性和非極性；C極性、非極性和極性；D非極性、極性和離子化合物。 8.若在一個 1m 長的色譜柱上測得兩組分的分離度為 0.68，若要使它們完全分離，則柱長 (m) 至少應為：A.0.5； B. 2；C5；D9。  9.在液相色譜中，梯度洗脫最宜于分離：A幾何異構體；    B沸點相近，官能團相同的試樣；C沸點相差大的試樣；D分配比變化范圍寬的試樣。 10.液液色譜法中的反相液相色譜法，其固定相、流動相和分離化合物的性質分別為：A. 非極性、極